時(shí)間：2023-03-14 15:17:41
序論：速發(fā)表網(wǎng)結(jié)合其深厚的文秘經(jīng)驗(yàn)，特別為您篩選了11篇禁煙標(biāo)語范文。如果您需要更多原創(chuàng)資料，歡迎隨時(shí)與我們的客服老師聯(lián)系，希望您能從中汲取靈感和知識！
在室內(nèi)公共場所吸煙，就是犯法！
《公共場所衛(wèi)生管理?xiàng)l例實(shí)施細(xì)則》規(guī)定，室內(nèi)公共場所禁止吸煙！
吸煙有害健康
遠(yuǎn)離煙草，崇尚健康，愛護(hù)環(huán)境
遠(yuǎn)離煙草，拒吸第一支煙；凈化空氣，保護(hù)環(huán)境衛(wèi)生
燃燒的是香煙，消耗的是生命。
無煙世界，清新一片。
小小一支煙，危害萬萬千。
健康，隨煙而逝；病痛，伴煙而生！
無煙的環(huán)境，健康的身體。
愛健康，全民禁煙大行動(dòng)。
熄滅香煙，點(diǎn)燃文明。
健康隨煙而逝，病痛伴煙而生
現(xiàn)在吞云吐霧，以后病痛纏身
燃燒的是香煙，消耗的是生命
摒棄吸煙陋習(xí)，創(chuàng)造健康新時(shí)尚
還人類一片清新，請丟掉手中的香煙
第二組：公共場所禁煙標(biāo)語
5月31日為世界無煙日，公共場所和工作場所禁止吸煙已成為時(shí)代潮流，吸煙是繼戰(zhàn)爭、饑餓和瘟疫之后，對人類生存的最大威脅。
1、小小一支煙，危害萬萬千。
2、健康，隨煙而逝；病痛，伴煙而生！
3、為了愛你和你愛的人，請不要吸煙。
4、現(xiàn)在吞云吐霧，以后病痛纏身。
5、 No smoking , No crying.
6、青煙長在，惡夢長隨。
7、 香煙是魔鬼的契約。
8、 提神不妨清茶；消愁不如朋友；若吸煙，又何苦？
9、我最怕最怕煙霧蒙蒙，看不清看不清你的面容。
10、 不一定煙霧繚繞的地方才是天堂。
11、健康隨煙而滅！有多少生命可以重來？
12、 無煙世界，清新一片。
13、吸煙，我們可以選擇，那么，生命呢？
14、還人類一片清新，請丟掉手中的香煙。
15、點(diǎn)燃香煙的一剎那，你也點(diǎn)燃了死亡的導(dǎo)火索。
16、 不抽一支煙，快樂似神仙！
17、讓你的肺清亮一點(diǎn)。
18、 煙緲緲兮肺心寒，尼古丁一進(jìn)兮不復(fù)還。
19、 曾經(jīng)有一堆煙擺在我面前，我沒好好珍惜，現(xiàn)在后悔莫及；如果上天，再給我一次機(jī)會(huì)，我會(huì)對那鬼東西吆一聲“get out”。
20、它（吸煙）是你最簡單的快樂，也讓你最徹底地哭泣。
21、都說吸煙的男人夠?yàn)t灑，可知香煙的危害有多大？
22、 請把火柴留給你的生日蠟燭，而不是香煙。
23、蠟燭---燃燒自己，照亮別人；香煙---燃盡自我，貽害眾生。做蠟燭or吸煙？
24、燃燒的是香煙，消耗的是生命。
25、 It is easier to start than it is to stop.
Tobacco , it”s killing the one you love.
26、吸煙幾時(shí)止？美景幾時(shí)還？青春何能駐？生命何與共？只愿君能禁吸煙，盼回“無煙好世界”！
27、千山鳥飛絕，萬徑人蹤滅。吞云吐霧中，物物皆湮滅。
28、摒棄吸煙陋習(xí)，創(chuàng)造健康新時(shí)尚
哥倫布于1492年1月11日首度在美洲接觸煙草，然后引進(jìn)到歐洲，逐漸傳遍全世界。
1996年，第49屆世界衛(wèi)生大會(huì)在日內(nèi)瓦舉行，大會(huì)發(fā)表了關(guān)于吸煙的第一份世界綜合性報(bào)告《警惕煙草》，報(bào)告指出： “香煙每10秒鐘殺害一個(gè)人，估計(jì)世界上每年有300萬人死于吸煙。倘若煙草消費(fèi)量維持目前的增長率，那么到2010年前后每年死亡人數(shù)可能達(dá)到1000萬，其中70％的受害者在發(fā)展中國家”。
我國男性吸煙率雖整體下降，但仍然保持很高的水平，最近一次全國吸煙行為流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，男性人群吸煙率為57%，吸煙行為幾乎沒有什么限制。這也是造成不吸煙者在多種場所接觸“二手煙”的主要原因。
2、現(xiàn)在吞云吐霧，以后病痛纏身。
3、你的香煙，我的石油，注定我們不能相愛——吸煙者禁入。
4、讓你的肺清亮一點(diǎn)。
5、珍惜生命，崇尚文明生活；熱愛生命，養(yǎng)成良好習(xí)慣。
6、遠(yuǎn)離煙草，崇尚健康，愛護(hù)環(huán)境。
7、它（吸煙）是你最簡單的快樂，也讓你最徹底地哭泣。
8、摒棄吸煙陋習(xí)，創(chuàng)造健康新時(shí)尚。
9、吸煙，我們可以選擇，那么，生命呢？
10、千山鳥飛絕，萬徑人蹤滅。吞云吐霧中，物物皆湮滅。
11、煙緲緲兮肺心寒，尼古丁一進(jìn)兮不復(fù)還。
12、不一定煙霧繚繞的地方才是天堂。
13、煙，盼回“無煙好世界”！
14、請不要讓你的自私點(diǎn)燃我的大樓——請勿吸因（商場禁煙）
15、想說愛你（吸煙）并不是很容易的事，那需要太大的勇氣。
16、點(diǎn)燃你的煙，污染了空氣，害了人性命，良心在哪里！
17、人，請不要吸煙。
18、點(diǎn)燃香煙的一剎那，你也點(diǎn)燃了死亡的導(dǎo)火索。
19、生命只有一次，怎能斷送在香煙上？
20、吸煙有害健康。
21、還人類一片清新，請丟掉手中的香煙。
22、拒絕煙草，珍愛生命。
23、為了你和家人的健康，請不要吸煙。
24、蠟燭---燃燒自己，照亮別人；香煙---燃盡自我，貽害眾生。做蠟燭or吸煙？
25、曾經(jīng)有一堆煙擺在我面前，我沒好好珍惜，現(xiàn)在后悔莫及；如果上天，再給我一次機(jī)會(huì)，我會(huì)對那鬼東西吆一聲“getout”。
26、吸煙是繼戰(zhàn)爭、饑餓和瘟疫之后，對人類生存的最大威脅。
27、都說吸煙的男人夠?yàn)t灑，可知香煙的危害有多大？
28、有時(shí)候相愛是一種無奈，有時(shí)候離開是另一種安排。為了愛你和你愛的。
29、無煙世界，清新一片。
30、健康隨煙而滅！有多少生命可以重來？
31、提神不妨清茶；消愁不如朋友；若吸煙，又何苦？
32、吸煙幾時(shí)止？美景幾時(shí)還？青春何能駐？生命何與共？只愿君能禁吸。
33、如果你想吸煙，定時(shí)炸彈在身邊?。佑驼窘麩煟?/p>
34、健康，隨煙而逝；病痛，伴煙而生！
35、一時(shí)的快樂，永恒的傷痛——請勿吸煙。
36、請把火柴留給你的生日蠟燭，而不是香煙。
37、小小一支煙，危害萬萬千。
38、遠(yuǎn)離煙草，拒吸第一支煙；凈化空氣，保護(hù)環(huán)境衛(wèi)生。
39、千萬別點(diǎn)著你的煙，它會(huì)讓你變?yōu)橐豢|青煙（加油站禁煙）
40、不抽一支煙，快樂似神仙！
盛年不重來，一日難再晨，及時(shí)當(dāng)勉勵(lì)，歲月不待人。
把德性教給你們的孩子：使人幸福的是德性而非金錢，這是我的經(jīng)驗(yàn)之談，在患難中支持我的是道德，使我不曾自殺的，除了藝術(shù)以外也是道德。
一寸光陰一寸金，寸金難買寸光陰。
失去金錢的人損失甚少，失去健康的人損失極多，失去勇氣的人損失一切。
（來源：文章屋網(wǎng) ）
ぶ型擠擲嗪:J 604
文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A
文章編號:1004-2072(2007)02-0055-03
おオ
聲樂藝術(shù)的獨(dú)特魅力不僅在于美妙聲音的展現(xiàn)，更在于真摯情感的抒發(fā)，聲樂演唱中的情感表現(xiàn)早已成為廣大聲樂理論工作者的重要課題，這方面的文獻(xiàn)十分豐富。但大多數(shù)的文章都是從作品的理解、情感基調(diào)、音高、節(jié)奏、音色、調(diào)式、調(diào)性、以及嗓音表現(xiàn)的感知等微觀的角度進(jìn)行分析與闡釋，而忽略了重要的宏觀思考原則。鑒于此，本文擬從宏觀的視角，追溯聲樂藝術(shù)情感表現(xiàn)的歷史發(fā)展軌跡，扼要闡釋歌劇詠嘆調(diào)的戲劇性、藝術(shù)歌曲的文學(xué)性和民歌的民俗性。
一、聲樂藝術(shù)情感表現(xiàn)的歷史演進(jìn)
ィㄒ唬┞蘊(yùn)該欄枋貝聲樂表現(xiàn)
ト魏窩莩藝術(shù)都是隨著時(shí)展變化的，聲樂藝術(shù)也不例外，即人們對于音樂情感表現(xiàn)的認(rèn)知和聲樂藝術(shù)的審美標(biāo)準(zhǔn)亦會(huì)隨之變化。 18世紀(jì)初至19世紀(jì)中是美歌(Bel canto)的黃金時(shí)代，不僅要求歌者以輕松、流暢的方法唱出均勻、響亮、圓潤、統(tǒng)一（無明顯的聲區(qū)轉(zhuǎn)換痕跡）的聲音，元音純正、吐字清晰，同時(shí)亦要求歌手具有非凡的技巧，寬廣而靈活的音域，各聲部都能即興演唱華彩樂段等。那時(shí)大量樂譜是手抄的，一般只提供一個(gè)簡單的旋律輪廓，這就要求歌手以各種裝飾，如滑音、跳音、抖音、波音及華彩樂句等來豐富它。這種即興的演唱被稱為"隨意唱"（Cantar al mente），歌手必須掌握具有獨(dú)創(chuàng)性的個(gè)人絕技和手段，在沒有音樂創(chuàng)作和樂隊(duì)效果或戲劇結(jié)構(gòu)的幫助下，創(chuàng)造出激動(dòng)人心的舞臺(tái)效果。
