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時(shí)間：2023-06-21 08:43:55
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白癜風(fēng)是一種皮膚色素脫失、呈現(xiàn)白色斑的皮膚病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國約有3000萬的白癜風(fēng)患者。中醫(yī)理論認(rèn)為，白癜風(fēng)雖長在外表，根卻在臟腑。系因于情志不舒、氣血不和、脈絡(luò)阻滯不通、毛孔閉塞、肌膚失養(yǎng)所致。
白癜風(fēng)的病因:主要是臟腑失和,肝郁失疏,血熱、外受風(fēng)溫、濕熱之邪停留在肌膚,導(dǎo)致氣血失調(diào),血不營養(yǎng)肌膚和七情內(nèi)傷,風(fēng)邪搏于肌表,日久濕熱內(nèi)蘊(yùn),阻遏氣血津液在人體正常分布流通,促使肝腎不足,肌膚失養(yǎng),毛竅因子閉塞死亡,氣滯則形成白癜風(fēng)。其病因與遺傳,免疫功能異常,內(nèi)分泌代謝功能紊亂,黑色素細(xì)胞自身破壞,氨酸、銅離子缺乏,精神緊張,微循環(huán)障礙,神經(jīng)調(diào)節(jié)功能異常,外傷,化學(xué)物質(zhì)、烈日曝曬等有密切聯(lián)系。
中藥白癜風(fēng)顆粒臨床上治療白癜風(fēng)的效果比較好。白癜風(fēng)顆粒由補(bǔ)骨脂、黃芪、紅花、當(dāng)歸、川芎等15味中藥組成。具有益氣行滯、活血解毒、利濕消斑，驅(qū)風(fēng)止癢之功效，在本院皮膚科應(yīng)用多年，證實(shí)對(duì)白癜風(fēng)等疾病有效。為了控制白癜風(fēng)顆粒的質(zhì)量，保證臨床用藥效果，本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC測(cè)定白癜風(fēng)顆粒中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的方法。經(jīng)方法學(xué)考察證實(shí)該方法特異性高，回收率和精密度好，結(jié)果滿意。
儀器與試劑
Waters 600高效液相色譜儀；Waters[LL] 2487紫外、可見波長檢測(cè)器；Breeze色譜工作站；十萬分之一微量分析天平；補(bǔ)骨脂素對(duì)照品(110730-200309)和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品(0738-200108)購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純，白癜風(fēng)顆粒由本院自制。
方法與結(jié)果
色譜條件1～2：色譜柱,ReliaSil．C18(4．6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇,水(47：53)；流速,1.0ml/min；檢測(cè)波長,245nm；柱溫室溫，進(jìn)樣量μl。對(duì)照品溶液的制備：精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品10．42mg，異補(bǔ)骨脂素10．92mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1．5ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備：取本品粉末約0．5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
陰性對(duì)照品溶液的制備：按處方制備取不含補(bǔ)骨脂藥材的樣品顆粒劑，按供試品溶液的制備方法制成相應(yīng)的陰性樣品溶液。線性關(guān)系考察：精密吸取補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素混合對(duì)照品溶液2、4、6、8、10μl分別注入液相色譜儀，測(cè)定補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素色譜峰面積。以補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=1．25×103+7．55×106x，r=0．9997。
結(jié)果表明，補(bǔ)骨脂素在0．031264~15630 μg具有良好的線性關(guān)系，異補(bǔ)骨脂素在0．03276~0．16380 μg具有良好的線性關(guān)系。
精密度實(shí)驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液(批號(hào)：050502)5μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果其RSD分別為0．76％和1．29％。
穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液5μL，分別于0、2、4、24、36小時(shí)測(cè)定峰面積，計(jì)算得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素峰面積的RSD分別為1．99％和1．62％，表明對(duì)照品補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素在36小時(shí)穩(wěn)定。
重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：取樣品，精密稱定5份，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定計(jì)算補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，其RSD為0．59％。
回收率實(shí)驗(yàn)：采用加樣回收法。取批號(hào)為050501的樣品5份，每份0．25g，置具塞錐形瓶中，各精密加入補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素混合對(duì)照品0．14mg，制備供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定。結(jié)果補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素平均加樣回收率為99．04％，RSD為1．50％。
樣品測(cè)定：取3批白癜風(fēng)顆粒制備供試品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5μL，進(jìn)樣，測(cè)定，結(jié)果見表1。根據(jù)結(jié)果，暫定本品以干燥品計(jì)，含補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總含量不得少于0．22mg／g。
討 論
流動(dòng)相的確定：本實(shí)驗(yàn)曾選擇乙醇-水溶液系統(tǒng)，結(jié)果不太理想，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的出峰區(qū)間有干擾，峰形欠佳。而采用本實(shí)驗(yàn)的色譜條件即甲醇-水系統(tǒng)，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的峰形得到明顯的改善，且干擾減少 。
Abstract:Objective An RP-HPLC method was established for determination of psoralen and isopsoralen in Buguzhi tincture.Methods The XTerra RP18 (4.6 mm×250 mm，5 μm) was used. The mobile phase consisted of acetonitrile-water (0.28∶0.52). The detection wave length was 247 nm.Results The retention time of psoralen and isopsoralen angelicin was 14.326 min and 15.259 min respectively. The calibration range of psoralen was 0.88～14.08 mg·L-1. (r=0.9998) and that of isopsoralen was 0.80～12.80 mg·L-1（r=0.9999）; the average recovery was 99.5％（RSD=1.10％） and 100.4％（RSD=0.59％） respectively.Conclusion The method， being simple， rapid and accurate， can be used to examine the quality of Buguzhi tincture.
Key words: Buguzhi tincture； psoralen； isopsoralen； RP-HPLC
補(bǔ)骨脂酊是中藥補(bǔ)骨脂通過提取制成的酊劑，其含有補(bǔ)骨脂素(psoralen)、異補(bǔ)骨脂素(isopsoralen)等有效成分，有鎮(zhèn)靜、解痙、抗癌和光敏等作用［1］。其有效成分能在黑色素細(xì)胞中濃集，在紫外線的作用下，能增加酪氨酸酶的活性，從而增加色素的生物合成能力，用于治療白癜風(fēng)［2］。補(bǔ)骨脂的有效成分測(cè)定方法有雙波長薄層掃描法［3］、高效液相色譜法［4-5］等。補(bǔ)骨脂酊是我院使用多年的中藥制劑，僅有定性鑒別，而無定量測(cè)定方法。本實(shí)驗(yàn)建立反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測(cè)定其有效成分，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果較滿意，可作為補(bǔ)骨脂酊的質(zhì)量控制。
1 儀器和試藥
1.1 儀器 美國Waters高效液相色譜儀（包括1525二元高壓梯度泵、717自動(dòng)進(jìn)樣器、2487雙波長檢測(cè)器）；BP 618型電子分析天平（德國）；KS-80D型超聲清洗機(jī)（寧波海曙科生超聲設(shè)備有限公司）；XW-80A旋渦混合器（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠）；pHS-3C型精密pH計(jì)（上海雷磁儀器廠）。
1.2 試藥 補(bǔ)骨脂素中藥化學(xué)對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110739－200511）；異補(bǔ)骨脂素中藥化學(xué)對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110738－200309）；補(bǔ)骨脂酊為本院制備，甲醇、乙腈為色譜純。
2 方法和結(jié)果
2.1 色譜條件 色譜柱：Waters XTerra RP18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈－水（0.28∶0.52），流速為0.8 ml·min-1；，檢測(cè)波長為247 nm；靈敏度為2.000AUFS；柱溫為35℃；進(jìn)樣量10 μl。理論板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于14000，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的分離度R大于1.8。
2.2 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取對(duì)照品補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素約20 mg ，各置50 ml容量瓶中， 加入甲醇溶解并定容至50 ml，渦旋2 min，即得每1 ml中含補(bǔ)骨脂素0.44 mg和異補(bǔ)骨脂素0.40 mg的儲(chǔ)備液，各吸取適量儲(chǔ)備液混合稀釋。
2.3 供試品溶液的制備 精密量取補(bǔ)骨脂酊1 ml，置50 ml容量瓶中， 加乙腈至刻度， 搖勻，作為供試品溶液。同法制備不含補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的空白樣品溶液。 轉(zhuǎn)貼于
2.4 HPLC方法專屬性 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白樣品溶液適量進(jìn)樣。對(duì)照品溶液和供試品溶液中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素組分完全分離， 分離度R大于1.8，保留時(shí)間分別為14.326 min和15.259 min，無雜峰干擾測(cè)定?？瞻讟悠啡芤涸谘a(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素色譜位置處無吸收峰。見圖1。
2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取0.44 g·L-1補(bǔ)骨脂素和0.40 g·L-1異補(bǔ)骨脂素的對(duì)照品溶液20 μl、40 μl、80 μl、160 μl、320 μl，放入同一10 ml容量瓶中，用乙腈分別稀釋至刻度，取10 μl進(jìn)樣，以濃度（C）對(duì)應(yīng)峰面積（A）進(jìn)行線性回歸。補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的回歸方程如下。
補(bǔ)骨脂素：A1=－15426+102653C1，r＝0.9998，n＝5。
異補(bǔ)骨脂：A2=－6963+98991C2， r＝0.9999，n＝5。
結(jié)果表明：補(bǔ)骨脂素濃度在0.88～14.08 mg·L-1范圍內(nèi)，異補(bǔ)骨脂素濃度在0.80～12.80 mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。圖1 高效液相色譜圖
峰1.補(bǔ)骨脂素；峰2.異補(bǔ)骨脂素
2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的對(duì)照品溶液適量， 放入同一容量瓶并用乙腈稀釋至刻度，按“2.1色譜條件”重復(fù)進(jìn)樣5次， 根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算，濃度3.52 mg·L-1和14.08 mg·L-1補(bǔ)骨脂素的RSD分別為0.68％和0.46％；濃度3.20 mg·L-1和12.8 mg·L-1異補(bǔ)骨脂素的RSD分別為0.58％和0.41％。
2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，按“2.1色譜條件”進(jìn)樣，分別于0、1、2、4、8、12、24 h各時(shí)點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果補(bǔ)骨脂素的RSD為1.37％，異補(bǔ)骨脂素的RSD為1.14％，表明樣品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密吸取已知含量（批號(hào)：080124）的樣品適量，分別加入不同量的對(duì)照品溶液， 用乙腈稀釋至刻度，每個(gè)濃度稀釋2份進(jìn)行測(cè)定，按“2.1色譜條件”操作，計(jì)算補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的回收率， 結(jié)果見表1。表1 補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的回收率
2.9 樣品測(cè)定 精密吸取供試品溶液各0.1 ml， 用乙腈稀釋至5 ml，按照“2.1色譜條件”各進(jìn)10 μl，以峰面積帶入回歸方程計(jì)算樣品的含量，結(jié)果見表2。 表2 樣品中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量
Determination of the Psoralen and Isopsorlen in Bupi Yichang Capsules by HPLC
WANG Jing-can1, KE Xue2, LIU Li-fang1*.
1 Department of Chinese Pharmaceutical Analysis, 2 Department of Pharmaceutics China Pharmaceutical University, Nanjing, 210038, China
【Abstract】 Oobjective To establish the method for determination of psoralen and isopsoralen in Bupi Yichang Capsules. Methods The Hedera ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) was used. The mobile phase consisted of methanol-water (58∶42).The flow rate was 0.8 ml/min.The detection wavelength was set at 245 nm. RESULTS The linear range of psoralen was 0.020-0.30 μg, r=0.999 8,the average recovery was 100.61% with RSD of 1.86%. The linear range of isopsoralen was 0.038-0.266 μg, r=0.999 9, the average recovery was 100.76% with RSD of 1.60%. CONCLUSION It is a simple and accurate method for the quality control of Bupi Yichang Capsules.