ピ諗分奚樂發(fā)展歷程中，美歌時(shí)代是聲音唯美、歌手高于一切的時(shí)代，人們并不認(rèn)為作曲家或劇作家是演出成功的關(guān)鍵。正因?yàn)檫@樣，閹人歌手一度獨(dú)霸歌壇，他們的聲音既有男聲的力度，也有女聲的高度，能達(dá)至當(dāng)時(shí)所認(rèn)為的聲樂藝術(shù)的最高美感。 雖然也有少數(shù)女歌唱家登上歌劇舞臺(tái)試圖與閹人歌唱家分庭抗禮，如：苔希（V.Tesi 1700-1775）、彭蒂（B.Banti 1756-1806）、卡塔拉尼（A.Catalani 1780-1849）等，但她們在舞臺(tái)上演唱并無創(chuàng)新，仍是一味賣弄花腔而不顧歌曲的內(nèi)涵和音樂情感的表現(xiàn)。這種唯美的聲樂藝術(shù)標(biāo)準(zhǔn)一直持續(xù)到以帕斯塔為代表的一批新型女歌唱家的出現(xiàn)才得以改變。
ィǘ）歌劇演唱轉(zhuǎn)變的代表
歐洲從19世紀(jì)20年代起，最典型的代表是帕斯塔（G.Pasta 1798-1865）。因她原本是戲劇演員，其聲音技巧并不完美，亦不完全符合當(dāng)時(shí)要求的規(guī)范，嗓音的音色也不吸引人，但她以一種飽滿的熱情及扣人心弦的魅力征服了聽眾。最主要的原因就是她深刻地理解劇情，她一登場就以宣敘調(diào)進(jìn)入角色，寓情于聲，全身心地以真實(shí)感情吸引聽眾，讓聽眾如臨其境。她把自己與所演角色融為一體，把歌唱與戲劇融為一體，使得19世紀(jì)30年代的歌劇演唱風(fēng)格發(fā)生了劃時(shí)代的轉(zhuǎn)變。 女高音再不只是像小鳥一般發(fā)出婉轉(zhuǎn)的高音：唱著膚淺的花腔，在舞臺(tái)上好似牽線木偶般地游蕩，而是有著真實(shí)深沉、感人肺腑之聲的、氣度非凡的悲劇演員。帕斯塔的創(chuàng)新及她的特殊才能，為歐洲歌劇演唱戲劇化做出了巨大的貢獻(xiàn)。她的創(chuàng)造改變了多尼采蒂的藝術(shù)生涯與影響了貝里尼的創(chuàng)作風(fēng)格。貝里尼的《夢游女》 、《諾瑪》等都是受到她特殊才能的啟發(fā)而創(chuàng)作的。
ビ紗絲芍，聲樂藝術(shù)的審美標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)歷了以歌手至上、聲音唯美到寓情于聲、聲情并茂的發(fā)展過程，從此，具有創(chuàng)新精神與真實(shí)的戲劇情感、能刻畫人物心靈的聲樂演唱，成為了歌劇音樂美學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)。
二、不同類型聲樂情感表現(xiàn)的衡量標(biāo)準(zhǔn)
ィㄒ唬杈纈教鏡韉南肪縲
雖然，歌劇詠嘆調(diào)和藝術(shù)歌曲在音樂表現(xiàn)上都是音樂與歌詞的結(jié)合、人聲與器樂的結(jié)合，都是以舞臺(tái)藝術(shù)為表演形式的，但歌劇詠嘆調(diào)的音樂情感表現(xiàn)為戲劇角色的情感，除了帶有直接的"語義性"音樂表情外，其音樂情感的表現(xiàn)還直接或間接地來自于戲劇上的、特殊情感的造型創(chuàng)作--即詠嘆調(diào)音樂情感表現(xiàn)上的角色化、戲劇化的創(chuàng)作，是戲劇角色的獨(dú)唱曲，是對角色"具體情感"的特殊刻畫，其音樂情感不能脫離戲劇因素而獨(dú)立存在，因此它是客觀的戲劇化的聲樂現(xiàn)象。
例如，歌劇《托斯卡》中的選段"為藝術(shù)，為愛情"是托斯卡在假意答應(yīng)警察署長時(shí)演唱的。一個(gè)善良的女伶在警察署長威逼利誘可又無力反抗下，心里充滿仇恨，但她深深地愛著她的情人，充滿對幸福生活的向往。演唱者只有體會(huì)了托斯卡愛恨交加的復(fù)雜情感后，把自己與所演角色融為一體，才能準(zhǔn)確地塑造托斯卡熱愛生活、向往愛情的熱望以及 無力反抗、走投無路的悲傷與絕望
歌劇演唱要求體驗(yàn)人物，以真實(shí)的戲劇性與音樂情感協(xié)調(diào)、統(tǒng)一的演唱，亦是歌劇美學(xué)的基本準(zhǔn)則。
ィǘ）藝術(shù)歌曲的文學(xué)性
藝術(shù)歌曲文辭性較強(qiáng)、音樂的專業(yè)特點(diǎn)比較突出，其音樂情感表現(xiàn)與歌劇詠嘆調(diào)的情感表現(xiàn)不同，是聲樂、器樂和詩歌結(jié)合的統(tǒng)一體，帶有較強(qiáng)的文學(xué)性和器樂性。其情感表現(xiàn)在很大程度上來自于詩歌或詩人的情感，歌唱者的情感表現(xiàn)相對而言是比較獨(dú)立、自由、完整的。
ナ艿賾頡⑹貝、詩詞影響較大、音樂語義也較強(qiáng)的是19世紀(jì)浪漫主義音樂品種之一的德奧藝術(shù)歌曲。這些藝術(shù)歌曲的歌詞大都采用19世界著名浪漫主義詩人的抒情詩歌，為了表現(xiàn)出詩歌的意境、幽靜、細(xì)膩、浪漫等格調(diào)與深刻的寓意、深沉的情感，演唱時(shí)就要求充分運(yùn)用聲樂技巧和音樂文學(xué)藝術(shù)修養(yǎng)， 例如運(yùn)用輕聲、半聲和在高聲區(qū)上漸弱的表現(xiàn)手段等。這些藝術(shù)歌曲雖也運(yùn)用美聲唱法，但演唱風(fēng)格與演唱歌劇時(shí)迥然不同。它的演唱具有室內(nèi)樂的特點(diǎn)，以抒情、敘事、吟誦為主，不像歌劇演唱要求戲劇性，或有大幅度的、強(qiáng)烈的音量變化與對比。
ノ了豐富音樂情感的表現(xiàn)，藝術(shù)歌曲在音樂情感表現(xiàn)上賦予聲樂形態(tài)與器樂形態(tài)以同等重要的地位。藝術(shù)歌曲的伴奏聲部起著獨(dú)立作用，旨在揭示旋律聲部沒有直接表現(xiàn)出的心理內(nèi)容。因此，藝術(shù)歌曲的聲樂表現(xiàn)是立體式的，旋律聲部僅僅是立體詩意空間的一部分，這就要求歌唱者在演唱旋律時(shí)，除了保持聲樂情感表現(xiàn)中的文學(xué)價(jià)值與深刻內(nèi)涵、掌握音色變化、吐字清晰之外，還必須保持著對器樂伴奏（鋼琴或其他）具有敏銳的感知力。例如，演唱舒伯特、舒曼等人的藝術(shù)歌曲，必須注意其伴奏的藝術(shù)表現(xiàn)力。除個(gè)別情況外，古典樂派藝術(shù)歌曲的伴奏僅是歌聲部分的和聲與節(jié)奏的烘托，而浪漫派作家的藝術(shù)歌曲卻給予鋼琴伴奏以音樂形象性及獨(dú)立的作用。這方面的先驅(qū)者舒伯特做出了杰出的貢獻(xiàn)，他使歌詞、旋律、伴奏三者結(jié)合，相輔相成，融為一體，意境完美。最典型的歌曲，如《魔王》（歌德詞），在148小節(jié)的貫穿發(fā)展過程中，從4個(gè)不同的人物（講述者，父親，病兒和魔鬼）的不同角度，用不同音色、心情和語氣，通過調(diào)性的對比轉(zhuǎn)換，織體，力度和音樂旋律線條的變化被生動(dòng)地體現(xiàn)出來：魔鬼的誘惑，兒子的呼救與父親的緊張不安，講述者宣敘性的音調(diào)和鋼琴伴奏始終疾馳，并以三連音來描寫急迫的馬蹄聲，用低聲部描述黑松林中的寒風(fēng)呼嘯聲，從定型化織體戛然而止及最后的和弦，與歌者共同營造出緊張陰森的意境和氣氛。フ饈資敉ㄌ謇嘈偷男鶚賂棖，充分體現(xiàn)舒伯特藝術(shù)歌曲其伴奏部分的音樂形象和獨(dú)立作用，當(dāng)歌唱者演唱其藝術(shù)歌曲時(shí)對器樂伴奏（鋼琴）應(yīng)認(rèn)真理解、感知，必須深刻理解、細(xì)心衡量這些美感的尺度，歌唱的音樂美感表現(xiàn)才能全方位的符合藝術(shù)歌曲音樂美學(xué)的要求，從而能準(zhǔn)確理解、規(guī)范和把握藝術(shù)歌曲音樂情感表現(xiàn)的尺度。
3.民歌的民俗性
ッ窀璧墓餐特點(diǎn)是：簡明精煉，質(zhì)樸無華，曲詞順暢，有著濃郁的地方風(fēng)格和可親的鄉(xiāng)土氣息，篇幅一般不大，但邏輯嚴(yán)密，能體現(xiàn)一個(gè)民族現(xiàn)實(shí)生活的價(jià)值。一個(gè)民族的民歌與該民族的地理環(huán)境、人文歷史、生活習(xí)俗等有很大關(guān)系，不同民族都有自己民族獨(dú)特的民俗性，因此，民間歌曲都有各自不同的聲樂表達(dá)方式和情感韻味的表現(xiàn)形式。同藝術(shù)歌曲相比，民歌的情感表現(xiàn)可以在一條樸素單一的音樂旋律上完美展現(xiàn)出來。
ダ如，我國的民族風(fēng)格色彩是南方偏于柔美細(xì)膩，如江南民歌《茉莉花》，具有濃郁江南民歌韻味的歌曲，旋律流暢，優(yōu)美抒情，清新雅致，表現(xiàn)了一位少女對生活的炙熱情感和少女的含蓄恬抒，頗有江南水鄉(xiāng)的詩情畫意般。而我國北方的民歌則較為剛健豪放。如《牧歌》展現(xiàn)在人們面前的是一幅遼闊壯麗的畫卷：藍(lán)藍(lán)的天空，一望無際的草原，白云下的無數(shù)羊群，表現(xiàn)了游牧民族熱愛生活、無拘無束的豪放情懷。
民歌的民俗性還體現(xiàn)在地方俗語在歌詞中的運(yùn)用和演唱的方言色彩，取消了不同民族或地方語言的音調(diào)作用，也就取消了不同民族或地域聲樂藝術(shù)的不同風(fēng)格與色彩的表現(xiàn)。例如《長沙山歌》，歌詞是："郎在那外間打山歌，姐在那房內(nèi)織綾羅，我不曉得禾只個(gè)上屋，下屋，嶺前，坳背，巧娘，巧爺，生出咯樣聰明伶俐的崽喲，打出咯樣干干凈凈，索索利利，漂洋過海，鉆天入地的好山歌，打得那鯉魚子鉆不得水，打得黃牛子滾下坡，我綾羅子不織聽山歌。娘罵女你咯只死妖婆，你為何綾羅不織聽山歌，郎的山歌聽不得，他要打得你去把他做堂客。叫聲媽媽你莫罵我，你老年輕頭里也愛聽山歌，你不聽山歌又禾得有我，我不聽山歌又禾只有外孫伢子喊你做外婆。"歌詞中不少詞匯如"不曉得"，"禾只個(gè)"，"咯樣"，"崽"，"堂客"等字里行間浸透了長沙方言的韻味，是湘方言口頭語的鮮明表現(xiàn)，而拖腔拉音的旋律節(jié)奏正是湘民歌民俗性的體現(xiàn)。