【Key words】 Bupi Yichang Capsules;psoralen; isopsoralen；HPLC
補(bǔ)脾益腸膠囊是將原補(bǔ)脾益腸丸中生藥組分經(jīng)提取后制得，由黃芪、補(bǔ)骨脂、黨參、白芍、白術(shù)、延胡索、當(dāng)歸、砂仁、木香、防風(fēng)、赤石脂、甘草等組成，具有補(bǔ)中益氣，健脾和胃，澀腸止瀉，止痛止血，生肌消腫作用。用于脾虛泄瀉癥，臨床表現(xiàn)為腹瀉腹痛、腹脹、腸鳴、黏液血便或陽虛便秘等證，以及慢性結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸過敏見有上述證候者[1]。原補(bǔ)脾益腸丸為胃腸分溶型丸劑，外層在胃中溶散，在腸中吸收，以發(fā)揮全身的作用治其本，而內(nèi)層在腸道中溶散，提高病灶部位的藥物濃度，以提高藥物局部作用治其標(biāo)。補(bǔ)脾益腸膠囊保留了原制劑的這一特點(diǎn)，將胃溶部分提取物包薄膜衣，腸溶部分提取物包腸溶衣后裝入膠囊。
胃溶部分中的黃芪、黨參為方中君藥。腸溶部分中的補(bǔ)骨脂為方中臣藥，除甘草為使藥外，其余均為佐藥。補(bǔ)骨脂具有溫腎助陽，納氣，止瀉作用[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，補(bǔ)骨脂提取物具有抗菌、抗病毒作用，其水提液具有增強(qiáng)免疫的作用[3]。此外，補(bǔ)骨脂與赤石脂組成的止血復(fù)方中發(fā)現(xiàn)有效成分為補(bǔ)骨脂素[4]，因此本文以補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素為本方中腸溶部分的指標(biāo)性成分，采用高效液相色譜法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，以控制產(chǎn)品的質(zhì)量。
1 儀器與試藥
1.1 儀器SHIMADZU LC-10ATvp型高效液相色譜儀（日本島津），SPD-10Avp型紫外檢測(cè)器（日本島津）；Hedera ODS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱；KQ-100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BS124S電子天平（德國賽多利斯）。
1.2 試藥補(bǔ)脾益腸膠囊浸膏（深圳三九醫(yī)藥業(yè)股份有限公司提供），補(bǔ)骨脂素（批號(hào)：110739-200613，中國藥品生物制品檢定所），異補(bǔ)骨脂素（批號(hào)：110738-200511，中國藥品生物制品檢定所），色譜純甲醇，純凈水。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
流動(dòng)相：甲醇∶水（58∶42）；流速：0.8 ml/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長：245 nm[5]。
2.2 供試品溶液的制備
取補(bǔ)脾益腸膠囊浸膏1 g，精密稱定，置50 ml容量瓶中，加甲醇約45 ml，超聲30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液10 ml即得。
2.3 對(duì)照品溶液的制備
分別精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升各含0.1 mg的對(duì)照品溶液，臨用時(shí)稀釋到適當(dāng)濃度。
2.4 空白對(duì)照試驗(yàn)
按本制劑的處方、工藝提取不含補(bǔ)骨脂藥材的浸膏，按上述2.2方法制備陰性對(duì)照溶液。照上述色譜條件，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀。
結(jié)果見圖1。補(bǔ)骨脂素的保留時(shí)間為10.4 min，異補(bǔ)骨脂素的保留時(shí)間為11.7 min，二者的分離度為3.0，理論塔板數(shù)均在15 000以上，表明補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素能夠良好的分離，且方中的其他成分不干擾補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的測(cè)定。
圖1 HPLC圖譜
A.對(duì)照品溶液（1.補(bǔ)骨脂素 2.異補(bǔ)骨脂素）B.供試品溶液 C.陰性對(duì)照溶液
2.4 方法學(xué)考察
2.4.1 線性關(guān)系的考察
分別取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，精密稱定后，以甲醇溶解并定容于同一容量瓶中制成每1ml中各含補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素100μg和200μg的混合對(duì)照品溶液作為儲(chǔ)備液。精密吸取儲(chǔ)備液，以甲醇稀釋配制成補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素濃度分別為1.0、2.0、5.0、8.0、10.0、12.0、15.0；1.9、3.8、5.7、7.6、9.5、11.4、13.3 μg/ml的溶液，分別吸取上述對(duì)照品溶液20 μl，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積A為縱坐標(biāo)，溶液濃度C(μg/ml)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。其中，補(bǔ)骨脂素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=209 056C+3485.1，r=0. 999 8，線性范圍為0.020~0.30 μg；異補(bǔ)骨脂素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=201 857C－33777，r為0.999 9，線性范圍為0.038~0.266 μg。
2.4.2 精密度考察
取對(duì)照品溶液，按上述色譜條件分別重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果補(bǔ)骨脂素RSD為0.20%，異補(bǔ)骨脂素RSD為0.23%，表明該方法的精密度良好。
2.4.3 穩(wěn)定性考察
取新鮮配制的供試品溶液分別于0、2、4、6、8、10、24 h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果補(bǔ)骨脂素RSD為1.10%，異補(bǔ)骨脂素RSD為1.45%，說明供試品溶液在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。
2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)
精密稱取補(bǔ)脾益腸膠囊腸溶浸膏5份，按2.2方法配成供試品溶液，測(cè)定含量，結(jié)果補(bǔ)骨脂素的平均含量為2.663 mg/g，RSD為2.16%，異補(bǔ)骨脂素的平均含量為1.439 mg/g，RSD為2.79%，說明重現(xiàn)性較好。
2.4.5 加樣回收試驗(yàn)
精密稱取已知含量的樣品5份，分別精密加入補(bǔ)骨脂素對(duì)照品和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，按2.2方法制備5份，分別進(jìn)樣，測(cè)定。結(jié)果補(bǔ)骨脂素平均回收率為100.61%，RSD為1.86% (n=5)，異補(bǔ)骨脂素平均回收率為100.76%，RSD為1.60% (n=5)，見表1。
3 討論
在供試品溶液的制備過程中，對(duì)超聲時(shí)間進(jìn)行了考察，在超聲0、10、30 min后樣品中補(bǔ)骨脂素的含量分別為2.363、2.534、2.6 mg/g；異補(bǔ)骨脂素的含量分別為1.221、1.318、1.4 mg/g，再延長超聲時(shí)間，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量不再增加，因此供試品溶液在制備時(shí)超聲時(shí)間選擇為30 min。
本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定補(bǔ)脾益腸膠囊中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，本法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可以用于控制補(bǔ)脾益腸膠囊的質(zhì)量。
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[中圖分類號(hào)] R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2016）01（b）-0008-03
Content of stachydrine hydrochloride from Motherwort granule determined by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
LI Ming
Institute for Food and Drug Control of Beihai in the Guangxi Zhuang Autonomous Region，Beihai 536000，China
[Abstract] Objective To establish a method of high performance liquid chromatography （HPLC）-tandem mass spectrometry determining the content of stachydrine hydrochloride from Motherwort granule. Methods The chromatographic conditions were Agilent SB-C18 column （50 mm×2.1 mm，1.8 μm），acetonitrile to 0.2% glacial acetic acid （70U30） as the mobile phase，and a flow rate of 0.3 ml/min.Positive ion electrospray ionization（ESI+） was applied for mass spectrometric detection under multiple reaction monitoring（MRM） mode.The monitored ions （m/z） was 144/58，144/84 respectively. Results The concentration of stachydrine hydrochloride being within 0.2 μg/ml to 10.0 μg/ml had a good linear relationship with the peak area.The r value was 0.9992，and the average recovery was 102.6% and the value of RSD was 1.5%（n=6）. Conclusion The method is fast，simple，specific，and accurate in outcome，which can be used for quality control of Motherwort granule.
[Key words] Motherwort granule；Stachydrine hydrochloride；High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
益母草顆粒是由益母草水提取物為主要原料加蔗糖、糊精等輔料經(jīng)適當(dāng)加工而成的婦科常用中成藥，具有活血調(diào)經(jīng)止痛等功能，臨床上用于治療經(jīng)閉、痛經(jīng)、產(chǎn)后瘀血腹痛及產(chǎn)后惡露不絕、經(jīng)量少、淋漓不凈、產(chǎn)后出血時(shí)間過長、產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全等。益母草中的主要活性成分為鹽酸水蘇堿。益母草顆粒為《中國藥典》2010年版一部收載品種[1]，其對(duì)益母草中的鹽酸水蘇堿含量測(cè)定采用薄層色譜掃描。該方法影響因素多，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性差。部分文獻(xiàn)[2-20]采用高效液相色譜法，選用紫外檢測(cè)器[2-14]、蒸發(fā)光檢測(cè)器[15-19]、示差折光檢測(cè)器[20]測(cè)定益母草制劑中鹽酸水蘇堿的含量。其大多數(shù)使用較特別的色譜柱，如氨基色譜柱、磺酸基陽離子交換色譜柱、丙烯酰胺色譜柱，且樣品提取過程復(fù)雜，操作不簡(jiǎn)便。本文采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，利用質(zhì)譜較高的選擇性和專一性，只用普通的C18反相色譜柱，只需簡(jiǎn)單的超聲提取即能完成對(duì)益母草顆粒中鹽酸水蘇堿含量的測(cè)定，而該方法國內(nèi)文獻(xiàn)未被報(bào)道過。測(cè)定結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。
1 儀器與試劑
美國Agilent 1290高效液相色譜儀，Agilent 6460三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜；AX205DU電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；SK250超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)儀器有限公司，250 W，35 kHz）。
鹽酸水蘇堿對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究所，含量：99.0%，批號(hào)：110712-201010）供含量測(cè)定用；益母草顆粒（A廠：批號(hào)130304；B廠：批號(hào)140402；C廠：批號(hào)130402），為市售品；乙腈為色譜純，水為市售娃哈哈純凈水，冰乙酸為優(yōu)級(jí)純，其余檢測(cè)用試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜及質(zhì)譜條件
2.1.1 色譜條件 色譜柱為Agilent SB-C18柱（50 mm×2.1 mm）；流動(dòng)相為乙腈-0.2%冰乙酸（70U30）；流速為0.3 ml/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為5 μl。
2.1.2 質(zhì)譜條件 離子源為大氣壓電噴霧離子源（ESI源），選擇掃描方式為正離子，采用全掃描、選擇離子掃描及二級(jí)全掃描；霧化氣壓力：30 Psi（1 Psi=6890 Pa），干燥氣溫度：300℃，輔助氣（N2）流速：8.0 L/min，離子源Vcap毛細(xì)管電壓：4000 V，含量測(cè)定監(jiān)測(cè)方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM），鹽酸水蘇堿定性離子質(zhì)荷比（m/z）144/84，定量離子質(zhì)荷比144/58；定性和定量離子對(duì)應(yīng)的碰撞能量壓分別為22、26 V，碎裂電壓均為128 V。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸水蘇堿對(duì)照品12.55 mg，置25 ml量瓶中，加70%乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得濃度為0.497 mg/ml對(duì)照品貯備溶液。精密量取對(duì)照品貯備液1 ml，置25 ml量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為19.9 μg/ml的對(duì)照品使用溶液。
2.2.2 供試品溶液的制備 取本品5包顆粒內(nèi)容物，研細(xì)混勻，稱取約5 g重量，精密稱定，置50 ml量瓶中，加70%乙醇約40 ml，超聲處理（功率250 W，頻率35 kHz）20 min，取出放冷至室溫，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻、過濾，精密量取續(xù)濾液2 ml置100 ml量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜（0.45 μm）過濾，取續(xù)濾液，即得。
2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按藥品標(biāo)準(zhǔn)中的處方比例和制法制備不含益母草的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法操作制備陰性對(duì)照溶液。
2.3 專屬性考察試驗(yàn)
精密量取上述對(duì)照品使用溶液，供試品溶液，陰性對(duì)照溶液各5 μl注入高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，按上述色譜及質(zhì)譜條件下測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果鹽酸水蘇堿的保留時(shí)間約為3.5 min，溶液內(nèi)的其他雜質(zhì)不干擾樣品中的鹽酸水蘇堿分離測(cè)定，陰性樣品在鹽酸水蘇堿色譜峰相應(yīng)的保留時(shí)間處未見干擾峰出現(xiàn)，表明方法的專屬性良好（圖1）。
2.4 線性關(guān)系考察試驗(yàn)
精密量取上述對(duì)照品使用溶液0.1、0.5、1、2、5 ml分別置10 ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，搖勻，即得一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照品液。取每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照品液各5 μl分別注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下測(cè)定，記錄峰面積，進(jìn)行線性考察。以濃度（X）對(duì)峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=31.96X+3.94×103（r=0.9992）。結(jié)果表明，鹽酸水蘇堿在0.2～10.0 μg/ml的濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。
2.5 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批號(hào)樣品（批號(hào)：130304）共6份，按供試品溶液的制備方法平行配制6份供試品溶液，同法測(cè)定，測(cè)得平均含量為6.0265 mg/g，RSD為1.67%，表明方法有較好的重復(fù)性。
2.6 精密度試驗(yàn)
取鹽酸水蘇堿對(duì)照品使用溶液5 μl，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果峰面積的RSD為0.77%，表明分析方法精密度良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取同一份供試品溶液5 μl，分別在0、2、4、6、8、10、12、16、20 h按上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果鹽酸水蘇堿峰面積RSD為1.1%，表明在20 h內(nèi)供試品溶液中鹽酸水蘇堿峰面積無明顯變化，供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.8 加樣回收率試驗(yàn)
取同一批號(hào)（批號(hào)：130304）的已知含量樣品5包，取顆粒研細(xì)混勻，稱取6份約2.5 g細(xì)粉，精密稱定，分別置50 ml量瓶中，分別精密加入鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量，分別加70%乙醇約40 ml，超聲處理20 min，取出放冷，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻、過濾，分別取續(xù)濾液2.00 ml，用70%乙醇定容至100 ml量瓶，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為回收率測(cè)定的供試品溶液。再按上述色譜及質(zhì)譜條件下進(jìn)樣，測(cè)定鹽酸水蘇堿峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得含量，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果平均回收率為102.6%，RSD為1.5%（表1）。
表1 加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果（n=6）
2.9 樣品含量測(cè)定
取不同生產(chǎn)廠家樣品3批，按上述供試品溶液的制備方法配制供試品溶液，分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，代入線性方程計(jì)算含量。3個(gè)廠家3個(gè)批號(hào)樣品含量測(cè)定結(jié)果見表2。
表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）
3 討論
3.1 提取時(shí)間的選擇
在供試品溶液的制備上，本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)不同超聲的提取時(shí)間（10、20、30、40 min）進(jìn)行考察，結(jié)果顯示，超聲提取20 min已將樣品中的鹽酸水蘇堿提取完全。
3.2 流動(dòng)相比例的選擇
在流動(dòng)相的選擇上，流動(dòng)相中乙腈與0.2%冰乙酸的比例經(jīng)過多次配比試驗(yàn)，當(dāng)乙腈U0.2%冰乙酸=70U30時(shí)樣品中的其他成分對(duì)鹽酸水蘇堿的測(cè)定無干擾，且鹽酸水蘇堿的出峰時(shí)間適當(dāng)，峰形、理論塔板數(shù)均較理想，故選用該比例進(jìn)行測(cè)定。
3.3 質(zhì)譜條件的選擇
在對(duì)質(zhì)譜條件的優(yōu)化考察中，為使鹽酸水蘇堿的各子離子峰信號(hào)達(dá)到最強(qiáng)，以正、負(fù)離子模式分別進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描并通過優(yōu)化裂解電壓以及碰撞能壓，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)達(dá)到最佳的質(zhì)譜條件。
3.4 本實(shí)驗(yàn)方法的優(yōu)點(diǎn)
益母草顆粒的原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測(cè)定采用薄層色譜掃描法測(cè)定，其處理較為繁瑣，測(cè)定時(shí)間長，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性差，而高效液相色譜法，色譜柱選擇要求條件高，樣品提取過程復(fù)雜，部分方法采用檢測(cè)器靈敏度低。本文采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定益母草顆粒中鹽酸水蘇堿的含量，具有較高的選擇性和專一性，靈敏度高，色譜柱選擇較普通常用，操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好。
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各省、自治區(qū)、直轄市人民檢察院、軍事檢察院、新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)人民檢察院:
為依法維護(hù)訴訟參與人的合法權(quán)益,進(jìn)一步保障律師在人民檢察院直接受理案件立案?jìng)刹?、刑事案件審查起訴工作中依法執(zhí)業(yè),根據(jù)《中華人民共和國刑事訴訟法》及有關(guān)法律的規(guī)定,最高人民檢察院制定了《關(guān)于人民檢察院保障律師在刑事訴訟中依法執(zhí)業(yè)的規(guī)定》,2003年12月30日經(jīng)第十屆檢察委員會(huì)第16次會(huì)議審議通過,現(xiàn)予印發(fā),請(qǐng)各級(jí)檢察機(jī)關(guān)結(jié)合實(shí)際貫徹落實(shí)。
最高人民檢察院
二四年二月十日
為依法維護(hù)訴訟參與人的合法權(quán)益,進(jìn)一步保障律師在人民檢察院直接受理案件立案?jìng)刹椤⑿淌掳讣彶槠鹪V工作中依法執(zhí)業(yè),促進(jìn)人民檢察院嚴(yán)格、公正執(zhí)法,根據(jù)《中華人民共和國刑事訴訟法》及有關(guān)法律的規(guī)定,結(jié)合檢察工作實(shí)際,制定本規(guī)定。
一、關(guān)于律師會(huì)見犯罪嫌疑人
1.人民檢察院直接受理立案?jìng)刹榘讣?受犯罪嫌疑人委托的律師自檢察人員第一次訊問犯罪嫌疑人后或者人民檢察院對(duì)犯罪嫌疑人采取強(qiáng)制措施之日起,可以會(huì)見在押的犯罪嫌疑人,向犯罪嫌疑人了解有關(guān)案件情況。人民檢察院應(yīng)當(dāng)將犯罪嫌疑人所涉嫌的罪名及犯罪嫌疑人的關(guān)押場(chǎng)所告知受委托的律師。
2.人民檢察院辦理直接立案?jìng)刹榈陌讣?律師提出會(huì)見的,由偵查部門指定專人接收律師要求會(huì)見的材料,辦理安排律師會(huì)見犯罪嫌疑人的有關(guān)事宜,并記錄備查。
3.人民檢察院偵查部門應(yīng)當(dāng)在律師提出會(huì)見要求后48小時(shí)內(nèi)安排會(huì)見。
對(duì)于人民檢察院直接立案?jìng)刹榈呢澪圪V賂犯罪等重大復(fù)雜的兩人以上的共同犯罪案件,律師提出會(huì)見在押犯罪嫌疑人的,偵查部門應(yīng)當(dāng)在律師提出會(huì)見要求后5日內(nèi)安排會(huì)見。
4.人民檢察院偵查部門安排律師會(huì)見犯罪嫌疑人時(shí),可以根據(jù)案件情況和工作需要決定是否派員在場(chǎng)。
5.人民檢察院立案?jìng)刹榘讣?律師要求會(huì)見在押犯罪嫌疑人的,對(duì)于涉及國家秘密的案件,偵查部門應(yīng)當(dāng)在律師提出申請(qǐng)后5日內(nèi)作出批準(zhǔn)或不批準(zhǔn)的決定。批準(zhǔn)會(huì)見的,應(yīng)當(dāng)向律師開具《批準(zhǔn)會(huì)見在押犯罪嫌疑人決定書》,并安排會(huì)見。不批準(zhǔn)會(huì)見的,應(yīng)當(dāng)向律師開具《不批準(zhǔn)會(huì)見在押犯罪嫌疑人決定書》,并說明理由。對(duì)于不涉及國家秘密的案件,不需要經(jīng)過批準(zhǔn)。
6.律師會(huì)見在押犯罪嫌疑人時(shí),可以了解案件以下情況:
(一)犯罪嫌疑人的基本情況;
(二)犯罪嫌疑人是否實(shí)施或參與所涉嫌的犯罪;
(三)犯罪嫌疑人關(guān)于案件事實(shí)和情節(jié)的陳述;
(四)犯罪嫌疑人關(guān)于其無罪、罪輕的辯解;
(五)被采取強(qiáng)制措施的法律手續(xù)是否完備,程序是否合法;
(六)被采取強(qiáng)制措施后其人身權(quán)利、訴訟權(quán)利是否受到侵犯;
(七)其他需要了解的與案件有關(guān)的情況。
7.在人民檢察院審查起訴期間,辯護(hù)律師可以持委托書、律師事務(wù)所函會(huì)見犯罪嫌疑人。辯護(hù)律師會(huì)見犯罪嫌疑人時(shí),人民檢察院不派員在場(chǎng)。
8.律師會(huì)見在押犯罪嫌疑人一律在監(jiān)管場(chǎng)所內(nèi)進(jìn)行。
二、關(guān)于聽取律師意見
9.人民檢察院立案?jìng)刹榘讣?犯罪嫌疑人被決定逮捕的,受犯罪嫌疑人委托的律師可以為其申請(qǐng)取保候?qū)?受委托律師認(rèn)為羈押超過法定期限的,可以要求解除或者變更強(qiáng)制措施。人民檢察院應(yīng)當(dāng)在7日內(nèi)作出決定并由偵查部門書面答復(fù)受委托的律師。
10.人民檢察院在偵查終結(jié)前,案件承辦人應(yīng)當(dāng)聽取受委托的律師關(guān)于案件的意見,并記明筆錄附卷。受委托的律師提出書面意見的,應(yīng)當(dāng)附卷。
11.人民檢察院審查移送起訴的案件,辯護(hù)律師認(rèn)為人民檢察院采取強(qiáng)制措施超過法定期限的,有權(quán)要求解除或者變更強(qiáng)制措施。人民檢察院應(yīng)當(dāng)在7日內(nèi)作出書面決定并由公訴部門書面答復(fù)辯護(hù)律師。
12.人民檢察院審查移送起訴案件,應(yīng)當(dāng)聽取犯罪嫌疑人、被害人委托的律師的意見,并記明筆錄附卷。直接聽取犯罪嫌疑人、被害人委托的律師的意見有困難的,可以向犯罪嫌疑人、被害人委托的律師發(fā)出書面通知,由其提出書面意見。律師在審查起訴期限內(nèi)沒有提出意見的,應(yīng)當(dāng)記明在卷。
13.人民檢察院對(duì)律師提出的證明犯罪嫌疑人無罪、罪輕或者減輕、免除其刑事責(zé)任的意見,辦案人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)真進(jìn)行審查。
三、關(guān)于律師查閱案卷材料
14.辯護(hù)律師以及被害人及其法定人或者近親屬委托作為訴訟人的律師自人民檢察院對(duì)案件審查起訴之日起,可以查閱、摘抄、復(fù)制本案的訴訟、技術(shù)性鑒定材料。
15.對(duì)于律師要求查閱、摘抄、復(fù)制本案的訴訟、技術(shù)性鑒定材料的,公訴部門受理后應(yīng)當(dāng)安排辦理;不能當(dāng)日辦理的,應(yīng)當(dāng)向律師說明理由,并在3日內(nèi)擇定日期,及時(shí)通知律師。
16.在人民檢察院審查起訴期間和提起公訴以后,辯護(hù)律師發(fā)現(xiàn)犯罪嫌疑人無罪、罪輕、減輕或者免除處罰的證據(jù)材料向人民檢察院提供的,人民檢察院公訴部門應(yīng)當(dāng)接受并進(jìn)行審查。
四、關(guān)于辯護(hù)律師申請(qǐng)收集、調(diào)取證據(jù)
17.辯護(hù)律師申請(qǐng)人民檢察院向犯罪嫌疑人提供的證人或者其他有關(guān)單位和個(gè)人收集、調(diào)取證據(jù)的,對(duì)于影響認(rèn)定案件事實(shí)和適用法律的,人民檢察院應(yīng)當(dāng)依法收集、調(diào)取,并制作筆錄附卷。
18.辯護(hù)律師向人民檢察院提出申請(qǐng)要求向被害人或者其近親屬、被害人提供的證人收集與本案有關(guān)的材料的,人民檢察院應(yīng)當(dāng)征求被害人或者其近親屬、被害人提供的證人的意見,經(jīng)過審查,在7日內(nèi)作出是否許可的決定,并通知申請(qǐng)人。人民檢察院沒有許可的,應(yīng)當(dāng)書面說明理由。
19.人民檢察院根據(jù)辯護(hù)律師的申請(qǐng)收集、調(diào)取證據(jù)時(shí),可以通知申請(qǐng)人在場(chǎng)。
五、關(guān)于律師投訴的處理
20.律師在辦理刑事案件的過程中,發(fā)現(xiàn)人民檢察院辦案部門和辦案人員違反法律和本規(guī)定的,可以向承辦案件的人民檢察院或者上一級(jí)人民檢察院投訴。
中圖分類號(hào)：R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1533(2012)05-0041-04
Simultaneous determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances by HPLC method
SUN Ke-gang , SHI Jian-guo* , JIANG Yu-dan
(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co.,Ltd, Shanghai,201206)
ABSTRACT Objective: To establish a method for the determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances. Method: An HPLC was performed on a column of Welch Materials C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm) with the mobile phase of methanol- acetonitrile sodium heptanesulfonate solution (1∶1∶8) at detection wavelength of 280 nm. Results: For isoprenaline hydrochloride, the calibration curve was linear (r=0.999 9) over the range of 10～40 µg?ml-1, the average recovery was 100.5% with RSD 0.76% and the limit of detection was 40.66 ng?ml-1. For epinephrine hydrochloride, the calibration curve was linear (r=0.999 6) over the range of 60～240 µg?ml-1, the average recovery was 100.2% with RSD 0.60% and the limit of detection was 44.12 ng?ml-1. Conclusion: This method is simple, rapid, accurate, high sensitive and good reproducible, which can be applied in the determination of both isoprenaline hydrochloride injection and epinephrine hydrochloride injection and their related substances.