ヒ隕媳收嘰雍旯鄣氖詠親匪萘松樂藝術(shù)情感表現(xiàn)的歷史發(fā)展軌跡，了解了聲樂藝術(shù)的審美標(biāo)準(zhǔn)從歌手至上、聲音唯美到寓情于聲、獨(dú)具特色聲情并茂的發(fā)展過程。同時(shí)，為了避免聲樂表演中的情感表現(xiàn)的一般化現(xiàn)象，重點(diǎn)闡釋了歌劇詠嘆調(diào)的戲劇性、藝術(shù)歌曲的文學(xué)性和民歌的民俗性，它們既是聲樂情感表現(xiàn)的衡量標(biāo)準(zhǔn)，也是聲樂藝術(shù)表演者成功與否的關(guān)鍵。
ピ鶉偽嗉:陳達(dá)波
ゲ慰嘉南祝
ァ1〕金衛(wèi)國.西方聲樂體裁的歷史演變與形式含量的增長〔J〕.載《中國音樂學(xué)》2004年2期
ァ2〕李兆國.試析美國人的時(shí)這觀在美國文化中的投影〔J〕.《聊城師范學(xué)院學(xué)報(bào)：哲學(xué)社會(huì)科學(xué)版》2000年3期
ァ3〕呂曉紅.談?wù)劦聤W藝術(shù)歌曲〔J〕.《 自貢師范高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)》2003年18卷2期
ァ4〕姚小蘭.歌唱情感的表達(dá)〔J〕.《藝?！?005年2期
ァ5〕尚家驤.歐洲聲樂發(fā)展史〔J〕.載《華東出版社》2003年第一版
ァ6〕于潤楊.西方音樂通史》〔J〕.載《上海音樂出版社》2001年5月第一版
ァ7〕李維渤：《西洋聲樂發(fā)展概略〔J〕.載《世界圖書出版西安公司出版公司》1999年12月第一版
ァ8〕連波.國樂飄香〔J〕.載《人民音樂出版社》2001年7月北京第一版
ァ9〕金衛(wèi)國.西方聲樂體載的歷史演變與形式含量的增長〔J〕.《中國音樂學(xué)》2004年2期
ァ10〕余篤剛.聲樂藝術(shù)美學(xué)〔J〕.載《人民音樂出版社》2005年10月第一版
Historical Development and Measurable Standardof Emotion Expression of Vocal Music
心理學(xué)家的研究發(fā)現(xiàn)：無聲語言所顯示的意義要比有聲語言多得多，而且更加深刻。對此，有這樣一個(gè)公式：信息的傳遞=7%言語+38%語音+55%表情。
所以，一名優(yōu)秀的醫(yī)生，不僅要語言表達(dá)流暢，而且要精心設(shè)計(jì)自己的非語言體系，讓肢體語言自然、流暢、合理地表達(dá)出無聲的意涵，襯托出語言背后的無窮魅力。
肢體語言是給人的
第一印象
在某種特殊情況下，肢體語言不但可以單獨(dú)使用，甚至還可以表達(dá)出有聲語言難以表達(dá)的思想感情，直接代替自然有聲語言。
廣泛性：
與有聲語言配合默契
肢體語言的使用簡便快捷、靈活自由。只要人們張口說話，都會(huì)有意或無意地運(yùn)用肢體語言來傳情達(dá)意，交流信息。
有時(shí)，肢體語言甚至先于自然有聲語言，在接受者的心目中形成第一視覺形象，直接影響自然有聲語言的表達(dá)效果;有時(shí)，說話人在不開口的情況下，單純運(yùn)用肢體語言，也能傳達(dá)一定的信息。
有時(shí)候，患者在問醫(yī)生問題的時(shí)候，有的醫(yī)生頭都不抬，只是用一根手指，不耐煩地在臺(tái)板下壓著的文字上急促地點(diǎn)擊幾下――這樣的肢體語言，就是告訴患者：我忙著呢！你自己看！不是說過很多次了嗎？你怎么還不懂啊？
在醫(yī)生與患者的交談中，幾乎沒有只運(yùn)用自然有聲語言而不運(yùn)用肢體語言的。它總是與自然有聲語言配合默契，協(xié)調(diào)一致，相輔相成，相得益彰。
直觀性：
人體圖像更形象
有聲語言直接訴諸于人的聽覺器官，不具有視覺的形象可感性;而肢體語言則不同，它以靈活多變的表情、動(dòng)作、體姿構(gòu)成一定的人體圖像來表情達(dá)意，交流信息，直接訴諸于人的視覺器官，具有形象直觀的特點(diǎn)。
如形容物體的大小，用手勢來比劃，對某事物表示贊成或反對，采用點(diǎn)頭或搖頭的方式等，就具有鮮明的形象直觀性。
患者在問醫(yī)生具體關(guān)于病情的相關(guān)問題的時(shí)候，醫(yī)生可以借助肢體語言，讓問題的表達(dá)更加直觀、形象、生動(dòng)，從而打消患者的顧慮。用手比劃一下，患者可以知道未來的創(chuàng)口究竟有多大。用手示意一下球體的大小，可以形象地傳達(dá)病灶的危險(xiǎn)性，讓患者充分知情，而不要一味的猜測，惴惴不安。
對應(yīng)性：
互動(dòng)更協(xié)調(diào)
肢體語言不但要與有聲語言協(xié)調(diào)配合，而且交談雙方，要協(xié)調(diào)配合，雙向交流，才能達(dá)到交談的目的。
美國著名人類學(xué)家霍爾曾指出這種人類交際的常見現(xiàn)象：一個(gè)人傾聽別人說話時(shí)，總會(huì)望著對方的臉，尤其是他的眼睛;為了表示注意，聽話者會(huì)輕輕地點(diǎn)頭，或者說“嗯”、是的，如果哪句話他深表贊同，點(diǎn)頭就點(diǎn)得很深;如果感到懷疑，他就會(huì)揚(yáng)起或皺起眉頭來，或者嘴角向下拉;要是不想再聽下去，就會(huì)將身子挪一挪，把腿伸一伸，或者移開視線，不再注視說話人等等。以上說的種種現(xiàn)象，正是對應(yīng)性的表現(xiàn)。
所以，當(dāng)患者在向醫(yī)生陳述病情的時(shí)候，醫(yī)生切忌頭都不抬，而是應(yīng)該看著患者，并以同理心仔細(xì)呼應(yīng)患者的表達(dá)。這既是對患者的尊重，也是很好的路徑去察覺患者的未發(fā)之音。尤其是通過面部表情，可以傳達(dá)對患者的認(rèn)可、顧慮，以及疑惑、追問，從而更好地與患者交流。
依賴性：
與有聲語言相輔相成
肢體語言對有聲語言和具體言語環(huán)境的依存性，決定了它表意的多義性。離開了自然有聲語言，離開了一定的言語環(huán)境，肢體語言在當(dāng)時(shí)特定的含義就不明確，就難于辨析和領(lǐng)會(huì)。
患者，在醫(yī)生面前，屬于絕對的弱勢群體。出于對疾病的恐懼和擔(dān)心，又囿于專業(yè)知識的缺乏，患者往往渴望醫(yī)生給予更多的關(guān)注、關(guān)懷和支持、鼓勵(lì)。有的醫(yī)生明明成竹在胸，但是，沉默不語，或者偶爾發(fā)聲，只言片語，那么，患者就會(huì)更加焦慮不堪。如果我們的醫(yī)生善于表達(dá)，充分告知，輔助于強(qiáng)有力的肢體語言，比如，有力的揮手、堅(jiān)定的握拳、雙手自上而下的下壓……就會(huì)讓患者信心滿滿，精神大振。
肢體語言透露出的
秘密
醫(yī)生在與患者交談時(shí)，都會(huì)自覺或不自覺地用眼睛、面孔、身體和態(tài)度來表達(dá)自己的真正感覺，這就是肢體語言實(shí)現(xiàn)的過程。
握手是一種肢體語言
一個(gè)人的身體語言反映一個(gè)人的感覺，而恰到好處地用力握手對交談也至關(guān)重要。握手的方式，往往在不知不覺向別人透露不少你自身的秘密。
目光是一種肢體語言
握手，是肢體語言的一種，然而不管和對方是輕輕相握還是緊緊相握，眼睛卻決定著握手的性質(zhì)。也就是說，目光更能表達(dá)出你交談的意圖。醫(yī)生和藹的目光，是醫(yī)者真摯心靈的自然投射，讓患者及其家屬充分地感到你的尊重、寬容和教養(yǎng)有素。
微笑是一種肢體語言
人們常贊美蒙娜麗莎的微笑，說她具有永恒的魅力。那么，她的魅力究竟在哪兒？蒙娜麗莎畢竟只是一張畫。她永遠(yuǎn)不會(huì)開口，誰也不能知道她會(huì)說些啥。然而，她的微笑，她的眼神和表情卻一直在不停地“說話”。廣義而言，笑容都是美的、好的，因此即使一個(gè)天生嚴(yán)肅的人也可以通過訓(xùn)練成為一個(gè)愛笑的人。
善用體姿語言
提升自我魅力
體姿語言，是利用人的身體姿勢變化來傳情迭意的肢體語言。體姿語言包括站姿、坐姿、步姿、蹲姿、臥姿等。這里我們主要分析一下站姿、坐姿的選擇，來提升醫(yī)生的專業(yè)權(quán)威性，獲得患者的認(rèn)同。
說話時(shí)的站姿
站姿，是身軀站立起來說話的姿態(tài)。主要通過肩、腰、腿、腳等動(dòng)作的變化來傳情達(dá)意。
如果站著和患者交流，醫(yī)生必須自信滿滿，體現(xiàn)出職業(yè)的權(quán)威性，不能過于放松、神情倦怠、甚至過于嘻哈、休閑、缺乏專業(yè)性。
通常的情況是：兩腿站直，胸部挺起，雙手自然下垂，雙目平視，表明精神振作，充滿自信。如果將雙手自然下垂，改成背后相交，就更顯得精神飽滿而有氣勢;兩腿略屈，兩腳稍微分開，身體重心不斷由這只腳移到另一只腳，胯骨放松，會(huì)顯得輕松自如，神態(tài)自若;兩腿分開，上身挺直，雙手叉腰，是極端自信的姿勢。
說話時(shí)的坐姿
更多的時(shí)候，尤其是門診醫(yī)生，是坐著和患者交流。
Abstract：Drug target discovery and verification is not only the first step of investigation of new drug， but also one of the most important factors in drug screening and directional synthesis. With the fast development of genomics， proteomics， bioinformatics and the advancement of new techniques， such as RNA interference and bacteriophage display， the discovery and verification of drug target is changing with every passing day. In the present paper， the development and successful cases of drug discovery and verification were reviewed.