KEY WORDS HPLC； isoprenaline hydrochloride；epinephrine hydrochloride； injection；assay； related substances
鹽酸異丙腎上腺素注射液和鹽酸腎上腺素注射液，主要成份分別為鹽酸異丙腎上腺素和鹽酸腎上腺素。兩者均為腎上腺素類受體激動(dòng)劑，使心臟收縮力增強(qiáng)，心率加快，骨骼肌血管、支氣管平滑肌舒張。臨床上做為搶救藥，用于治療心源性或感染性休克、心搏驟停等。鹽酸異丙腎上腺素注射液[1]和鹽酸腎上腺素注射液[2]均為《中國藥典》2010年版二部收載品種，均采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定及有關(guān)物質(zhì)檢查，但色譜條件不同，為將兩個(gè)品種的檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)一，以方便生產(chǎn)檢驗(yàn)，本文在中國藥典提供的色譜系統(tǒng)的基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化，建立了同一種色譜條件測(cè)定鹽酸異丙腎上腺素注射液和鹽酸腎上腺素注射液的含量與有關(guān)物質(zhì)。
1 儀器與試藥
美國Agilent 1100高效液相色譜儀，VWD紫外檢測(cè)器，Sartorius CPA225 D電子天平。鹽酸異丙腎上腺素(山東科源制藥有限公司)；腎上腺素(武漢武藥制藥有限公司)；鹽酸異丙腎上腺素注射液(規(guī)格：2 ml∶1 mg)和鹽酸腎上腺素注射液(規(guī)格：1 ml∶1 mg)由本公司提供。乙腈、甲醇、庚烷磺酸鈉為色譜純，水為超純水。
2 方法與結(jié)果
2.1 鹽酸異丙腎上腺素注射液的溶液制備
1)供試品溶液的制備。精密量取鹽酸異丙腎上腺素注射液適量，加0.1%焦亞硫酸鈉溶液制成20 µg?ml-1的溶液。
2)對(duì)照品溶液的制備。精密稱取鹽酸異丙腎上腺素對(duì)照品適量，加0.1%焦亞硫酸鈉溶液溶解并定量稀釋制成20 µg?ml-1的溶液。
3)對(duì)照溶液的制備。精密量取鹽酸異丙腎上腺素注射液1 ml，置100 ml量瓶中，加0.1%焦亞硫酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。
2.2 鹽酸腎上腺素注射液的溶液制備
1)供試品溶液的制備。精密量取鹽酸腎上腺素注射液適量，加4%醋酸溶液制成0.12 mg?ml-1的溶液。
2) 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取腎上腺素對(duì)照品適量，加4%醋酸溶液溶解并定量稀釋制成0.12 mg?ml-1的溶液。
3)對(duì)照溶液的制備。精密稱取重酒石酸去甲腎上腺素對(duì)照品12 mg，置10 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解至刻度，搖勻，精密量取1 ml，置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成12 µg?ml-1去甲腎上腺素的溶液。精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，精密加入供試品溶液5 ml，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。
2.3 空白輔料溶液的制備
稱取焦亞硫酸鈉適量，用4%醋酸溶液溶解并稀釋制成0.2 mg/ml焦亞硫酸鈉的溶液。
2.4 色譜條件
色譜柱：Welch Materials C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 µm)；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-庚烷磺酸鈉溶液（取庚烷磺酸鈉1.76 g，加水溶解并稀釋至800 ml，搖勻）（1∶1∶8）。檢測(cè)波長：280 nm；流速：2.0 ml/min；柱溫：30 ℃。
2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
取重酒石酸去甲腎上腺素對(duì)照品10 mg，加0.1 mol/L鹽酸5 ml使溶解，取1 ml，加30%過氧化氫溶液0.1 ml，搖勻，在紫外光燈（254 nm）下照射90 min，加流動(dòng)相9 ml，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液[3]。取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液20 µl，注入液相色譜儀，除主成分峰外，應(yīng)有相對(duì)保留時(shí)間1.2和1.5的兩個(gè)降解峰，主峰及兩個(gè)降解產(chǎn)物之間的分離度均應(yīng)符合要求。理論板數(shù)按去甲腎上腺素峰計(jì)算不低于2 000（圖1）。
2.6 專屬性試驗(yàn)
分別取空白輔料溶液及兩種注射液的供試品溶液、對(duì)照品溶液各20 µl，進(jìn)樣，結(jié)果表明空白輔料不干擾鹽酸異丙腎上腺素和鹽酸腎上腺素的含量測(cè)定（圖2、圖3）。
2.7 線性關(guān)系及范圍
分別精密稱取鹽酸異丙腎上腺素適量，按“2.1 2)”配制成10、16、20、24、32、40 µg?ml-1的溶液，各取20 µl，按“2.4”項(xiàng)下測(cè)定，記錄色譜圖。以鹽酸異丙腎上腺素峰面積(X)對(duì)其質(zhì)量濃度(Y，mg?ml-1)進(jìn)行回歸，得鹽酸異丙腎上腺素回歸方程為：Y=5.935×103 X-21.50，r=0.999 9。結(jié)果表明鹽酸異丙腎上腺素在10～40 µg?ml-1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。
分別精密稱取腎上腺素適量，按“2.2 2)”配制成60、96、120、144、192、240 µg?ml-1的溶液，各取20 µl，按“2.4”項(xiàng)下測(cè)定，記錄色譜圖。以鹽酸腎上腺素峰面積(X)對(duì)其質(zhì)量濃度(Y，mg?ml-1)進(jìn)行回歸，得鹽酸腎上腺素注射液回歸方程為：Y=1.142×104 X+26.56，r=0.999 6。結(jié)果表明腎上腺素在60～240 μg?ml-1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。
2.8 檢測(cè)限的考察
按信噪比3∶1測(cè)得鹽酸異丙腎上腺素和鹽酸腎上腺素最小檢測(cè)限為40.66 ng?ml-1和44.12 ng?ml-1。
2.9 精密度試驗(yàn)
配制供試品溶液共6份，分別進(jìn)樣20 µl，鹽酸異丙腎上腺素注射液標(biāo)示量RSD值為0.44%，鹽酸腎上腺素注射液標(biāo)示量RSD值為0.09%。
2.10 回收試驗(yàn)
按處方量的80%、100%、120%并分別按“2.1”和“2.2”配制16、20、24 µg?ml-1的鹽酸異丙腎上腺素溶液和96、120、144 µg?ml-1鹽酸腎上腺素溶液，各取20 µl，按“2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算得鹽酸異丙腎上腺素的平均回收率為100.5%，RSD值為0.76%(n=9)；鹽酸腎上腺素的平均回收率為100.2%，RSD值為0.60%(n=9)。
2.11 含量測(cè)定
取對(duì)照品溶液、供試品溶液各20 µl，按照“2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。將鹽酸異丙腎上腺素注射液三批和鹽酸腎上腺素注射液三批含量測(cè)定結(jié)果分別與《中國藥典》2010年版方法比較，差異不大(表1、2)。
2.12 有關(guān)物質(zhì)的檢查
精密吸取空白輔料溶液、對(duì)照溶液、鹽酸異丙腎上腺素注射液各100 µl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰（扣除相對(duì)保留時(shí)間為0.07之前的輔料峰和溶劑峰），與輔料峰相鄰的最大色譜峰不得大于對(duì)照溶液主峰（鹽酸異丙腎上腺素）面積的10倍（10.0%）；其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1.5倍（1.5%），其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的2倍（2.0%）(表3、圖4)。
精密吸取空白輔料溶液、供試品溶液、對(duì)照溶液各20 µl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。供試品溶液的色譜圖中如有與去甲腎上腺素峰保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，不得過腎上腺素標(biāo)示量的1.0%。如有其他雜質(zhì)峰，扣除焦亞硫酸鈉峰、醋酸峰及之前的輔料峰，與輔料峰相鄰的最大色譜峰不得大于對(duì)照溶液中腎上腺素峰的峰面積(10%)，及其他各雜質(zhì)峰面積之和不得大于對(duì)照溶液中腎上腺素峰面積的0.1倍(1.0%)(表4、圖5)。
2.13 鹽酸異丙腎上腺素與鹽酸腎上腺素的同時(shí)測(cè)定
分別取鹽酸異丙腎上腺素注射與鹽酸腎上腺素注射液供試品溶液5 ml和1 ml，混勻，進(jìn)樣20 µl，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鹽酸異丙腎上腺素與鹽酸腎上腺素兩峰分離效果良好（圖6）。
3 討論
經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，本法與藥典法無差異，但本法同時(shí)適用于鹽酸異丙腎上腺素注射液、鹽酸腎上腺素注射液的含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)檢查，方便生產(chǎn)上對(duì)腎上腺素類產(chǎn)品的同時(shí)檢驗(yàn)。
參考《中國藥典》2010年版二部中鹽酸異丙腎上腺素注射液的流動(dòng)相：庚烷磺酸鈉溶液-甲醇（80∶20）（用1 mol/L磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0），為使流動(dòng)相同時(shí)適用于鹽酸異丙腎上腺素和鹽酸腎上腺素，對(duì)流動(dòng)相的比例進(jìn)行調(diào)整，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相比例為甲醇-乙腈-庚烷磺酸鈉溶液（1∶1∶8）時(shí)，主成分峰與雜質(zhì)峰的分離情況最好，故選用其為流動(dòng)相。紫外掃描圖顯示鹽酸異丙腎上腺素和腎上腺素均在280 nm波長有最大吸收，因此選擇280 nm波長作為檢測(cè)波長。美國藥典[4]記載鹽酸腎上腺素注射液含量測(cè)定采用的色譜柱長度為150 mm，流速采用2.0 ml/min，經(jīng)試驗(yàn)用柱長為250 mm的色譜柱，主峰出峰都較晚，為25 min之后，故選擇采用150 mm長度的色譜柱，流速采用2.0 ml/min。
鹽酸異丙腎上腺素與鹽酸腎上腺素分子結(jié)構(gòu)中均具有兒茶酚（鄰苯二酚）結(jié)構(gòu)，性質(zhì)不穩(wěn)定，接觸空氣或受日光照射，極易被氧化變質(zhì)，故制成注射液需加入焦亞硫酸鈉作為抗氧劑。但焦亞硫酸與鄰苯二酚易生成磺化物，雖可通過本文所研究的色譜方法對(duì)該磺化物進(jìn)行分析，但還須對(duì)該磺化物生成過程進(jìn)一步研究確認(rèn)，且在有必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行相關(guān)的藥理毒理研究。
鹽酸異丙腎上腺素注射液和鹽酸腎上腺素注射液，光照、高溫破壞后降解產(chǎn)物較少，酸、堿、氧化破壞后均產(chǎn)生大量降解產(chǎn)物。但主成分與降解產(chǎn)物的分離度均符合要求，不干擾鹽酸異丙腎上腺素注射液和鹽酸腎上腺素注射液含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定。
參考文獻(xiàn)
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子宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。發(fā)病年齡以40～60歲居多[1]，宮頸癌及癌前病變TCT檢查，是一種簡(jiǎn)便、快速、安全、準(zhǔn)確和創(chuàng)傷性極小的診斷技術(shù)，TCT技術(shù)在婦科檢查中已廣泛應(yīng)用，它是一個(gè)有效篩查發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的常規(guī)方法[2]，現(xiàn)將筆者所在醫(yī)院TCT檢查見異形細(xì)胞，后進(jìn)行組織學(xué)活檢的216例患者作對(duì)比分析，以求得到認(rèn)識(shí)上的提高，并作為患者預(yù)后及指導(dǎo)臨床治療的可靠指標(biāo)。
1 資料與方法
1.1 一般資料 收集筆者所在科2011年10月-2012年10月間門診“兩癌篩查”及住院患者進(jìn)行的TCT檢查病例2842例，經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)檢查確診患者216例，惡性病變28例，其中宮頸原位癌21例，浸潤癌7例，上皮內(nèi)高度病變148例，其中中度不典型增生（CIN2級(jí)）124例，重度不典型增生（CIN3級(jí)）24例，上皮內(nèi)低度病變（CIN1級(jí)）40例，年齡32～66歲，中位年齡43歲，216例患者均作CK17、Ki67、P16激素受體測(cè)定。
1.2 方法 用AGQ-20一次性塑料毛刷宮頸取樣器采集宮頸及陰道脫落細(xì)胞，放入ABY細(xì)胞專用保存液中，經(jīng)常規(guī)處理制片，95%乙醇固定，巴氏法染色，免疫組化采用SP法染色，PH6.0檸檬酸緩沖液高壓修復(fù)，DAB顯色，試劑CK17、Ki67、P16均由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。