Key words： Drug target;Target discovery;Target verification
藥物靶標(biāo)是尋找藥物的基礎(chǔ)，在過去的幾個(gè)世紀(jì)中，人們很大程度上是依賴目前已知的五百多個(gè)藥物靶標(biāo)來發(fā)現(xiàn)藥物?；蚪M研究表明，人類有3～4萬個(gè)基因和更多的蛋白質(zhì)，其中許多蛋白質(zhì)是控制人類疾病的潛在的藥物靶點(diǎn)，因此至少有 9/10 的藥物靶點(diǎn)蛋白尚未被發(fā)現(xiàn)。發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證藥物新靶標(biāo)對闡明疾病原因、藥物作用機(jī)制具有重要意義，是產(chǎn)生“重磅炸彈”式創(chuàng)新藥物的源頭。近年來，隨著基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、生物信息學(xué)的快速發(fā)展，以及RNA干擾、噬菌體展示等新興技術(shù)的出現(xiàn)，新的藥物靶標(biāo)搜尋和驗(yàn)證方法不斷出現(xiàn)。因此，本文擬從基因水平、轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平，就藥物靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證技術(shù)的研究進(jìn)展作一綜述。
1基因水平的藥物靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證
1.1從基因數(shù)據(jù)庫中搜尋藥物靶標(biāo)20世紀(jì)90年代以來，表達(dá)序列標(biāo)簽(expressed sequence tag，EST)數(shù)據(jù)庫被廣泛應(yīng)用于新基因搜尋，如成功搜尋到了組織蛋白酶K 和阿立新受體等[1]。相對于EST 數(shù)據(jù)庫，人類基因組數(shù)據(jù)庫的序列信息更為完整，但它不能提供不同組織的表達(dá)信息，因此人們開始將EST 數(shù)據(jù)庫與基因序列數(shù)據(jù)庫結(jié)合起來搜索新的藥物靶標(biāo)。2001年，3個(gè)不同研究小組分別應(yīng)用不同方法，以H3 受體為參照，利用BLAST，F(xiàn)AST-PAN 和TFAST 程序，搜索到5 種新的H4 基因，這些基因都以標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)方法確認(rèn)，可作為疾病治療候選藥物靶標(biāo)。
1.2基因芯片技術(shù)基因芯片技術(shù)是在微小的基片表面集成了大量的分子識別探針，應(yīng)用已知核酸序列作為探針與互補(bǔ)的靶核苷酸序列雜交，通過隨后的信號檢測進(jìn)行定性與定量分析?；蛐酒夹g(shù)可以同時(shí)篩選、鑒別藥物或疾病相關(guān)基因，同時(shí)將這些基因與之功能聯(lián)系起來，因此在藥物靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證過程中是一個(gè)強(qiáng)有力的工具。但是由于芯片技術(shù)本身尚不十分成熟，在大量數(shù)據(jù)處理之后還需要大量的驗(yàn)證工作;它反映的是mRNA 表達(dá)水平，而這未必與蛋白表達(dá)和功能一致，這使它在藥物靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證領(lǐng)域的應(yīng)用受到一定限制。雖然如此，仍有許多成功應(yīng)用的例子[2]。此外，基因芯片技術(shù)在阿爾茨海默病[3]、帕金森病[4]、惡性腫瘤[5]等疾病的藥物靶標(biāo)研究中也發(fā)揮了很大作用。
1.3基因敲除技術(shù)基因敲除(gene knockout)是指對一個(gè)結(jié)構(gòu)已知、而功能未知的基因，從分子水平上設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將該基因去除，或用其它序列相近的基因取代，然后從整體觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，推測相應(yīng)基因的功能?；蚯贸Ｐ驮诎l(fā)現(xiàn)基因功能和藥物作用新靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)方面具有高度價(jià)值，同時(shí)也有助于確定藥物作用于特定靶點(diǎn)后的不良反應(yīng)。目前，研究者正在系統(tǒng)地敲除鼠固有基因，并根據(jù)哺乳動(dòng)物生理學(xué)特點(diǎn)確定它們在體內(nèi)的功能，這一研究足已覆蓋幾乎所有的蛋白質(zhì)和可用于藥物研究的基因家族，如離子通道、核激素受體、蛋白酶、磷酸二酯酶、激酶、磷酸酶及其它關(guān)鍵的酶類。同時(shí)，基因敲除技術(shù)也已廣泛應(yīng)用于確證藥物在免疫[6]、動(dòng)脈粥樣硬化[7，8]、高血壓病[9]、糖尿病[10]和腫瘤[11]等疾病中的作用靶點(diǎn)。
2轉(zhuǎn)錄水平的藥物靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證
2.1反義寡核苷酸技術(shù)反義寡核苷酸技術(shù)是利用反義寡核苷酸或修飾的寡核苷酸與特定靶mRNA 的一部分互補(bǔ)，抑制mRNA 的翻譯和剪接，從而抑制其編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)。與基因敲除技術(shù)相比，盡管這種方法是一種更加省時(shí)省力的研究目的基因的強(qiáng)大工具，但還是有局限性，如體內(nèi)應(yīng)用時(shí)生物利用度有限，毒性較大。利用反義技術(shù)驗(yàn)證藥物靶標(biāo)也有一些成功的例子。如Jarvis等[12]利用磷酸化的反義序列作用于P2X3 受體的1100～1119 和1166～1185 位點(diǎn)序列，證明P2X3 受體是慢性炎癥和神經(jīng)痛的重要角色，據(jù)此為靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)了一種小分子A-317491。Okabe 等[13]利用cDNA 芯片技術(shù)分析臨床肝癌樣品發(fā)現(xiàn)，DDEFL1(development and differentiation enhancing factor-like 1)基因在肝癌組織中表達(dá)異常，進(jìn)而以硫代反義核酸抑制此基因的表達(dá)，結(jié)果腫瘤細(xì)胞的生長受到抑制，提示DDEFL1 可以作為肝癌的潛在治療靶點(diǎn)。
2.2RNA干擾 (RNA interference， RNAi) 技術(shù)
2.2.1RNA干擾用于發(fā)現(xiàn)新藥靶RNA干擾技術(shù)自誕生以來，已被廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)的發(fā)現(xiàn)與確證，這主要是由于該技術(shù)具有很多其他技術(shù)所無法比擬的優(yōu)點(diǎn)：能特異高效地抑制基因表達(dá)，獲得去基因功能表型;僅需要少量的核酸序列信號，而且不被蛋白結(jié)構(gòu)影響;siRNA 的合成和控制較基因敲除或其他方法簡單易行、資金消耗少、周期短，使得我們能夠在短時(shí)間內(nèi)大規(guī)模篩選靶點(diǎn)，而且可以通過質(zhì)?；虿《据d體表達(dá)的小發(fā)卡RNA(small hairpin RNA， shRNA)干擾目的基因，從而達(dá)到了在細(xì)胞水平和動(dòng)物水平篩選藥物靶標(biāo)的目的[14， 15]。研究表明，RNAi 技術(shù)能快速有效地鑒別藥物新靶點(diǎn)，RNAi 文庫的應(yīng)用將為腫瘤和感染性疾病等的發(fā)病機(jī)制和治療研究提供理論依據(jù)和新的切入點(diǎn)。
2.2.2RNA干擾輔助藥物靶點(diǎn)的確證高通量篩選技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)和某種疾病相關(guān)的藥物靶點(diǎn)庫，然而要完全確定某蛋白在某種疾病中的重要性或某種蛋白在某種藥物發(fā)揮藥效中的作用，要看在動(dòng)物模型內(nèi)阻斷候選基因是否能減緩病癥或拮抗藥物原有的藥理活性，甚至在人體內(nèi)驗(yàn)證。鑒于近來向活體中轉(zhuǎn)染siRNA 技術(shù)的不斷提高，在動(dòng)物模型中的應(yīng)用也取得進(jìn)展，于是利用RNAi 阻斷模擬人疾病狀態(tài)的動(dòng)物模型中的基因的表達(dá)，對靶點(diǎn)進(jìn)行深入的鑒定和評價(jià)呈現(xiàn)出潛在的優(yōu)勢。Brummelkamp 等[16]通過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的shRNA 表達(dá)系統(tǒng)靶向K-rasV12 的mRNA，轉(zhuǎn)染人胰腺癌細(xì)胞，結(jié)果驗(yàn)證了K-rasV12 是胰腺癌中一個(gè)很好的抗腫瘤藥物靶點(diǎn)，同時(shí)也說明RNAi 可以驗(yàn)證藥物篩選中候選靶點(diǎn)在活體內(nèi)的功能，為鑒定候選靶點(diǎn)最終是否能作為新藥靶提供了有力的證據(jù)。
3蛋白水平的藥物靶標(biāo)
發(fā)現(xiàn)與驗(yàn)證人類基因組計(jì)劃大規(guī)模測序?yàn)閯?chuàng)新藥物的研究提供了前所未有的機(jī)遇，但是生命活動(dòng)是通過DNA 到RNA 到蛋白質(zhì)來實(shí)現(xiàn)的。藥物作用的基礎(chǔ)也是蛋白質(zhì)而非 RNA/ DNA [17]。蛋白水平的藥物靶標(biāo)研究具有更加重大的意義。迄今，已發(fā)現(xiàn)的大部分藥物靶標(biāo)都是來自蛋白水平研究。蛋白水平藥物靶標(biāo)的研究方法也是層出不窮，人們不僅通過蛋白質(zhì)組學(xué)[18， 19]、蛋白芯片[20]、噬菌體展示[21， 22]等技術(shù)大規(guī)模篩選藥物靶標(biāo)，而且還利用親和色譜[23～25]、酵母三雜交系統(tǒng)[26，27]、磁性納米探針技術(shù)[28]等發(fā)現(xiàn)了很多天然活性化合物或其衍生物的作用靶點(diǎn)。
3.1親和色譜技術(shù)在藥物靶標(biāo)研究的漫長發(fā)展歷程中，親和色譜技術(shù)是最經(jīng)典的一種技術(shù)。由于它具有能直接分離各種組織、細(xì)胞中的天然狀態(tài)蛋白、操作方便、穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，長期以來被廣泛應(yīng)用于藥物靶蛋白的分離。迄今為止，親和色譜法已成功應(yīng)用于FK506[23]、環(huán)孢菌素[24]等多種藥物靶蛋白的搜尋。常用的親和色譜法包括固相洗脫、藥物競爭法等，如果親和柱(柱材——藥物)與靶蛋白解離過慢，則很難洗脫下來，須制備無活性結(jié)構(gòu)類似藥物的對照柱;如果藥物溶解性差，蛋白會(huì)隨不溶的藥物沉淀，則無效。2006-05報(bào)道的一種稱為“系列親和色譜法”的改良親和色譜法，則不受藥物溶解性、配基-蛋白復(fù)合物解離速度的影響，適合于溶解性較差的化合物，該方法已經(jīng)甲氨喋呤、FK506 等藥物的靶點(diǎn)尋找上得到了驗(yàn)證[25]。作者也采用系列親和色譜法首次發(fā)現(xiàn)了麥冬活性成分——魯斯可皂苷元的特異性結(jié)合蛋白(另文發(fā)表)。
3.2噬菌體展示技術(shù)噬菌體展示技術(shù)是一種有效的藥物靶點(diǎn)篩選工具，它可以將外源蛋白或多肽呈現(xiàn)在噬菌體表面，利用外源蛋白或多肽與待篩選藥物的特異性親和作用，通過吸附-洗脫-擴(kuò)增的篩選富集過程，將表達(dá)與藥物特異性結(jié)合的外源蛋白或多肽的噬菌體大量富集，然后通過測序分析即可得到與藥物特異性結(jié)合的外源蛋白或多肽。這一技術(shù)將基因型和表型、分子結(jié)合活性和噬菌體的可擴(kuò)增性巧妙的結(jié)合起來，是一種高效的篩選體系，同時(shí)也是一種探討受體和配體之間相互作用的結(jié)合位點(diǎn)、尋求高親合力結(jié)合配體的有力工具。據(jù)報(bào)道，Rodi[21]等利用噬菌體展示技術(shù)，對抗癌藥物紫杉醇進(jìn)行篩選，獲得了紫杉醇在體內(nèi)的藥物作用的靶點(diǎn)Bcl-2 蛋白。Jin[22]等利用噬菌體展示技術(shù)，通過固定化阿霉素篩選T7噬菌體人類肝臟的cDNA 文庫，得到了阿霉素的靶點(diǎn)蛋白hNopp140。
3.3三雜交系統(tǒng)三雜交系統(tǒng)(three-hybrid system)是近幾年在酵母雙雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展的由活性小分子鑒定靶蛋白的方法。其基本原理與酵母雙雜交類似，只是在“鉤”與“魚”之間加了“餌”構(gòu)成三雜交中的3個(gè)組分：其中的“餌”是一種修飾過的活性小分子，是由活性小分子和配體A 連接而成：“鉤”是由配體A 的受體蛋白與DB 融合而成;“魚”是由cDNA 庫中的蛋白融合在AD 上構(gòu)成。當(dāng)待篩選靶組織的cDNA 庫中的某一蛋白與小分子相互作用時(shí)報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄被啟動(dòng)，這時(shí)細(xì)胞可被明顯檢測。Becker 等用周期素依賴性蛋白激酶(CDK)抑制劑作為餌，采用該方法從人cDNA 庫中篩選到多種CDK抑制劑的靶蛋白[26]。此外，在哺乳動(dòng)物組織細(xì)胞中采用三雜交系統(tǒng)篩選活性小分子的靶蛋白也已獲得成功[27]。
3.4蛋白芯片技術(shù)蛋白質(zhì)芯片是一種類似于基因芯片的高通量篩選方法。利用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)可以從正常細(xì)胞和病變細(xì)胞的蛋白質(zhì)的變化中發(fā)現(xiàn)疾病相關(guān)蛋白，這些相關(guān)蛋白經(jīng)研究篩選后可能成為藥物的新靶點(diǎn)。Fong 等[20]借助蛋白質(zhì)芯片發(fā)現(xiàn)TROP2 將成為口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌的診斷治療和抗口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌藥物研究的新靶點(diǎn)。
4展望
雖然目前確定的藥物靶點(diǎn)還很少，藥物靶標(biāo)的發(fā)現(xiàn)與驗(yàn)證的各種方法也存在種種不足，毫無疑問人類基因組框架圖的繪制完成，功能基因組研究的深入，為發(fā)現(xiàn)更多藥物靶標(biāo)提供了可能，這將有利于藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)的進(jìn)程。同時(shí)，生命科學(xué)與化學(xué)、物理學(xué)、信息學(xué)等其他學(xué)科進(jìn)一步的交融，將為各種技術(shù)方法不斷發(fā)展完善奠定基礎(chǔ)。相信隨著功能基因組研究的深入及生物技術(shù)的快速發(fā)展，人類將能夠更加明確地闡明疾病的病理生理機(jī)制、藥物治療作用及其毒性作用的分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)更多可以治療疾病的藥物作用靶點(diǎn)或靶點(diǎn)組合，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)更好的藥物，提高人類的生活質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)
[1]Sakurai T， Amemiya A， Ishii M， et al. Orexins and orexin receptors: a family of hypothalamic neuropeptides and protein-G coupled receptors that regulate feeding behaviour [J]. Cell， 1998， 92 (4): 573.
[2]Jayapal M， Melendez AJ. DNA microarray technology for target identification and validation [J]. Clin Exp Pharm Physiol， 2006， 33 (5):371.
[3]鄭越， 程肖蕊， 周文霞， 等. DNA微陣列技術(shù)在阿爾茨海默病及其防治藥物研究中的應(yīng)用[J]. 生物技術(shù)通訊， 2007， 18 (2): 320.
[4]Grunblatt E， Mandel S， Maor G， et al. Gene expression analysis in N-methyl-4-phenyl-1， 2， 3， 6-tetrahydropyridine mice model of Parkinson′s disease using cDNA microarray: effect of R-apomor-Phine [J]. J Neurochem， 2001， 78 (1): 1.
[5]Stam RW， den Boer ML， Meijerink JP， et al. Differential mRNA expression of Ara-C-metabolizing enzymes explains Ara-C sensitivity in MLL gene-rearranged infant acute lymphoblastic Leukemia [J]. Blood， 2003， 101(4): 1270.
[6]Thal MA， Carvalho TL， He T， et al. Ebf1-mediated down-regulation of Id2 and Id3 is essential for specification of the B cell lineage [J]. Proc Natl Acad Sci. USA， 2009， 106 (2): 552.
[7]Tanaka R， Miwa Y， Mou K， et al. Knockout of the l-pgds gene aggravates obesity and atherosclerosis in mice [J]. Biochem Biophys Res Commun， 2009， 378 (4): 851.
[8]Cao RY， St. Amand T， Gr?bner R， et al. Genetic and pharmacological inhibition of the 5-lipoxygenase/leukotriene pathway in atherosclerotic lesion development in ApoE deficient mice [J]. Atherosclerosis， 2008， 203 (5): 395.
[9]Sun Z， Cade R， Zhang Z， et al. Angiotensinogen gene knockout delays and attenuates cold-induced hypertension [J]. Hypertension， 2003， 41(2):322.
[10] Chen WS， Peng X， Wang Y， et al. Leptin deficiency and beta-cell dysfunction underlie type 2 diabetes in compound Akt knockout mice [J]. Mol Cell Biol， 2009， 29 (11): 3151.
[11]Rao CV， Lei ZM. Consequences of targeted inactivation of LH receptors [J]. Mol Cell Endocrinol， 2002， 187 (1): 57.
[12] Jarvis MF， Burgard EC， McGaraughty S， et al. A-317491， a novel， potent and selective non-nucleotide antagonist of P2X3 and P2X2/3 receptors reduces chronic inflammatory and neuropathic pain in rat [J]. Proc Natl Acad Sci USA， 2002， 99 (26):17179.
[13]Okabe H， Furukawa Y， Kato T， et al. Isolation of development and differentiation enhancing factor-like 1 (DDEFL1) as a drug target for hepatocellular carcinomas [J]. Int J Oncol， 2004， 24 (1): 43.
[14]Brummelkamp TR， Bernards R. New tools for functional mammalian cancer genetics [J]. Nat Rev Cancer， 2003， 3 (10): 781.
[15]Hannon GJ， Rossi J. Unlocking the potential of the human genome with RNA interference [J]. Nature， 2004， 431 (3): 371.
[16]Brummelkamp TR， Bernards R， Agami R. Stable suppression of tumorigenicity by virus-mediated RNA interference [J]. Cancer Cell， 2002， 2 (3):243.
[17]Latterich M， Abramovitz M， Leyland-Jones B. Proteomics: New technologies and clinical applications [J]. Eur J Cancer， 2008， 44: 2737.
[18]Celis JE， Rasmussen HH， Vorum H， et al. Bladder squamous cell carcinomas express psoriasin and externalize it to the urine [J]. J Urol， 1996， 155 (6): 2105.
[19]Zhou C， Nitschke AM， Xiong W， et al. Proteomic analysis of tumor necrosis factor-alpha resistant human breast cancer cells reveals a MEK5/Erk5-mediated epithelial-mesenchymal transition phenotype [J]. Breast Cancer Res， 2008， 10 (6): R105.
[20]Fong D， Spizzo G， Gostner JM， et al. TROP2: A novel prognostic marker in squamous cell carcinoma of the oral cavity [J]. Mod Pathol， 2008， 21 (2): 186.
[21]Rodi DJ， Janes RW， Sanganee Hitesh J， et al. Screening of a library of phage-displayed peptides identifies human Bcl-2 as a taxol-binding protein [J]. J Mo Biol， 1999， 285 (1):197.
[22] Jin T， Yu J， Yu Y. Identification of hNopp140 as a binding partner for doxorubicin with a phage display cloning method [J]. Chem Biol， 2002， 9 (2): 157.
[23]Kuramochi K， Miyano Y， Enomoto Y， et al. Identification of small molecule binding molecules by affinity purification using a specific ligand immobilized on PEGA resin [J]. Bioconjugate Chem， 2008， 19 (12): 2417.
[24]Tanaka A. Identification of the specific binding proteins of bioactive small compound using affinity resins [J]. Methods Mol Biol， 2009， 577: 181.
[25]Yamamoto K， Yamazaki A， Takeuchi M， et al. A versatile method of identifying specific binding proteins on affinity resins [J]. Anal Bioch， 2006， 352 (1): 15.
Abstract： Chronic kidney disease(CKD), characterized by high incidence, poor health outcomes and high treatment costs, imposes a huge burden on individuals and society. Renal tubulointerstitial fibrosis and renal medulla hypoxia are believed to be the main causes of CKD progression. At present, ultrasound-guided renal biopsy is the gold standard for the evaluation and diagnosis of renal fibrosis. However, it is difficult to carry out follow-up monitoring in clinical practice because it is an invasive test with certain side effects and poor repeatability. MRI can provide information about tissue structure noninvasively, and advances in MRI functional imaging techniques offer promise for unique insights into renal function and fibrosis severity, but its potential to assess fibrosis and inflammation in diseased kidneys remains unclear. This paper reviews the research progress of functional magnetic resonance imagingin the diagnosis of chronic kidney disease.