1.3 結(jié)果判定 自1988年美國細(xì)胞協(xié)會(huì)提出TBS（The Beseheda System）細(xì)胞學(xué)分類診斷后，1991年和2001年又分別做了兩次修訂[3]，提出宮頸上皮細(xì)胞異常是TBS對(duì)宮頸細(xì)胞等異常改變的一個(gè)總稱，包括鱗狀上皮和腺上皮異常，鱗狀上皮異常又分為：（1）非典型鱗狀上皮細(xì)胞，包括不能明確意義的（ASC-US）和傾向于上皮內(nèi)高度病變（ASC-H）。（2）低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL），包括CIN1級(jí)和HPV感染細(xì)胞學(xué)的改變。（3）高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病史（HSIL），相當(dāng)于CIN2級(jí)，CIN3級(jí)，或鱗狀上皮中度，重度異型增生及原位癌的細(xì)胞學(xué)改變。（4）鱗狀細(xì)胞癌（SCC）。腺上皮異常包括非典型腺細(xì)胞（AGC）炎性所致和傾向于腫瘤，腺癌。免疫組化參照文獻(xiàn)[4]，CK17表達(dá)以細(xì)胞質(zhì)棕黃色為陽性，P16表達(dá)以細(xì)胞核棕黃色為主，Ki67陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核，將陽性的細(xì)胞數(shù)量和強(qiáng)度分為4級(jí)，染色強(qiáng)度與背景無明顯差別為（-），陽性細(xì)胞數(shù)≤10%，染色強(qiáng)度大部分較弱為（±），陽性細(xì)胞數(shù)>50%，染色強(qiáng)度為中至強(qiáng)染色者為（+++），介于兩者之間為（++）。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行Speaman等級(jí)資料的相關(guān)性分析，P
2 結(jié)果
2.1 TCT結(jié)果 2842例TCT檢查病例中，有病理組織學(xué)診斷對(duì)照216例正確率96.8%（209/216），TCT診斷惡性腫瘤，組織活檢對(duì)比正確率為100%（28/28），其中宮頸原位癌占75.0%（21/28），浸潤癌占25.0%（7/28），包括鱗形細(xì)胞癌96.4%（27/28）為子宮頸癌中最常見的類型，與文獻(xiàn)[5]報(bào)道一致，腺癌3.6%（1/28），上皮內(nèi)高度病變68.5%（148/216），其中CIN2級(jí)83.8%（124/148），CIN3級(jí)16.2%（24/148），上皮內(nèi)低度病變CIN1級(jí)18.5%（40/216），年齡32～66歲，中位年齡43歲，216例患者均作CK17、Ki67、P16激素受體測(cè)定。
2.2 免疫組化結(jié)果 CK17在宮頸不成熟鱗狀上皮化生中（IM）陽性表達(dá)率近乎100%，明顯高于LSIL和HSIL（10%和15%），顯示CK17在宮頸IM和CIN病變中的陽性表達(dá)差異極顯著（P
3 討論
3.1 TCT特點(diǎn) 采用膜式離心制片技術(shù)，應(yīng)用梯度分層的細(xì)胞保存液，可有效地分離黏液與血液，錐式離心保存杯，能有效地采集全部細(xì)胞標(biāo)本，特種封膜支架可均勻地篩鋪有效細(xì)胞，涂片細(xì)胞多，異型性明顯，成群的細(xì)胞大小懸殊，成魚鱗狀排列，核仁明顯，清晰，便于識(shí)別。
3.2 TCT的臨床應(yīng)用 TCT是檢查宮頸癌及癌前病變的一種重要的診斷方法，筆者所在科開展TCT多年，體會(huì)TCT是診斷宮頸癌及癌前病變的簡(jiǎn)便、快速、安全，準(zhǔn)確率較高，損傷性極小的診斷技術(shù)與傳統(tǒng)的巴氏涂片檢查相比，明顯提高了滿意度及宮頸異常細(xì)胞的檢出率，病理醫(yī)師經(jīng)與常規(guī)病理切片進(jìn)行對(duì)照，觀察更有利于提高TCT的診斷水平。
3.3 CK17，Ki67，P16與宮頸癌及癌前病變的關(guān)系 （1）CK17在胞質(zhì)中表達(dá)明顯，伴隨宮頸鱗狀上皮細(xì)胞的分化成熟度增加，CK17陽性著色呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)，如宮頸鱗狀上皮細(xì)胞分化成熟后，CK17陽性僅限于基底層細(xì)胞，而在CIN中，CK17表達(dá)于間變細(xì)胞下的基底層細(xì)胞，大部分間變細(xì)胞呈陰性（-）或弱陽性（±）。由此說明，宮頸鱗狀上皮細(xì)胞分化越成熟，CK17陽性表達(dá)率越高，患者預(yù)后越好。（2）Ki67在正常宮頸鱗狀上皮基底細(xì)胞核中呈陰性（-）或弱陽性（±）表達(dá)，而在CIN病變中隨著級(jí)別增高，其陽性表達(dá)率逐漸增強(qiáng)，在宮頸癌中Ki67呈高度強(qiáng)陽性表達(dá)，提示患者惡性越明顯，預(yù)后較差，P16以胞核棕黃色為（±），P16在不成熟鱗狀上皮化生和其他非腫瘤性宮頸上皮中均為陰性，而在CIN病變中隨著級(jí)別增加，陽性表達(dá)明顯增加，呈胞核/胞質(zhì)全層陽性，也提示患者宮頸上皮細(xì)胞分化不成熟明顯，惡性越明顯，其預(yù)后較差。（3）宮頸鱗狀上皮CK17陽性率越高，患者癌變率越低，而Ki67，P16陽性率越高，其癌變率越高，故宮頸癌及癌前病變患者應(yīng)常規(guī)檢測(cè)CK17、Ki67，P16這對(duì)病理診斷分級(jí)，預(yù)測(cè)預(yù)后，指導(dǎo)臨床治療及提高生存質(zhì)量具有重要臨床意義和實(shí)用價(jià)值，值得普遍推廣。
3.4 宮頸癌及癌前病變的治療 目前宮頸癌通用的治療方法是根據(jù)患者對(duì)保留子宮的愿望，分別采用冷刀宮頸錐切術(shù)或全子宮切除術(shù)[6]，對(duì)于不滿意陰道鏡檢查和病灶位于子宮頸管部位較深的患者，采用冷刀錐切術(shù)是杜絕漏診的最好辦法[7]，對(duì)宮頸錐切患者具有診斷和治療宮頸上皮內(nèi)病變的雙重作用，可以早期發(fā)現(xiàn)微小浸潤癌，并準(zhǔn)確了解其深度及寬度。有學(xué)者認(rèn)為宮頸冷刀錐切保留了切除標(biāo)本的組織評(píng)價(jià)價(jià)值，可以最大限度避免遺漏浸潤癌，對(duì)手術(shù)的徹底性有準(zhǔn)確的評(píng)估[8-9]。
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[中圖分類號(hào)] R394.21 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2012）10（b）-0080-03
食管癌（esophageal cancer）是我國常見的消化道惡性腫瘤之一，其病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，手術(shù)治療是其標(biāo)準(zhǔn)治療手段[1]；但該病起病隱匿，其早期診斷率較低，對(duì)于不能手術(shù)或術(shù)后及放化療后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的晚期食管癌，聯(lián)合化療仍是其主要治療手段[2]。近年來，細(xì)胞因子在食管癌發(fā)病機(jī)制中的作用越來越受到重視，研究表明[3-4]，胰島素樣生長因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-beta 1，TGF-β1）與大腸癌、前列腺癌、乳腺癌、食管癌等多種腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)?；诖苏J(rèn)識(shí)，本文探討了由吉西他濱（GEM）、氟尿嘧啶（5-FU）、亞葉酸鈣（LV）組成的GLF聯(lián)合化療方案治療老年晚期食管癌的臨床療效及其對(duì)患者血清IGF-1及TGF-β1的影響，現(xiàn)報(bào)道如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取2008年1月～2011年10月在我院住院治療的老年食管癌患者68例為研究對(duì)象，均經(jīng)病理組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查確診，且具有可測(cè)量病灶。68例患者中，男43例，女25例；年齡59～76歲，平均（63.5±6.6）歲；病灶位于食管中段36例，下段23例，上段9例；病理類型：鱗癌45例，腺癌14例，腺鱗癌9例；分期：Ⅲ期44例，Ⅳ期24例；肺轉(zhuǎn)移6例，縱隔、鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移8例，腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4例；均為初診患者，未接受過放化療和手術(shù)治療，按照美國東部腫瘤協(xié)作組（eastern cooperative oncology group，ECOG）一般狀況評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0～1分46例，2 分22例。所有患者均無心、肝、腎等重要臟器疾病，無其他腫瘤病史。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審議通過，并與患者簽署知情同意書。
1.2 方法
1.2.1 治療方法 所有患者均行鎖骨下靜脈穿刺或經(jīng)外周靜脈穿刺中心靜脈置管，在鎮(zhèn)痛、營養(yǎng)等對(duì)癥支持處理的基礎(chǔ)上，予以GLF方案：吉西他濱（GEM，商品名：澤菲，江蘇豪森藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）800 mg/m2，第1、8天，靜脈滴注30 min；亞葉酸鈣（LV）200 mg，第1～5天；氟尿嘧啶（5-FU）350 mg/m2，第1～5天，靜脈滴注，21 d為1個(gè)周期， 2個(gè)周期后評(píng)價(jià)療效，獲有效、穩(wěn)定且患者可耐受時(shí)繼續(xù)應(yīng)用，最多化療6周期。
1.2.2 檢測(cè)方法 所有患者均在治療前、治療結(jié)束后，于清晨、空腹?fàn)顟B(tài)下，采肘靜脈血3 mL，EDTA抗凝，4℃ 3 000 r/min高速離心10 min，分離血清，-20℃低溫保存?zhèn)溆?。?yīng)用放射免疫法測(cè)量血清IGF-1的含量，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定血清TGF-β1的含量，IGF-1試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，TGF-β1試劑盒購自比利時(shí)BioSource公司。以系列標(biāo)準(zhǔn)品濃度與樣本同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。同時(shí)，于治療前、治療結(jié)束后，檢查患者血常規(guī)、尿常規(guī)、肝腎功能、心電圖、彩超及胸部CT、腹部B超、腫瘤標(biāo)志物、頭部MRI或骨核素掃描等。記錄可能發(fā)生的不良反應(yīng)。
1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
1.3.1 療效評(píng)價(jià) 參照RECIST《可測(cè)量病灶療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》評(píng)價(jià)近期療效。①陽性病灶全部消失為完全緩解（CR）；②最大長徑縮小30%以上為部分緩解（PR）；③增加30%以上（多個(gè)靶病變最大徑之和增加20%以上）為進(jìn)展（PD）；④介于PR和PD之間為疾病穩(wěn)定（SD）?？陀^緩解率（ORR）包括至少相隔4周確認(rèn)的CR和PR，疾病控制率（DCR）包括CR、PR和初次服用藥物至少6周后的SD者。
1.3.2 無進(jìn)展生存期（PFS）與總生存期（OS） PFS指從首次用藥到疾病進(jìn)展或因任何原因死亡的時(shí)間間隔（以發(fā)生在先的事件計(jì)算）。在數(shù)據(jù)截止時(shí)尚未進(jìn)展或死亡的患者，及研究中失訪的患者將以其最后一次腫瘤評(píng)價(jià)的日期計(jì)算。OS指首次用藥到因任何原因死亡的時(shí)間。在數(shù)據(jù)截止時(shí)尚存活的患者或在研究中失訪的患者將以最后一次聯(lián)絡(luò)的日期作為截尾數(shù)值進(jìn)行分析。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料及率的比較用χ2檢驗(yàn)，Kaplan-Meier統(tǒng)計(jì)中位PFS和OS，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 臨床療效
患者治療2～6個(gè)周期，平均（4.5±0.6）個(gè)周期；CR 1例（1.47%），PR 36例（52.94%），SD 15例（22.06%），PD 16例（23.53%），客觀緩解率（ORR）為54.41%，疾病控制率（DCR）為76.47%。
2.2 生存期
隨訪至2012年3月底，中位PFS為6.2個(gè)月（95%CI 4～13個(gè)月），中位OS為10.5個(gè)月（95%CI 6～16個(gè)月）。
2.3 血清IGF-1及TGF-β1水平
患者治療前后血清IGF-1及TGF-β1水平比較如表1所示，可見治療后血清IGF-1及TGF-β1水平均明顯降低，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。
2.4不良反應(yīng)
4例患者出現(xiàn)骨髓抑制，2例患者發(fā)生輕微腹瀉，1例患者出現(xiàn)神經(jīng)毒性，3例患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶升高，未見其他嚴(yán)重的危及生命的毒性反應(yīng)，不良反應(yīng)發(fā)生率為14.71%。
3 討論