Keyword： functional magnetic resonance imaging; chronic kidney disease; renal fibrosis;
慢性腎臟病目前已成為影響全球約10%人口的主要全球公共衛(wèi)生問題，每年造成數(shù)百萬人死亡，并且數(shù)十萬人需要通過透析來維持生命[1]。因此，讓慢性腎病引起人們的足夠重視，并且做到早診斷，早治療，防止病情惡化，改善患者預(yù)后是非常必要的。
1 、慢性腎病的病理學(xué)基礎(chǔ)
大量研究表明，腎間質(zhì)纖維化是多種腎臟疾病進(jìn)展到慢性腎病的共同途徑和病理基礎(chǔ)[2,3]，在腎間質(zhì)纖維化過程中，首先組織因受損啟動(dòng)了腎臟纖維化，而纖維化會(huì)導(dǎo)致腎小管萎縮，毛細(xì)血管進(jìn)行性減少，導(dǎo)致腎臟灌注減低[4,5]，導(dǎo)致血流減少和向腎臟實(shí)質(zhì)的腎小管上皮細(xì)胞的氧氣輸送減少，又可以進(jìn)一步促進(jìn)纖維化[6]。因此，毛細(xì)血管丟失不僅是纖維化腎的關(guān)鍵特征，而且是與纖維化相關(guān)的進(jìn)一步損傷的驅(qū)動(dòng)因素[7,8]。隨著腎單位的瘢痕形成，沉積的細(xì)胞外基質(zhì)會(huì)增加[9]，從而增加腎臟的僵硬度。
有研究表明，在腎間質(zhì)纖維化形成的慢性進(jìn)展過程中，患者早期可以沒有明顯的臨床表現(xiàn)，甚至在腎小球纖維化時(shí)，腎小球?yàn)V過率(glomerular filtration rate,GFR)仍可維持?jǐn)?shù)年，直到腎小球間質(zhì)纖維化的發(fā)展，最終導(dǎo)致GFR下降[10]，因此在腎小球纖維化發(fā)展為嚴(yán)重的腎損傷之前，早期發(fā)現(xiàn)纖維化并定量評價(jià)纖維化程度在理論上可以早期評估患者病情進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)，由于許多新的抗纖維化藥物正在開發(fā)中，這種早期的鑒定可能在患者發(fā)展為明顯的腎功能障礙之前，給予藥物干預(yù)，早期治療，有助于延緩腎纖維化的發(fā)生及發(fā)展[11]，改善患者預(yù)后，提高患者生存質(zhì)量。
2 、慢性腎病診斷金標(biāo)準(zhǔn)
腎活檢是目前用組織學(xué)技術(shù)對腎纖維化進(jìn)行特異性診斷和分期的金標(biāo)準(zhǔn)[12]，但因其具有創(chuàng)傷性，可重復(fù)性差，不適用于疾病進(jìn)展或治療反應(yīng)的長期監(jiān)測，盡管近年來這種檢查技術(shù)變得更加安全，但并發(fā)癥和局限性依然存在。首先，腎臟穿刺活檢有出血的風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重者還可能會(huì)產(chǎn)生動(dòng)靜脈瘺和腎周軟組織感染，甚至死亡[12,13]。其次，因?yàn)榛顧z樣本的直徑只有2 mm，即使是“滿意的”樣本也幾乎不包括髓質(zhì)，因此腎活檢分析也必然受到抽樣偏差的影響[14]。
考慮到這些安全性和取樣問題，患者往往不愿接受活檢，當(dāng)非侵入性檢測不能提供診斷時(shí)，臨床醫(yī)生往往得不到有助于臨床診療決策的關(guān)鍵信息。因此盡管活檢是目前評估腎纖維化的金標(biāo)準(zhǔn)，但從臨床和研究的角度來看，它都是不完善的。很顯然，安全、準(zhǔn)確地評估全腎纖維化負(fù)擔(dān)的非侵入性新方法是必要的。
3 、慢性腎病的MRI研究進(jìn)展
傳統(tǒng)的MRI通常無法實(shí)現(xiàn)組織纖維化成像，然而，結(jié)合對纖維化病理生理學(xué)的進(jìn)一步理解，有學(xué)者使用釓對比劑增強(qiáng)MRI行心肌纖維化成像取得諸多成效[15,16]，這也為MRI纖維化成像提供了可能性，然而，由于釓對比劑對腎功能障礙患者的風(fēng)險(xiǎn)，這些技術(shù)不能適用于腎臟[17]。值得注意的是，隨著磁共振功能成像技術(shù)的進(jìn)展，其他無釓技術(shù)也已被開發(fā)出來，例如擴(kuò)散加權(quán)成像(diffusion-weighted imaging,DWI)、動(dòng)脈自旋標(biāo)記成像(arterial spin labeling,ASL)、磁共振彈性成像(magnetic resonance elastography,MRE)、血氧水平依賴性磁共振成像(blood oxygenation level-dependent MRI,BOLD-MRI)以及磁化轉(zhuǎn)移成像等，有望改善無創(chuàng)地檢測腎臟內(nèi)結(jié)構(gòu)、功能和分子變化的能力。有幾篇文章評論了這些無創(chuàng)MRI技術(shù)在腎臟中的應(yīng)用[18,19,20]，包括Ebrahimi等[21]對腎臟功能MRI的精彩綜述，認(rèn)識到微血管損傷和腎硬化對腎臟纖維化的重要性。
3.1、 擴(kuò)散加權(quán)成像
DWI是一種能夠無創(chuàng)地探測到組織中自由水分子布朗運(yùn)動(dòng)的磁共振成像技術(shù)，通常用ADC來描述水分子的凈移動(dòng)。腎間質(zhì)纖維化的病理表現(xiàn)包括腎小管周圍微血管減少、細(xì)胞外間質(zhì)中成纖維細(xì)胞的增殖以及基質(zhì)沉淀，這些改變均有可能導(dǎo)致組織中水分子的擴(kuò)散受限，從而減低ADC值。
在動(dòng)物模型和人類中的大量研究表明，與健康腎臟相比，患病腎臟的ADC值顯著降低[22]。目前的證據(jù)表明DWI對腎間質(zhì)變化特別敏感，例如腎纖維化、細(xì)胞(炎性或腫瘤性)浸潤和水腫[23]，腎纖維化核心活檢標(biāo)本的纖維化百分率與ADC顯著相關(guān)[24]。近年來大量的研究顯示，CKD患者腎臟的ADC值與其腎纖維化量呈負(fù)相關(guān)[25]，并且隨著慢性腎病患者腎功能的降低，腎臟的ADC值也明顯下降[26,27]。
使用體素內(nèi)不相干運(yùn)動(dòng)(intravoxel incoherent motion,IVIM)模型對擴(kuò)散信號進(jìn)行高級建模，分別估計(jì)擴(kuò)散(ADC擴(kuò)散)和灌注(ADC灌注)對總ADC值的貢獻(xiàn)[28,29]，這種能力可能會(huì)極大地提高對擴(kuò)散機(jī)制的理解。Feng等[30]和Deng等[31]利用IVIM-DWI評估2型糖尿病患者的早期腎功能變化，發(fā)現(xiàn)IVIM參數(shù)值在檢測早期腎臟變化中比白蛋白/肌酐比值更敏感。Mao等[29,32]用IVIM-DWI對于腎臟功能和CKD病理學(xué)的無創(chuàng)評估可能是可行的，尤其是在早期發(fā)現(xiàn)腎功能不全時(shí)。
DWI的另一個(gè)延伸序列稱為擴(kuò)散張量成像(diffusion t e n s o r i m a g i n g,DTI)，使用各向異性分?jǐn)?shù)(f r a c t i o n a l anisotropy,FA)來測量沿不同軸線的水的流動(dòng)性。因此，理論上使用擴(kuò)散張量成像有利于捕捉到水在特定方向運(yùn)動(dòng)的有序結(jié)構(gòu)的破壞，例如大腦中的軸突或腎臟中的小管?；谶@種功能，DWI已被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)成像，特別是缺血性腦損傷的早期檢測和腫瘤成像[33,34]。有關(guān)腎臟的研究顯示，由于腎小管結(jié)構(gòu)的存在，使得腎髓質(zhì)內(nèi)各向異性程度比腎皮質(zhì)更高；使用DTI，無論GFR是否降低，CKD患者腎皮質(zhì)及髓質(zhì)的FA值明顯低于健康對照組，對腎小球病變及腎小管損傷行進(jìn)量化評分顯示，F(xiàn)A與損傷評分呈負(fù)相關(guān)[24,35]。
總之，DWI可能是所有類型CKD的首選成像技術(shù)，甚至在腎功能衰退之前，用于評估組織纖維化程度、預(yù)測功能演變和跟蹤治療過程中出現(xiàn)的微結(jié)構(gòu)變化，這可以減少診斷和隨訪的腎活檢的數(shù)量[25]。為了提高DWI的特異性，將其與其他有前途的MRI (多參數(shù)MRI)相結(jié)合進(jìn)行腎組織表征和隨訪，將有助于對正常和病變腎臟進(jìn)行完整的形態(tài)學(xué)和功能評估。
3.2 、腎臟血氧水平依賴MRI
考慮到腎實(shí)質(zhì)缺氧會(huì)引起一系列復(fù)雜的細(xì)胞因子和其他因素的激活，最終引起腎小管間質(zhì)纖維化，導(dǎo)致腎功能進(jìn)行性受損。利用這一現(xiàn)象，Ogawa等[36]用一種對血氧變化敏感的技術(shù)BOLD-MRI對腎臟進(jìn)行成像，獲取圖像用來估計(jì)組織的含氧量，目前，BOLD-MRI已被廣泛驗(yàn)證為腦氧合的一種測量方法[37]。Prasad等[38]首先在腎臟中進(jìn)行了BOLD-MRI測試，結(jié)果顯示髓質(zhì)的T2*信號低于皮質(zhì)，這與髓質(zhì)在近缺氧條件下工作的事實(shí)相符。另有研究[39]顯示糖尿病患者的腎皮質(zhì)及髓質(zhì)R2*信號均明顯高于正常對照組。髓質(zhì)R2*信號與腎小球?yàn)V過率呈正相關(guān)，皮質(zhì)R2*信號強(qiáng)度與e GFR呈負(fù)相關(guān)。髓質(zhì)與皮質(zhì)R2*值之比在糖尿病早期升高，隨著糖尿病腎病的加重而降低。Feng等[40]的研究表明髓質(zhì)R2*值可能是一種新的更敏感的糖尿病腎病早期預(yù)測指標(biāo)。同時(shí)，BOLD-MRI檢測到單純糖尿病期髓質(zhì)缺氧，DTI未檢測到此期髓質(zhì)定向擴(kuò)散的變化，基于上述假設(shè)，筆者推測BOLD成像對早期腎功能改變的評估可能比DTI更敏感。
3.3 、動(dòng)脈自旋標(biāo)記成像
ASL通過磁標(biāo)記動(dòng)脈血液來測量組織灌注。由于腎臟較高的生理灌注，原則上腎臟是可以用磁共振動(dòng)脈自旋標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行灌注成像的理想臟器。ASL在動(dòng)物[41]和人類[42]中的應(yīng)用表明，與金標(biāo)準(zhǔn)的測量相比，該技術(shù)提供了合理的、可重復(fù)的腎皮質(zhì)微血管血流估計(jì)。廣泛的研究表明，ASL對動(dòng)脈狹窄或腎臟疾病的再循環(huán)是敏感的[43]。在CKD病人中，ASL顯示的微血管流速隨著e GFR不同程度減低而減低[44,45]?？紤]到腎纖維化與毛細(xì)血管損失和微血管灌注受損有關(guān)，CKD中可見的ASL反映的血流減少可能是衡量全腎纖維化負(fù)擔(dān)的替代指標(biāo)，也可能預(yù)測進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)。一項(xiàng)糖尿病腎病的研究顯示[46],ASL血流量的MRI可以無創(chuàng)測量腎皮質(zhì)組織灌注的減少，且隨著病程的進(jìn)展，組織灌注減少。
雖然腎臟ASL是一種具有腎間質(zhì)纖維化的潛能，還有一些局限性需要解決。首先，測量結(jié)果受到低信噪比和相應(yīng)的低分辨率的困擾，這限制了對皮質(zhì)和髓質(zhì)進(jìn)行分別評估的能力，尤其是對皮質(zhì)變薄的慢性損傷的腎臟。其次，ASL測量腎髓質(zhì)灌注是困難的，因?yàn)樗栀|(zhì)只接收總腎血流的10%，使得ASL信號通常比大腦皮層弱，那么要進(jìn)行多次采集來改善信號測量，但這會(huì)延長掃描時(shí)間，使ASL對呼吸運(yùn)動(dòng)偽影更敏感。Nery等[47]應(yīng)用背景抑制3D梯度自旋回波序列(a single-shot background-suppressed 3D gradient and spin-echo,3D-GRASE)可明顯改善ASL的運(yùn)動(dòng)偽影，使其可應(yīng)用于患有重度腎病的兒童。
3.4、 磁共振彈性成像
腎纖維化的另外一個(gè)重要特征經(jīng)常被忽視，那就是腎臟硬度的增加。器官硬化是由柔軟的腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞被剛性纖維基質(zhì)所替代[48]，并通過這些基質(zhì)膠原纖維的交聯(lián)進(jìn)一步增強(qiáng)；這種器官硬化可以通過MRE來捕捉，得到組織剛度和感興趣區(qū)域彈性可視化的定量值[40]。Rouvière等[50]首次顯示了MRE在健康成年人中的可行性和可重復(fù)性。MRE已經(jīng)是一種成熟的肝纖維化成像技術(shù)，已被證明可以準(zhǔn)確反映活檢來源的肝纖維化測量結(jié)果[51],MRE用于腎臟的可行性已在國內(nèi)外多項(xiàng)研究中得到證實(shí)。在一項(xiàng)動(dòng)物研究中，MRE被用于檢測豬慢性腎動(dòng)脈狹窄引起的髓質(zhì)纖維化，研究結(jié)果表明隨著腎組織纖維化的增加，MRE測得髓質(zhì)剛度值也明顯增加[52]。然而Brown等[46]對CKD患者腎臟MRE的一項(xiàng)研究顯示MRE的剛度會(huì)隨著CKD的惡化而降低，這很可能與較低的血液流速引起的組織膨大有關(guān)。
雖然這些初步研究結(jié)果令人鼓舞，但仍存在一些問題，與相對同質(zhì)的肝臟不同，腎臟在結(jié)構(gòu)上非常不均勻，因此，從活檢取樣點(diǎn)測量的硬度指標(biāo)是否與活檢獲得的纖維化評分有更好的相關(guān)性需要進(jìn)一步驗(yàn)證。
3.5 、其他成像方法
過度的組織瘢痕形成或纖維化是導(dǎo)致終末期腎臟疾病的關(guān)鍵因素，磁化轉(zhuǎn)移成像(magnetization transfer-MRI,MT-MRI)利用附著在基質(zhì)蛋白等大分子上的水質(zhì)子(與自由水分子的質(zhì)子相比)的不同磁性能，提供有關(guān)組織大分子組成的間接信息。Jiang等[20]應(yīng)用該技術(shù)對進(jìn)行的腎動(dòng)脈狹窄手術(shù)的小鼠在基線及術(shù)后不同時(shí)段進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，腎動(dòng)脈狹窄的腎臟，磁化轉(zhuǎn)移率顯示從基線到術(shù)后6周逐漸增加(皮層和髓質(zhì)分別增加13.7%和21.3%)，同時(shí)還伴有腎臟容量、灌注、血流量和氧合的逐漸減少，并且患側(cè)腎臟的磁化傳遞比圖顯示與離體標(biāo)本測得的纖維化程度有良好的相關(guān)性；另外，該研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步改進(jìn)研究方案，在膠原體膜中選擇合適的MT參數(shù)，并將其應(yīng)用于體內(nèi)磁化轉(zhuǎn)移成像，研究結(jié)果證實(shí)了MTI在評估豬腎動(dòng)脈狹窄性腎臟纖維化中的作用，研究顯示無論腎皮層還是髓質(zhì)，在頻率為600 Hz和1000 Hz時(shí)的磁化轉(zhuǎn)移率均與天狼星紅染色法測定的腎間質(zhì)纖維化呈良好的相關(guān)性[53]。
T1 mapping、T2 mapping：前面筆者闡述的腎纖維化的成像方法主要集中在MRI功能成像模式上，即圖像要么揭示腎臟的微血管灌注、氧合情況，要么就是腎臟硬化的改變，而目前，基于MRI的技術(shù)也在發(fā)展中，以檢查纖維化組織的其他特性。有一項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明[54]，慢性腎病模型中腎纖維化程度與T1值呈良好的正相關(guān)性。
分子MRI也是檢測和評估器官病變的先進(jìn)MRI工具。最近的一項(xiàng)研究取得了顯著進(jìn)展。Sun等[43]使用彈性蛋白磁共振特異性顯像劑(elastin-specific magnetic resonance imaging agent,ESMA)進(jìn)行無創(chuàng)性分析腎纖維化，彈性蛋白在健康的小鼠、大鼠和人的腎臟中幾乎不表達(dá)，而在進(jìn)行性CKD的皮質(zhì)、髓質(zhì)和血管周圍區(qū)域中過表達(dá)；其次，在已經(jīng)建立的纖維化模型給予伊馬替尼進(jìn)行治療，發(fā)現(xiàn)治療后ESMA分子成像獲得的信號強(qiáng)度顯著低于對照組小鼠，說明彈性蛋白成像可以對腎纖維化進(jìn)行重復(fù)和可重復(fù)的評估，從而準(zhǔn)確記錄抗纖維化治療的效果。
4 、小結(jié)
間質(zhì)纖維化是慢性腎損傷的主要原因，目前主要靠腎活檢組織學(xué)來對其評價(jià)，功能磁共振成像克服了活檢分析的創(chuàng)傷性和取樣偏差限制，為腎纖維化評估的無創(chuàng)成像提供了廣泛的可能性。以上筆者已經(jīng)強(qiáng)調(diào)了幾種基于MRI的技術(shù)，它們可以展示腎臟纖維化的兩個(gè)重要病理特征：毛細(xì)血管減少和腎硬化，但每種方法仍需要進(jìn)一步的發(fā)展和驗(yàn)證。到目前為止，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示MR結(jié)果與腎纖維化和腎功能有良好的相關(guān)性，尤其是DWI可在一定程度上反映腎間質(zhì)纖維化的程度，ASL及BOLD-MRI則與腎間質(zhì)氧分壓則有很好的相關(guān)性；但是這些研究成果都處于基礎(chǔ)階段，還不能適用于臨床，這需要繼續(xù)發(fā)展和改進(jìn)MRI腎臟成像方法來評估腎纖維化，早日將其轉(zhuǎn)化為臨床成果。
利益沖突：無。
參考文獻(xiàn)
[1] Chevalier RL. Evolutionary nephrology. Kidney Int Rep, 2017, 2(3):302-317.
[2] Szeto SG, Narimatsu M, Lu M, et al. Yap/taz are mechanoregulators of tgf-β-smad signaling and renal fibrogenesis. J Am Soc Nephrol, 2016,27(10):3117-3128.
[3] Brown CA, Elliott J, Schmiedt CW, et al. Chronic kidney disease in aged cats:Clinical features, morphology, and proposed pathogeneses.Vet Pathol, 2016, 53(2):309-326.
[4] Tanaka T. A mechanistic link between renal ischemia and fibrosis. Med Molecul Morphology, 2017, 50(1):1-8.
[5] Romagnani P, Remuzzi G, Glassock R, et al. Chronic kidney disease.Nat Rev Dis Primers, 2017, 55(Suppl 2):S116-117.
[6] Fine LG, Norman JT. Chronic hypoxia as a mechanism of progression of chronic kidney diseases:From hypothesis to novel therapeutics. Kidney Int, 2008, 74(7):867-872.
[7] Hayer MK, Price AM, Liu B, et al. Diffuse myocardial interstitial fibrosis and dysfunction in early chronic kidney disease. Am J Cardiol,2018, 121(5):656-660.
[8] Guzzi F, Cirillo L, Roperto RM, et al. Molecular mechanisms of the acute kidney injury to chronic kidney disease transition:An updated view. Int J Mol Sci, 2019, 20(19):4941.
[9] Breyer MD, Susztak K. The next generation of therapeutics for chronic kidney disease. Nat Rev Drug Discov, 2016, 15(8):568-588.
[10] Schena FP, Gesualdo L. Pathogenetic mechanisms of diabetic nephropathy. J Am Soc Nephrol, 2005, 16(Suppl 1):S30-33.
[11] Leung G, Kirpalani A, Szeto SG, et al. Could mri be used to image kidney fibrosis? A review of recent advances and remaining barriers.Clin J Am Soc Nephrol, 2017, 12(6):1019-1028.
[12] Esposito V, Mazzon G, Baiardi P, et al. Safety and adequacy of percutaneous kidney biopsy performed by nephrology trainees. BMC nephrology, 2018, 19(1):14-15.
[13] Redfield RR, McCune KR, Rao A, et al. Nature, timing, and severity of complications from ultrasound-guided percutaneous renal transplant biopsy. Transpl Int, 2016, 29(2):167-172.
[14] Walker PD. The renal biopsy. Archives Pathology&Lab Med, 2009,133(2):181-188.
[15] Kholmovski EG, Morris AK, Chelu MG. Cardiac mri and fibrosis quantification. Card Electrophysiol Clin, 2019, 11(3):537-549.
[16] Ciep?ucha A, Trojnarska O, Kociemba A, et al. Clinical aspects of myocardial fibrosis in adults with ebstein's anomaly. Heart Vessels,2018, 33(9):1076-1085.
[17] Layne KA, Dargan PI, Archer JRH, et al. Gadolinium deposition and the potential for toxicological sequelae-a literature review of issues surrounding gadolinium-based contrast agents. Br J Clin Pharmacol,2018, 84(11):2522-2534.
[18] Grenier N, Merville P, Combe C. Radiologic imaging of the renal parenchyma structure and function. Nat Rev Nephrol, 2016, 12(6):348-359.
[19] Zhang J, Zhang LJ. Functional mri as a tool for evaluating interstitial fibrosis and prognosis in kidney disease. Kidney Dis(Basel,Switzerland), 2020, 6(1):7-12.
[20] Jiang K, Ferguson CM, Ebrahimi B, et al. Noninvasive assessment of renal fibrosis with magnetization transfer mr imaging:Validation and evaluation in murine renal artery stenosis. Radiology, 2017, 283(1):77-86.
[21] Ebrahimi B, Textor S, Lerman LO. Renal relevant radiology:Renal functional magnetic resonance imaging. Clin J Am Soc Nephrol, 2014,9(2):395-405.
[22] Feng Q, Ma Z, Wu J, et al. Dti for the assessment of disease stage in patients with glomerulonephritis-correlation with renal histology. Eur Radiol, 2015, 25(1):92-98.
[23] Wittsack HJ, Lanzman RS, Mathys C, et al. Statistical evaluation of diffusion-weighted imaging of the human kidney. Magn Reson Med,2010, 64(2):616-622.
[24] Liu Z, Xu Y, Zhang J, et al. Chronic kidney disease:Pathological and functional assessment with diffusion tensor imaging at 3t mr. Eur Radiol, 2015, 25(3):652-660.
[25] Caroli A, Schneider M, Friedli I, et al. Diffusion-weighted magnetic resonance imaging to assess diffuse renal pathology:A systematic review and statement paper. Nephrology Dialysis Transplantation, 2018,33(Suppl 2):29-40.
[26] Ding J, Chen J, Jiang Z, et al. Assessment of renal dysfunction with diffusion-weighted imaging:Comparing intra-voxel incoherent motion(ivim)with a mono-exponential model. Acta Radiologica, 2016, 57(4):507-512.
[27] Emre T, Kili?kesmez?, Büker A, et al. Renal function and diffusionweighted imaging:A new method to diagnose kidney failure before losing half function. La Radiologia Medica, 2016, 121(3):163-172.
[28] Togao O, Doi S, Kuroo M, et al. Assessment of renal fibrosis with diffusion-weighted mr imaging:Study with murine model of unilateral ureteral obstruction. Radiology, 2010, 255(3):772-780.
[29] Mao W, Zhou J, Zeng M, et al. Intravoxel incoherent motion diffusionweighted imaging for the assessment of renal fibrosis of chronic kidney disease:A preliminary study. Magn Reson Imaging, 2018, 47:118-124.
[30] Feng YZ, Chen XQ, Yu J, et al. Intravoxel incoherent motion(ivim)at 3.0T:Evaluation of early renal function changes in type 2 diabetic patients.Abdominal Radiol(New York), 2018, 43(10):2764-2773.
[31] Deng Y, Yang B, Peng Y, et al. Use of intravoxel incoherent motion diffusion-weighted imaging to detect early changes in diabetic kidneys.Abdominal Radiol(New York), 2018, 43(10):2728-2733.
[32] Mao W, Zhou J, Zeng M, et al. Chronic kidney disease:Pathological and functional evaluation with intravoxel incoherent motion diffusionweighted imaging. J Magn Reson Imaging, 2018, 47(5):1251-1259.
[33] Sabour S, Batari H. Conventional MRI combined with dti for neonatal hyperbilirubinemia; methodological issues on diagnostic value. Pediatr Neonatol, 2018, 59(6):638-639.
[34] Trip AK, Jensen MB, Kallehauge JF, et al. Individualizing the radiotherapy target volume for glioblastoma using DTI-MRI:A phase 0study on coverage of recurrences. Acta Oncol, 2019, 58(10):1532-1535.
[35] Feng YZ, Ye YJ, Cheng ZY, et al. Non-invasive assessment of early stage diabetic nephropathy by dti and bold MRI. British J Radiol, 2020,93(1105):20190562.
[36] Ogawa S, Lee TM, Kay AR, et al. Brain magnetic resonance imaging with contrast dependent on blood oxygenation. Proceed National Acad Sci, 1990, 87(24):9868-9872.
[37] Eckardt KU, Bernhardt WW, Weidemann A, et al. Role of hypoxia in the pathogenesis of renal disease. Blood Purification, 2003, 21(3):253-257.
[38] Prasad PV, Edelman RR, Epstein FH. Noninvasive evaluation of intrarenal oxygenation with bold MRI. Circulation, 1996, 94(12):3271-3275.
[39] Yin WJ, Liu F, Li XM, et al. Noninvasive evaluation of renal oxygenation in diabetic nephropathy by bold-MRI. Eur J Radiol, 2012,81(7):1426-1431.