食管癌的發(fā)生和發(fā)展是遺傳、環(huán)境、生活方式等多因素綜合作用的結(jié)果，近年來研究表明，在此過程中細(xì)胞因子發(fā)揮著重要作用，在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、食管癌等多種腫瘤性疾病中可檢測(cè)到某些細(xì)胞因子的過表達(dá)，如在血清中可檢測(cè)到IGF-1及TGF-β1水平的顯著升高。IGF-1是是一種細(xì)胞增殖調(diào)控因子，與人體正常胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、細(xì)胞增殖分化等生理活動(dòng)有關(guān)。大部分IGF-1存在于血液中，且以結(jié)合形式存在，僅有1%的IGF-1以游離形式存在，它以自分泌、旁分泌和內(nèi)分泌方式與腫瘤細(xì)胞表面的相應(yīng)受體（IGF-1R）結(jié)合，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分裂增殖，促進(jìn)細(xì)胞向惡性表型轉(zhuǎn)化，并抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，從而參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[5]。TGF-β1是一種多功能細(xì)胞因子，在腫瘤細(xì)胞主要通過自分泌、旁分泌和內(nèi)分泌的方式產(chǎn)生，具有誘導(dǎo)局部血管增生、胞外基質(zhì)生成以及抑制免疫監(jiān)視作用等，同時(shí)還可增加細(xì)胞的異質(zhì)性黏附，促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移，因而它在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用[6]。目前的前沿研究多選用IGF-1及TGF-β1作為食管癌免疫療效、術(shù)前評(píng)估、預(yù)后及復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)的一個(gè)重要觀察指標(biāo)。有鑒于此，本研究亦選用該兩項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行輔助療效評(píng)價(jià)。
目前，食管癌的常規(guī)治療以手術(shù)、放療為主，但是預(yù)后較差，患者5年的生存率僅為20%左右；且患者就診時(shí)對(duì)為晚期或已遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，因此近年來隨著新藥物的開發(fā)，化療在食管癌綜合治療中的地位逐步提升，如吉西他濱（GEM）、紫杉醇（TAX）、多西紫杉醇（TAT）等應(yīng)用于食管癌的治療，明顯改善了患者的預(yù)后。本研究中，患者化療選用的是由吉西他濱（GEM）、氟尿嘧啶（5-FU）、亞葉酸鈣（LV）組成的GLF聯(lián)合化療方案。該方案中，吉西他濱是一種是細(xì)胞周期特異性的藥物，通過脫氧胞嘧啶核苷激化酶磷酸化，轉(zhuǎn)化成為具有活性的二磷酸及三磷酸，導(dǎo)致DNA合成中斷，引發(fā)細(xì)胞的死亡，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。氟尿嘧啶能抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻斷脫氧嘧啶核苷酸轉(zhuǎn)換成胸腺嘧啶核苷核，干擾DNA合成，對(duì)RNA的合成也有一定的抑制作用[7]。亞葉酸鈣是葉酸還原型的甲?；苌?，系葉酸在體內(nèi)的活化形式，可與二氫葉酸還原酶結(jié)合而阻斷葉酸向四氫葉酸鹽轉(zhuǎn)化，可限制化療藥物對(duì)正常細(xì)胞的損害程度，通過相互間競(jìng)爭(zhēng)作用，并能逆轉(zhuǎn)甲氨蝶呤對(duì)骨髓和胃腸黏膜反應(yīng)。文獻(xiàn)[6-8]研究表明，GLF聯(lián)合化療方案具有療效較好，毒副作用較小的特點(diǎn)。本研究結(jié)果也進(jìn)一步印證了上述文獻(xiàn)的結(jié)論。研究表明，患者治療2～6個(gè)周期后，客觀緩解率為54.41%，疾病控制率為76.47%，中位PFS為6.2個(gè)月，中位OS為10.5個(gè)月，不良反應(yīng)發(fā)生率為14.71%。在生化指標(biāo)方面，以血清IGF-1及TGF-β1水平作為指標(biāo)，治療后血清IGF-1及TGF-β1水平均明顯降低，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。
綜上所述，可見GLF聯(lián)合化療方案為老年晚期食管癌治療提供了新的途徑和思路，抑制了血清IGF-1及TGF-β1的活性，進(jìn)而可能抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移等，具有較好的腫瘤抑制作用，且毒副作用可耐受，比較適合于老年晚期食管癌的臨床治療。
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中圖分類號(hào)：G71 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-9795（2014）04（b）-0252-02
心理素質(zhì)是人的身體、心理和社會(huì)素質(zhì)之一，是先天因素與后天因素的“合金”。簡(jiǎn)單地說，心理素質(zhì)是以生理素質(zhì)為基礎(chǔ)，在實(shí)踐活動(dòng)中通過主體與客體的相互作用，而逐步發(fā)展和形成的心理潛能、能量、特點(diǎn)、品質(zhì)與行為的綜合。近年來，隨著我國素質(zhì)教育的不斷深化，心理素質(zhì)教育在素質(zhì)教育中的作用日益突出。中等職業(yè)學(xué)校教育應(yīng)該“以服務(wù)為宗旨，以就業(yè)為導(dǎo)向”，加強(qiáng)學(xué)生的思想道德建設(shè)，為學(xué)生求職就業(yè)做好心理準(zhǔn)備。因此，中等職業(yè)學(xué)校的心理健康教育應(yīng)該緊緊圍繞提升學(xué)生“心理素質(zhì)”的核心，有效幫助學(xué)生正確認(rèn)識(shí)和處理成長、學(xué)習(xí)、生活和求職就業(yè)中遇到的心理行為問題，促進(jìn)學(xué)生身心全面和諧發(fā)展。
1 心理素質(zhì)含義及其結(jié)構(gòu)
1.1 兩種心理素質(zhì)觀
非職業(yè)角度的心理素質(zhì)觀：認(rèn)為心理素質(zhì)包含六個(gè)方面：（1）自組織系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括心理能力（智力因素）、心理動(dòng)力因素（人格）和身心潛質(zhì)3個(gè)亞系統(tǒng)，它們之間是交互作用的動(dòng)態(tài)同構(gòu)；（2）心理素質(zhì)以人的自我意識(shí)發(fā)展為核心，是由積極的和社會(huì)發(fā)展相統(tǒng)一的價(jià)值導(dǎo)向的非智力因素有機(jī)結(jié)合的復(fù)雜整體。（3）動(dòng)態(tài)綜合體：該綜合體是多類別、多要素、多品質(zhì)系統(tǒng)，包括智力因素、非智力因素、心理健康和潛能因素。（4）人格和個(gè)性：心理素質(zhì)就是人格和個(gè)性，包括需要、動(dòng)機(jī)、興趣、理想、信念、世界觀、能力、氣質(zhì)和性格。（5）綜合體現(xiàn)：心理素質(zhì)所體現(xiàn)的內(nèi)容是性格、品質(zhì)、心理能力、心理健康狀況以及心因的水平或質(zhì)量。（6）心理品質(zhì)：這種心理品質(zhì)以心理?xiàng)l件為基礎(chǔ)，通過內(nèi)化形成穩(wěn)定的有衍生功能的能力，并與人的社會(huì)行為和創(chuàng)造行為密切聯(lián)系。
職業(yè)角度的心理素質(zhì)觀：分別從護(hù)士心理素質(zhì)、中學(xué)校長心理素質(zhì)、運(yùn)動(dòng)員心理素質(zhì)、公訴人心理素質(zhì)、教師心理素質(zhì)、競(jìng)賽心理素質(zhì)、企業(yè)家心理素質(zhì)、中國傳統(tǒng)管理人員心理素質(zhì)等研究群體著手研究特殊人群的心理素質(zhì)構(gòu)成。
1.2 心理素質(zhì)結(jié)構(gòu)
現(xiàn)有對(duì)于心理素質(zhì)的定義和內(nèi)涵的理解，主要從認(rèn)知、個(gè)性、心理品質(zhì)等心理學(xué)起點(diǎn)做為線索，并由此出發(fā)，概括和歸納心理素質(zhì)的內(nèi)容，并根據(jù)內(nèi)容中認(rèn)定相應(yīng)重要的點(diǎn)來制定或強(qiáng)調(diào)心理素質(zhì)培養(yǎng)的重點(diǎn)。比如，中科院王極盛研究員通過大量研究心理素質(zhì)與學(xué)生成績的相關(guān)關(guān)系中提出的心理素質(zhì)概念就是涵蓋這3方面的“動(dòng)態(tài)綜合體”。西南大學(xué)教育科學(xué)研究所張大均教授通過對(duì)于大學(xué)生大范圍調(diào)查問卷研究，提出心理素質(zhì)結(jié)構(gòu)，分為認(rèn)知，個(gè)性和適應(yīng)維度，其中適應(yīng)和發(fā)展是其制定心理素質(zhì)培訓(xùn)課程的兩條基本線索。同時(shí)，也有研究者通過對(duì)于己有心理素質(zhì)定義的內(nèi)涵概括抽取制定自己定義，并在此基礎(chǔ)上提出大學(xué)生心理素質(zhì)的結(jié)構(gòu)并驗(yàn)證該結(jié)構(gòu)。綜上所述發(fā)現(xiàn)，對(duì)于心理素質(zhì)結(jié)構(gòu)，要么取一個(gè)大而全的框架，要么依照各自的研究思路確定維度和操作性定義，這使得心理素質(zhì)缺乏統(tǒng)一認(rèn)定的核心，更沒有確定的判斷標(biāo)準(zhǔn)。
2 中職生與普高生的心理素質(zhì)調(diào)查
2.1 問卷編制
探索心理素質(zhì)結(jié)構(gòu)，一般需從尋找心理素質(zhì)結(jié)構(gòu)的底層成分出發(fā)，心理現(xiàn)象的構(gòu)成成分即可作為心理素質(zhì)成分的根源，即從認(rèn)識(shí)過程、情感過程、意志過程、個(gè)性心理四個(gè)方面構(gòu)想問卷比較全面?？紤]到中學(xué)生對(duì)心理健康專業(yè)術(shù)語掌握比較有限，問卷設(shè)計(jì)需要半開放形式，共由三部分組成，第一部分為半開放式問卷，問題為“在你認(rèn)為屬于心理素質(zhì)內(nèi)容的項(xiàng)目后面劃勾”，項(xiàng)目共有22個(gè)，分別是，心境、激情、應(yīng)激、自覺性、果斷性、堅(jiān)持性、自制力、自我認(rèn)識(shí)、自我評(píng)價(jià)、自我監(jiān)控、行為、興趣、需要、動(dòng)機(jī)、理想、信念、價(jià)值觀、人生觀、世界觀、能力、氣質(zhì)、性格。第二部分為開放式問卷，寫出10項(xiàng)你認(rèn)為中職生（高中生）應(yīng)具備的心理素質(zhì)。第三部分也是開放式問卷，自己評(píng)價(jià)自己的心理素質(zhì)的好壞，并具體分析好的表現(xiàn)和不好的表現(xiàn)。
2.2 施測(cè)及調(diào)查結(jié)果
參加測(cè)試學(xué)生為金昌市理工中專一年級(jí)學(xué)生206名和金川公司第二高級(jí)中學(xué)高一學(xué)生205名，問卷全部有效。
2.2.1 心理素質(zhì)成分的重要性排序和分析項(xiàng)目的篩選
對(duì)問卷第一部分分析，將兩個(gè)被試群體數(shù)據(jù)文件合并匯總，對(duì)各題項(xiàng)進(jìn)行平均分排序。排在前五位的依次是：人生觀、自制力、自我評(píng)價(jià)、堅(jiān)持性、心境。按照得分大于50%為保留依據(jù)，舍去了“需要”這一個(gè)項(xiàng)目。所剩21個(gè)項(xiàng)目內(nèi)部一致性系數(shù)符合統(tǒng)計(jì)要求?？梢宰鳛橄乱徊椒治龅膶?duì)象。
2.2.2 中職生和普高生應(yīng)然心理素質(zhì)成分重要性排序?qū)Ρ确治?/p>
對(duì)問卷第二部分分析，中職生十項(xiàng)應(yīng)然心理素質(zhì)成分重要性排序?yàn)椋鹤孕?、有活力、樂觀、有愛心、冷靜、興趣廣泛、友好相處、自我調(diào)節(jié)、行為和諧、性格不偏激。普高生十項(xiàng)應(yīng)然心理素質(zhì)成分重要性排序?yàn)椋鹤孕?、自制、有理想、主?dòng)、思維敏捷、有恒心、有創(chuàng)造力、專注、對(duì)自己嚴(yán)格、有自主意識(shí)。
從中可見，中職生應(yīng)然心理素質(zhì)成分更多傾向于有活力、愛心、樂觀等“情緒情感系統(tǒng)”，表明中職生在人際交往以及生活中更多體現(xiàn)出親和力，更加圓滑，社會(huì)適應(yīng)性更強(qiáng)，還傾向于性格柔和、行為不偏激等“個(gè)性系統(tǒng)”，反映出中職生喜歡交際層面的生活內(nèi)容，普高生更多傾向于思維、理想，創(chuàng)造力、專注等等適合于學(xué)習(xí)與升學(xué)的“認(rèn)知系統(tǒng)”和有恒心、毅力、自制等的“意志系統(tǒng)”，這反映出中職生情商優(yōu)于智商，而普高生智商優(yōu)于情商的心理素質(zhì)特點(diǎn)。
2.2.3 中職生和普高生實(shí)然心理素質(zhì)自評(píng)對(duì)比
對(duì)問卷第三部分分析，70%中職生自認(rèn)為心理素質(zhì)較好，20%自認(rèn)為一般，只有10%自認(rèn)為不好。自評(píng)較好的認(rèn)為自己好的方面表現(xiàn)為自信、有符合實(shí)際的目標(biāo)、人際關(guān)系和諧、有正確的人生觀、豁達(dá)、樂觀、有愛心、能包容別人等等，自評(píng)為不好的認(rèn)為自己自控能力差、習(xí)慣不好，性格偏激。而對(duì)于普高生，30%自認(rèn)為心理素質(zhì)好，20%自認(rèn)為心理素質(zhì)一般，50%自認(rèn)為心理素質(zhì)不好，自評(píng)好的認(rèn)為自己積極、上進(jìn)、能力強(qiáng)、為適應(yīng)考試型，意志堅(jiān)強(qiáng)等，自評(píng)為不好的則認(rèn)為自己心理承受能力低，受挫能力低、缺乏應(yīng)變能力、自卑等。由此可見，中職生實(shí)然心理素質(zhì)表現(xiàn)好者依然突出表現(xiàn)為好的“情緒系統(tǒng)”和“個(gè)性系統(tǒng)”，普高生實(shí)然心理素質(zhì)表現(xiàn)好者突出表現(xiàn)為較好的“認(rèn)知系統(tǒng)”和“意志系統(tǒng)”，跟前面應(yīng)然心理素質(zhì)成分分析一致。表明中職生生活重心在于與學(xué)習(xí)無關(guān)的其他方面，普高生生活重心明顯傾向于學(xué)習(xí)。
3 中職生心理素質(zhì)結(jié)構(gòu)探析
心理素質(zhì)可以從兩個(gè)角度去定義，一是從身心角度，即與生理素質(zhì)相對(duì)應(yīng)來定義，認(rèn)為心理素質(zhì)就是人的心理品質(zhì)，這一定義與個(gè)體的背景因素?zé)o關(guān)；二是從特定的職業(yè)特定的人群應(yīng)該具備的心理素質(zhì)出發(fā)來定義心理素質(zhì)。本研究對(duì)心理素質(zhì)的定義采用兩種心理素質(zhì)觀糅合的方法。即不論什么人群，其心理素質(zhì)均應(yīng)指其心理品質(zhì)，而心理品質(zhì)應(yīng)該是一個(gè)動(dòng)態(tài)綜合系統(tǒng)，該系統(tǒng)應(yīng)該包括四個(gè)維度，即知、情、意、個(gè)性，這樣分類的主要目的在于便于任何人的自我評(píng)價(jià)?！爸本S度中應(yīng)該包含自我意識(shí)和自我以外的思維能力、記憶能力、想象能力、觀察能力、創(chuàng)造能力六個(gè)成分；“情”維度中應(yīng)該包括心境、激情、應(yīng)激三個(gè)成分；“意”維度包括自覺性、堅(jiān)持性、果斷性、主動(dòng)性四個(gè)成分；“個(gè)性”維度較為復(fù)雜，包括興趣、動(dòng)機(jī)、理想、信念、價(jià)值觀、人生觀、世界觀、氣質(zhì)、性格九個(gè)成分。
用所收回問卷的40%進(jìn)行探索性因素分析，結(jié)果認(rèn)為，中職生心理素質(zhì)系統(tǒng)包括四個(gè)子系統(tǒng)，分別是認(rèn)知系統(tǒng)、情緒情感系統(tǒng)、意志系統(tǒng)、個(gè)性系統(tǒng)，各個(gè)子系統(tǒng)所包含的因子數(shù)見表1。再用所收回問卷剩余的60%做驗(yàn)證性因素分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)模型的擬合性較好，進(jìn)一步驗(yàn)證了本研究的構(gòu)想效度。
總之，從心理素質(zhì)結(jié)構(gòu)的底層成分出發(fā)，采用定性研究方法將其維度劃分為認(rèn)知系統(tǒng)、情緒情感系統(tǒng)、意志系統(tǒng)和個(gè)性系統(tǒng)符合心理學(xué)研究方法，也適應(yīng)普通人理解水平，可以將其簡(jiǎn)稱為知、情、意、個(gè)性，簡(jiǎn)單明了，方便他評(píng)與自評(píng)。中職生與普高生在應(yīng)然心理素質(zhì)成分調(diào)查中表現(xiàn)出明顯差異，前者傾向于從情緒情感系統(tǒng)和個(gè)性系統(tǒng)層面去詮釋心理素質(zhì)，后者傾向于從認(rèn)知系統(tǒng)和意志系統(tǒng)層面去詮釋心理素質(zhì)，實(shí)然心理素質(zhì)成分則反映出中職生更喜歡與愛心、樂觀、有活力等與情感生活有關(guān)的素質(zhì)，普高生更喜歡自制、堅(jiān)持等與得到好成績有關(guān)的素質(zhì)。通過探索性因素分析和驗(yàn)證性因素分析最終確定了中職生心理素質(zhì)結(jié)構(gòu)，可以為未來職業(yè)學(xué)校心理健康教育提供一定參考。
參考文獻(xiàn)
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剛畢業(yè)的高職生在今后的職場(chǎng)的發(fā)展，一般情況下取決于學(xué)生在校期間掌握的專業(yè)知識(shí)、專業(yè)技能等職業(yè)能力和職業(yè)過程中表現(xiàn)出來的職業(yè)道德、職業(yè)態(tài)度、職業(yè)精神等職業(yè)素質(zhì)。
一、職業(yè)素質(zhì)的界定
關(guān)于職業(yè)素質(zhì)的定義很多，本文結(jié)合高職學(xué)生實(shí)際，將職業(yè)素質(zhì)定義為學(xué)生在校期間職業(yè)素質(zhì)的養(yǎng)成，主要包括職業(yè)道德、職業(yè)意識(shí)和職業(yè)行為習(xí)慣，本文重點(diǎn)探討職業(yè)行為習(xí)慣中的敬業(yè)、主動(dòng)、溝通與合作、吃苦耐勞等職業(yè)素質(zhì)的養(yǎng)成對(duì)學(xué)生就業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的影響。
二、職業(yè)素質(zhì)對(duì)學(xué)生就業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的影響
我系部從2011級(jí)酒店專業(yè)開始進(jìn)行《酒店職業(yè)素質(zhì)修煉》的課程教學(xué)，來推動(dòng)學(xué)生職業(yè)素質(zhì)的養(yǎng)成，人力資源管理專業(yè)從2013年開始進(jìn)行職業(yè)素質(zhì)的養(yǎng)成教育，經(jīng)過幾年的培養(yǎng)和對(duì)畢業(yè)生就業(yè)情況的調(diào)查，職業(yè)素質(zhì)的高低對(duì)學(xué)生就業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力影響明顯，具體如下：1.調(diào)查企業(yè)需要學(xué)生具備的職業(yè)素質(zhì)。在每年9-10月份對(duì)學(xué)生就業(yè)企業(yè)開展就業(yè)調(diào)查的過程中，通過對(duì)11級(jí)、12級(jí)、13級(jí)（14、15、16年）三級(jí)學(xué)生的實(shí)習(xí)和就業(yè)單位的調(diào)研來看，幾乎所有的企業(yè)都非常注重學(xué)生的職業(yè)素質(zhì)，發(fā)展?jié)摿?，在選拔學(xué)生時(shí)都強(qiáng)調(diào)學(xué)生的綜合素質(zhì)的可塑性和職業(yè)素質(zhì)，其中列舉的調(diào)查項(xiàng)目歸納總結(jié)如下：所有學(xué)生工作崗位都強(qiáng)調(diào)敬業(yè)、吃苦耐勞、積極主動(dòng)、溝通能力、團(tuán)隊(duì)合作等五方面的職業(yè)素質(zhì)。這五方面職業(yè)素質(zhì)的培養(yǎng)，是我們提高學(xué)生就業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的指導(dǎo)方向。2.人力專業(yè)優(yōu)秀畢業(yè)生職業(yè)素質(zhì)模型與就業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的關(guān)系。人力專業(yè)從08級(jí)專業(yè)開設(shè)以來，涌現(xiàn)了一批批優(yōu)秀畢業(yè)生，截至到今年6月份為止，畢業(yè)5年之內(nèi)，副總以上2人（09級(jí)人力曾凱旋培訓(xùn)公司副總，10級(jí)人力王勇茶企業(yè)公司副總），總監(jiān)級(jí)以上5人（08級(jí)3人、10級(jí)2人），經(jīng)理級(jí)以上20余人的具體詳細(xì)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在他們身上體現(xiàn)的敬業(yè)、積極主動(dòng)、吃苦耐勞、溝通和合作等幾方面的職業(yè)素質(zhì)特別明顯，形成了專業(yè)優(yōu)秀畢業(yè)生的一個(gè)成功素質(zhì)模型，這些職業(yè)素質(zhì)，極大提高了他們?cè)诼殘?chǎng)的就業(yè)核心競(jìng)爭(zhēng)力，筆者以這些作為成功素質(zhì)模型進(jìn)行推廣應(yīng)用于人力專業(yè)學(xué)生的職業(yè)素質(zhì)培育過程中。
三、高職學(xué)生職業(yè)素質(zhì)的創(chuàng)新培育路徑
1.“雙體驗(yàn)”，在“職業(yè)素質(zhì)”培育模式上的創(chuàng)新?！奥殬I(yè)素質(zhì)”的培育需要融入人才培養(yǎng)的全過程，同時(shí)也需要載體，人力專業(yè)從企業(yè)的最需求的敬業(yè)、主動(dòng)、專注、嚴(yán)謹(jǐn)、精益求精等職業(yè)素質(zhì)出發(fā)，與企業(yè)共同開發(fā)，編制基于工作過程系統(tǒng)化的課程內(nèi)的教材，連續(xù)開設(shè)4學(xué)期《職業(yè)素質(zhì)修煉》課程來逐步培育高職學(xué)生的職業(yè)素質(zhì)。職業(yè)素質(zhì)修煉課堂上通過4節(jié)連上來完成“準(zhǔn)職業(yè)人”的“職業(yè)精神”任務(wù)工單，通過游戲互動(dòng)、角色扮演、現(xiàn)場(chǎng)辯論、經(jīng)驗(yàn)分享等多種形式的課程體驗(yàn)，極大激發(fā)了學(xué)生學(xué)習(xí)的“職業(yè)素質(zhì)”的熱情。傳統(tǒng)意義上，我們將課內(nèi)教學(xué)和課外實(shí)踐分離，而且學(xué)生的真實(shí)體驗(yàn)感不強(qiáng)，學(xué)習(xí)積極性也不高，學(xué)生培育效果自然低下。我們經(jīng)過多年探索、實(shí)踐，提出基于工作過程的課堂教學(xué)體驗(yàn)和課外實(shí)踐體驗(yàn)（以校內(nèi)茶藝館、旅行社、文印社等真實(shí)運(yùn)營的實(shí)訓(xùn)基地為載體）相融合的“雙體驗(yàn)”模式。即課堂體驗(yàn)的敬業(yè)精神，在運(yùn)營的實(shí)訓(xùn)基地進(jìn)行實(shí)踐體驗(yàn)敬業(yè)，這種雙體驗(yàn)?zāi)Ｊ接行У募ぐl(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)熱情，使“職業(yè)素質(zhì)”的培育質(zhì)量大幅提高。同時(shí)，我們也積極組織學(xué)生通過參加“大學(xué)生潛能和素質(zhì)戶外拓展訓(xùn)練”、微笑禮儀、陽光晨練等活動(dòng)體驗(yàn)職業(yè)人的“職業(yè)精神”——專注、堅(jiān)持；2.“團(tuán)隊(duì)學(xué)習(xí)”，在“職業(yè)素質(zhì)”學(xué)習(xí)組織方式上的創(chuàng)新。在現(xiàn)代企業(yè)需要團(tuán)隊(duì)作戰(zhàn)，而90后團(tuán)隊(duì)精神的缺失的背景下，項(xiàng)目組在學(xué)習(xí)組織方式上下功夫。每5-7人組建一個(gè)學(xué)習(xí)團(tuán)隊(duì)，并要求體現(xiàn)專業(yè)特色的團(tuán)隊(duì)隊(duì)名、口號(hào)、LOGO設(shè)計(jì)等團(tuán)隊(duì)PK展示。在校期間，無論是課堂的“職業(yè)素質(zhì)修煉”教學(xué)，還是豐富多彩的課外“職業(yè)素質(zhì)”實(shí)踐活動(dòng)，都要求按照?qǐng)F(tuán)隊(duì)的組織形式來開展和進(jìn)行，這種形式，極大提高了專業(yè)學(xué)生的團(tuán)隊(duì)意識(shí)和職業(yè)素質(zhì)。3.“師徒制”，在“職業(yè)素質(zhì)”培育主體上的特色與創(chuàng)新。第一，校內(nèi)導(dǎo)師制：每個(gè)團(tuán)隊(duì)可以選擇1名自己喜愛的老師作為在校期間的團(tuán)隊(duì)導(dǎo)師，導(dǎo)師將帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)完成在校期間培育“職業(yè)素質(zhì)”的各項(xiàng)課外實(shí)踐體驗(yàn)活動(dòng)。第二，校外師徒制：學(xué)生實(shí)習(xí)階段，團(tuán)隊(duì)導(dǎo)師變成學(xué)生的校內(nèi)實(shí)習(xí)指導(dǎo)老師，同時(shí)學(xué)生與企業(yè)管理人員或老員工建立“師徒制”，企業(yè)師傅除了指導(dǎo)學(xué)生的職業(yè)技能，更重要的是培育學(xué)生的“職業(yè)素質(zhì)”，并且?guī)煾狄笤趯?shí)習(xí)手冊(cè)上對(duì)學(xué)生職業(yè)素質(zhì)相關(guān)項(xiàng)目的進(jìn)行評(píng)價(jià)。4.校園考核重過程和企業(yè)考核重結(jié)果的雙重評(píng)價(jià)體系，評(píng)價(jià)高職學(xué)生“職業(yè)素質(zhì)”的培育效果上的創(chuàng)新。我們專業(yè)打破了傳統(tǒng)的重結(jié)果，輕過程的考核方式，實(shí)現(xiàn)了校園過程考核和企業(yè)結(jié)果考核相融合的考核方式。校園課堂《職業(yè)素質(zhì)修煉》課堂中教師對(duì)學(xué)生的每個(gè)細(xì)節(jié)都進(jìn)行記錄和評(píng)價(jià)，《綜合素質(zhì)教育》對(duì)學(xué)生參與的每項(xiàng)課外實(shí)踐都有參與分記錄。企業(yè)對(duì)學(xué)生“職業(yè)素質(zhì)”的考核體現(xiàn)在最后學(xué)生實(shí)習(xí)手冊(cè)中以結(jié)果為導(dǎo)向的企業(yè)評(píng)價(jià)表?？傊?jīng)過筆者對(duì)人力資源管理專業(yè)連續(xù)3年的畢業(yè)生就業(yè)情況中企業(yè)和畢業(yè)生的調(diào)查，得出了企業(yè)和畢業(yè)生雙方認(rèn)為的應(yīng)該具備的職業(yè)素質(zhì)，并經(jīng)過例證說明了這些職業(yè)素質(zhì)對(duì)學(xué)生就業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的影響，最后提出了四個(gè)方面來培養(yǎng)高職學(xué)生職業(yè)素質(zhì)的途徑，取得了良好的效果，為其他專業(yè)對(duì)學(xué)生職業(yè)素質(zhì)的培養(yǎng)提供了新的路徑，有一定的推廣意義。
參考文獻(xiàn)：
[1]潘燕.高職學(xué)生職業(yè)素質(zhì)修煉[M].浙江大學(xué)出版社.2015.
一、問題的提出
技工學(xué)校是專門培養(yǎng)技術(shù)工人的中等職業(yè)學(xué)校，是我國職業(yè)技術(shù)教育的重要組成部分。它肩負(fù)著培養(yǎng)直接面向建設(shè)、生產(chǎn)、服務(wù)、管理的一線技術(shù)性工人的責(zé)任。隨著經(jīng)濟(jì)全球化深入發(fā)展，對(duì)一線技術(shù)工人的綜合素質(zhì)要求日益嚴(yán)格，然而，目前的技工教育要么還在沿用初中的教學(xué)內(nèi)容和教學(xué)方法，要么選擇高校的教學(xué)形式，不能很好地滿足用人單位需求和學(xué)生自我鍛煉的需要。近幾年高職院校的職業(yè)實(shí)用性體育研究和高中模塊體育教學(xué)研究取得了很好的經(jīng)驗(yàn)，職業(yè)實(shí)用性體育有效促進(jìn)學(xué)生就業(yè)能力，這對(duì)我們技工學(xué)校的課程改革來說有很好的借鑒意義。通過對(duì)技工學(xué)校職業(yè)實(shí)用性體育教學(xué)模塊設(shè)計(jì)進(jìn)行探討，為技工學(xué)校體育與健康課程改革進(jìn)行有益探索與嘗試，對(duì)構(gòu)建出適合技工學(xué)校專業(yè)特色的體育課程服務(wù)。
二、相關(guān)概念的界定
1.技工學(xué)校：
技工學(xué)校是專門培養(yǎng)技術(shù)工人的中等職業(yè)學(xué)校。始稱工人技術(shù)學(xué)校，是在建國初期勞動(dòng)部門舉辦的專業(yè)訓(xùn)練班的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。
2.職業(yè)實(shí)用性體育：
丁宗偉在《試論高校體育教學(xué)與未來職業(yè)需求的結(jié)合》中認(rèn)為：職業(yè)實(shí)用性體育是為使各專業(yè)的學(xué)生能夠更好地的適應(yīng)未來職業(yè)的工作和生活環(huán)境，有目的進(jìn)行職業(yè)所需要的體質(zhì)、身體運(yùn)動(dòng)技巧與技能的鍛煉，并開展有關(guān)理論知識(shí)的教育，
王蘋聰在《中職體育課中進(jìn)行職業(yè)實(shí)用性體育教學(xué)的理論探索》中定義為：職業(yè)性體育是指適應(yīng)和發(fā)展用于各種職業(yè)生產(chǎn)勞動(dòng)與之相關(guān)體能、心理與道德所需要的一種針對(duì)性較強(qiáng)的體育活動(dòng)。郭玉軍、尉宏等在《實(shí)行職業(yè)實(shí)用性體育是中專衛(wèi)校體育改革的切入點(diǎn)》中定義為，職業(yè)實(shí)用性體育，（VPPE）即“vocation practicability physical education”對(duì)VPPE的理解就是利用體育具有多功能的特點(diǎn)，在發(fā)展一般身體素質(zhì)的基礎(chǔ)上，注意加強(qiáng)對(duì)學(xué)生特殊身體素質(zhì)、技能的發(fā)展和培養(yǎng)，以便更好地進(jìn)行職業(yè)活動(dòng)，并利用在校期間所學(xué)的實(shí)用性體育知識(shí)進(jìn)行合理有效的體育鍛煉，達(dá)到強(qiáng)身健體預(yù)防職業(yè)病的目的。
翁惠根在《體育教育改革與實(shí)踐的探索》一書中說：職業(yè)實(shí)用性體育課程是指以“準(zhǔn)職業(yè)人”（學(xué)生）目前所學(xué)專業(yè)、未來可能從事的第一職業(yè)崗位所需要的職業(yè)工作綜合能力為工作任務(wù)， 以培養(yǎng)和完善從事職業(yè)崗位所需要的職業(yè)體能、終身體育鍛煉能力、職業(yè)特殊身體素質(zhì)和綜合職業(yè)素質(zhì)為教學(xué)目標(biāo)而進(jìn)行有計(jì)劃、有目的的教育內(nèi)容的總和?！?】
結(jié)合以上分析，本人對(duì)職業(yè)實(shí)用性體育定義為：“職業(yè)實(shí)用性體育”是體育與健
康課程的一部分，即在發(fā)展一般身體素質(zhì)的基礎(chǔ)上，結(jié)合學(xué)生專業(yè)特點(diǎn)，注意加強(qiáng)對(duì)學(xué)生未來職業(yè)特殊體育知識(shí)、技術(shù)、技能、身體素質(zhì)、職業(yè)保健知識(shí)的教育，達(dá)到強(qiáng)身健體和預(yù)防職業(yè)病的目的，更好地服務(wù)于未來職業(yè)的一種教育活動(dòng)。
3.模塊設(shè)計(jì)：
“模塊”（module） 的概念是1976 年由美國教授邁克爾?加扎尼加（Michael Gazzaniga）提出的?！澳K”一詞最初是建筑、家具、計(jì)算機(jī)等行業(yè)的術(shù)語，后來才被廣泛地應(yīng)用于其它各技術(shù)領(lǐng)域。所謂模塊，是為了實(shí)現(xiàn)明確的教育目標(biāo)，圍繞某一特定主題，通過整合學(xué)生經(jīng)驗(yàn)和相關(guān)內(nèi)容而設(shè)計(jì)相對(duì)完整、獨(dú)立的學(xué)習(xí)單元。 在《普通高中課程方案（實(shí)驗(yàn)）》中對(duì)“模塊”的概念定義為：每一科目有若干模塊組成，模塊之間既相互獨(dú)立，又反應(yīng)學(xué)科內(nèi)容的邏輯關(guān)系。每個(gè)模塊都有明確的教育目標(biāo)，并圍繞一特定內(nèi)容，整合學(xué)生經(jīng)驗(yàn)和相關(guān)內(nèi)容，構(gòu)成相對(duì)完整的學(xué)習(xí)單元?！?】
設(shè)計(jì)：《現(xiàn)代漢語詞典》的解釋是 “在正式做某項(xiàng)工作之前，根據(jù)一定的目的要求，預(yù)先制定方法、圖樣等”。戈登.羅倫德在《設(shè)計(jì)與教學(xué)設(shè)計(jì)》中認(rèn)為：“設(shè)計(jì)就是為創(chuàng)造某種具有實(shí)際效用的新事物而進(jìn)行探索”。
本文認(rèn)為：職業(yè)實(shí)用性體育教學(xué)模塊設(shè)計(jì)就是依據(jù)學(xué)生專業(yè)特點(diǎn)，進(jìn)行崗位核心身體素質(zhì)分析以后，對(duì)教學(xué)內(nèi)容充新分解和構(gòu)建，圍繞核心身體素質(zhì)所進(jìn)行的一種教學(xué)設(shè)計(jì)和教學(xué)安排。
三、模塊設(shè)計(jì)理論構(gòu)想
1.模塊設(shè)計(jì)流程圖
模塊設(shè)計(jì)屬于教學(xué)設(shè)計(jì)，目的就是解決教學(xué)中的現(xiàn)實(shí)問題，也是對(duì)教學(xué)資源和程序作出有利于學(xué)習(xí)的安排。根據(jù)毛振明、于素梅兩位老師的《體育教學(xué)計(jì)劃編制技巧與案例》獲得啟發(fā)，從技校學(xué)生就業(yè)現(xiàn)實(shí)出發(fā)，在對(duì)體育教學(xué)過程中各因素進(jìn)行分析，然后進(jìn)行目標(biāo)的制定，教材的選取，場(chǎng)地器材的使用，將教學(xué)各要素有序，合理安排，形成教學(xué)方案的過程。
圖1 體育教學(xué)模塊設(shè)計(jì)流程圖【3】
2.技工學(xué)校職業(yè)實(shí)用性體育教學(xué)模塊設(shè)計(jì)具體方法
2.1確立研究專業(yè)與該專業(yè)的職業(yè)實(shí)用性體育核心身體素質(zhì)。技工學(xué)校專業(yè)分類眾多，每個(gè)專業(yè)的職業(yè)實(shí)用性性體育教學(xué)內(nèi)容也有所不同，所以我們要首先確立某個(gè)專業(yè)為研究對(duì)象，分析專業(yè)特點(diǎn)，專業(yè)職業(yè)實(shí)用性身體素質(zhì)類型。
2.2確立該專業(yè)學(xué)生進(jìn)行模塊內(nèi)容的選擇。可以是某個(gè)運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目，也可以是某幾個(gè)運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目，這取決于后續(xù)研究的能力水平。
2.3對(duì)該專業(yè)學(xué)生進(jìn)行模塊分析，包括學(xué)習(xí)需要，學(xué)習(xí)內(nèi)容，學(xué)習(xí)者等分析。
2.4進(jìn)行具體模塊設(shè)計(jì)。包括教學(xué)目標(biāo)的設(shè)計(jì)，教學(xué)策略的設(shè)計(jì)，教學(xué)媒體的設(shè)計(jì)，教學(xué)過程設(shè)計(jì)等。
2.5進(jìn)行模塊評(píng)價(jià)部分的設(shè)計(jì)。包括教學(xué)設(shè)計(jì)的評(píng)價(jià)部分，一般采用形成性評(píng)價(jià)和終結(jié)性評(píng)價(jià)相結(jié)合的辦法進(jìn)行。
2.6對(duì)模塊進(jìn)行反饋與修正。為了保證模塊設(shè)計(jì)的有效和完整，要在實(shí)踐中進(jìn)行檢驗(yàn)，根據(jù)反饋問題要及時(shí)進(jìn)行修正。可以咨詢專家和實(shí)際操作相互配合，以保證設(shè)計(jì)的科學(xué)性。
總之，技工學(xué)校職業(yè)實(shí)用性體育教學(xué)模塊設(shè)計(jì)屬于技工學(xué)校體育與健康課程改革的一部分，在技工學(xué)校還是起步階段，我們要借鑒高職院校職業(yè)實(shí)用性體育和高中模塊教學(xué)的成功經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合技工學(xué)校自身特點(diǎn)，設(shè)計(jì)出適合我們技工學(xué)校的職業(yè)實(shí)用性體育教學(xué)模塊設(shè)計(jì)，為技工學(xué)校的體育與健康課程改革作出我們技工人的努力。
參考文獻(xiàn)