[40] Feng YZ, Ye YJ, Cheng ZY, et al. Non-invasive assessment of early stage diabetic nephropathy by DTI and bold MRI. Br J Radiol, 2020,93(1105):20190562.
[41] Artz NS, Wentland AL, Sadowski EA, et al. Comparing kidney perfusion using noncontrast arterial spin labeling mri and microsphere methods in an interventional swine model. Investigative Radiol, 2011, 46(2):124-131.
[42] Ritt M, Janka R, Schneider MP, et al. Measurement of kidney perfusion by magnetic resonance imaging:Comparison of MRI with arterial spin labeling to para-aminohippuric acid plasma clearance in male subjects with metabolic syndrome. Nephrol Dial Transplant, 2010, 25(4):1126-1133.
[43] Sun Q, Baues M, Klinkhammer BM, et al. Elastin imaging enables noninvasive staging and treatment monitoring of kidney fibrosis. Sci Transl Med, 2019, 11(486):4865.
[44] Heusch P, Wittsack HJ, Blondin D, et al. Functional evaluation of transplanted kidneys using arterial spin labeling mri. J Magnetic Reson Imaging, 2014, 40(1):84-89.
[45] Artz NS, Sadowski EA, Wentland AL, et al. Arterial spin labeling MRI for assessment of perfusion in native and transplanted kidneys. Magn Reson Imaging, 2011, 29(1):74-82.
[46] Brown RS, Sun MRM, Stillman IE, et al. The utility of magnetic resonance imaging for noninvasive evaluation of diabetic nephropathy.Nephrology Dialysis Transplantation, 2019, 23:66.
[47] Nery F, De Vita E, Clark CA, et al. Robust kidney perfusion mapping in pediatric chronic kidney disease using single-shot 3D-grase asl with optimized retrospective motion correction. Magn Reson Med, 2019,81(5):2972-2984.
[48] Georges PC, Hui JJ, Gombos Z, et al. Increased stiffness of the rat liver precedes matrix deposition:Implications for fibrosis. Am J Physiol,2007, 293(6):G1147-G1154.
[49] Yin M, Chen J, Glaser KJ, et al. Abdominal magnetic resonance elastography. Topics in Magn Reson Imaging, 2009, 20(2):79-87.
[50] Rouvière O, Souchon R, Pagnoux G, et al. Magnetic resonance elastography of the kidneys:Feasibility and reproducibility in young healthy adults. J Magn Reson Imaging, 2011, 34(4):880-886.
[51] Tan CH, Venkatesh SK. Magnetic resonance elastography and other magnetic resonance imaging techniques in chronic liver disease:Current status and future directions. Gut and liver, 2016, 10(5):672-686.
關(guān)鍵詞： 資金成本；目標(biāo)成本法；改進(jìn)
Key words： capital cost；target costing；improvement
中圖分類號：F275.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-4311（2013）11-0165-02
――――――――――――
作者簡介：許培（1993-），女，江蘇如皋人，在讀本科，江蘇科技大學(xué)經(jīng)濟(jì)管理學(xué)院會(huì)計(jì)系，主要研究方向?yàn)樨?cái)務(wù)成本管理。
0 引言
日本會(huì)計(jì)學(xué)會(huì)第53屆年會(huì)由“目標(biāo)成本法特別委員會(huì)”發(fā)表了題為《目標(biāo)成本法研究的課題》的報(bào)告草案。該報(bào)告將目標(biāo)成本法活動(dòng)視為綜合性利潤管理的一環(huán)，認(rèn)為是企業(yè)確立中長期競爭優(yōu)勢的、與產(chǎn)品開發(fā)相關(guān)聯(lián)的戰(zhàn)略性管理方法。理論界、實(shí)務(wù)界倡導(dǎo)的“目標(biāo)成本法”，認(rèn)為它具有強(qiáng)烈的管理工程學(xué)屬性，其獨(dú)特之處在于會(huì)計(jì)方法與工程技術(shù)的有機(jī)結(jié)合，可視為會(huì)計(jì)、工程與組織這三重力量的匯集。該報(bào)告作出的定義：“目標(biāo)成本法是指，在產(chǎn)品的策劃、開發(fā)中，根據(jù)用戶需求設(shè)定相應(yīng)的目標(biāo)，希冀同時(shí)達(dá)成這些目標(biāo)的綜合性利潤管理活動(dòng)”。
這個(gè)定義有三點(diǎn)值得注意：①其目標(biāo)是針對“用戶滿意”（Customer Satisfaction，簡稱CS）；②其手段是綜合性的，即工程方法、組織措施和會(huì)計(jì)計(jì)量融會(huì)一體貫徹實(shí)施的；③它以成本管理的形式達(dá)成終極的利潤管理的目的。顯然，這三方面對傳統(tǒng)成本管理學(xué)科有了不同程度的突破。鑒于“目標(biāo)成本法”服務(wù)于改善成本信息這一目標(biāo)，在工學(xué)數(shù)據(jù)匯總的基礎(chǔ)上必須針對各費(fèi)用項(xiàng)目進(jìn)行成本估算，并采用了具有管理會(huì)計(jì)屬性的成本控制方法（如將目標(biāo)成本與估算成本對比的方法），也結(jié)合了并不隸屬于傳統(tǒng)管理會(huì)計(jì)的價(jià)值工程（Value Engineering）、設(shè)計(jì)評價(jià)（Design Review）等方法，這種結(jié)合可以視為成本管理學(xué)科的發(fā)展完善。
目標(biāo)成本既是成本控制的目標(biāo)，保證企業(yè)足夠好地完成生產(chǎn)、實(shí)現(xiàn)利潤。同時(shí)它還是針對某一產(chǎn)品是否投入生產(chǎn)進(jìn)行決策的重要依據(jù)。本文認(rèn)為現(xiàn)有理論與實(shí)務(wù)在闡述目標(biāo)成本法時(shí)都沒有考慮資金成本這一因素，而這一因素可能影響產(chǎn)品的生產(chǎn)決策，即拒絕還是接受生產(chǎn)某產(chǎn)品。
1 目標(biāo)成本法實(shí)施方法概述
目標(biāo)成本法的實(shí)施方法表現(xiàn)為針對目標(biāo)成本進(jìn)行策劃并將其延伸至設(shè)計(jì)、制造階段。其實(shí)施流程粗略地可歸納為下面主要幾個(gè)階段：①產(chǎn)品策劃；②目標(biāo)成本設(shè)定；③目標(biāo)成本的功能別分解；④目標(biāo)成本的部件別分解；⑤在設(shè)計(jì)圖紙上實(shí)施成本降低；⑥轉(zhuǎn)向?qū)嵤┥a(chǎn)的準(zhǔn)備。
同時(shí)目標(biāo)成本法還是一個(gè)成本管理系統(tǒng)，這個(gè)系統(tǒng)把市場需求融入到了產(chǎn)品的開發(fā)條件之中。企業(yè)以客戶愿意為產(chǎn)品支付的價(jià)款作為起點(diǎn)，用它扣除必要利潤來確定產(chǎn)品的目標(biāo)成本，即允許成本。目標(biāo)成本法之后的所有工作都集中在實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)成本上。目標(biāo)成本的基本規(guī)則是，只有那些生產(chǎn)成本小于或等于允許成本的產(chǎn)品允許被制造（Cooper和Slagmulder，1997年）。
2 傳統(tǒng)目標(biāo)成本計(jì)算的基本模型
目標(biāo)成本以市場調(diào)研為起點(diǎn)，以確定顧客期望的產(chǎn)品功能、質(zhì)量和價(jià)格。企業(yè)根據(jù)市場的價(jià)格減去該公司生產(chǎn)產(chǎn)品的必要利潤所得到的結(jié)果安排生產(chǎn)。產(chǎn)品的市場價(jià)格和預(yù)期盈利之間的差異表示產(chǎn)品的允許成本或目標(biāo)成本。一家公司制造的產(chǎn)品所必要利潤，通常是根據(jù)銷售回報(bào)率或利潤率標(biāo)準(zhǔn)（Cooper and Slagmulder， 1997； Sakurai，1989）來測量的。產(chǎn)品的目標(biāo)成本確定后，企業(yè)就會(huì)委托一個(gè)專門的部門在其允許的成本約束條件下設(shè)計(jì)和開發(fā)產(chǎn)品，以滿足客戶的要求。
假設(shè)在整個(gè)生命周期內(nèi)，產(chǎn)品的價(jià)格P、單位生產(chǎn)成本C，年銷售額Q和所得稅率t不變，傳統(tǒng)的目標(biāo)成本法基本模型可以這樣來表示：NI=PQ（1-t）-CQ（1-t） （1）
滿足約束條件：NI/（1-t）≥αPQ （1-A）
NI是稅后凈收入，變量α是該公司的必要利潤率，為成本對象的凈利潤除以銷售額（Ingram和Albright，2007年）。
式（1）中的收益是根據(jù)稅后標(biāo)準(zhǔn)測算的，以此來與包含資本成本的目標(biāo)成本法模型的后續(xù)分析進(jìn)行比較。上式（1）右邊的第一項(xiàng)和第二項(xiàng)分別測算產(chǎn)品的預(yù)期稅后收入和生產(chǎn)費(fèi)用。式（1-A）為其約束條件，表示的是企業(yè)保證產(chǎn)品生產(chǎn)所必須滿足的條件。
目標(biāo)成本表示式子（1）中C的最大值。當(dāng)滿足式（1-A）這個(gè)約束條件時(shí)，產(chǎn)品就能生產(chǎn)。因此，用式（1）的右側(cè)相應(yīng)代替式（1-A）的左側(cè)那么就會(huì)得到C的最大值：
C=P（1-α） （2）
式（2）中，C表示產(chǎn)品的允許成本。實(shí)際上，C值是式（2）中產(chǎn)品的設(shè)計(jì)和生產(chǎn)團(tuán)隊(duì)要努力實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)。一旦設(shè)計(jì)和生產(chǎn)團(tuán)隊(duì)可以盡可能降低產(chǎn)品成本，同時(shí)又不影響客戶產(chǎn)品功能和質(zhì)量的要求，那么就拿產(chǎn)品的估計(jì)成本與C相比。因此，由式（2）得來的C就是接受還是排除產(chǎn)品生產(chǎn)決策的基礎(chǔ)。
3 基于資金成本的目標(biāo)成本計(jì)算模型
變量i是一個(gè)期間指標(biāo)，i=1，2，…N，N是一個(gè)產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)周期，Pi是期間i內(nèi)產(chǎn)品的單位價(jià)格，Ci是期間i內(nèi)單位生產(chǎn)成本，Ii期間i內(nèi)長期資產(chǎn)的賬面價(jià)值，Qi是在期間i內(nèi)生產(chǎn)和銷售產(chǎn)品的數(shù)量，ri是期間i內(nèi)的資本成本，ti是在期間i內(nèi)的所得稅率，α是該公司未來產(chǎn)品預(yù)期的必要利潤率，PVN，r是資本成本率為r的N年期年金現(xiàn)值，NPV是凈現(xiàn)值。
Hartman（2000年）和Shrieves、Wachowicz（2001）指出，產(chǎn)品的EVA貼現(xiàn)在數(shù)學(xué)上相當(dāng)于其凈現(xiàn)值。因此，產(chǎn)品生命周期內(nèi)的經(jīng)濟(jì)收益，或凈現(xiàn)值，可表示為：
NPV=■■-■■（3）
式（3）中的第一項(xiàng)表示一個(gè)產(chǎn)品的稅后收入，第二項(xiàng)表示為取得營運(yùn)收入而付出的資本成本。長期資產(chǎn)的初始投入，也就是I，乘以（N+1-i）/N表示每個(gè)期間長期資產(chǎn)提取折舊費(fèi)用以后的資金占用。和前面一樣，假設(shè)產(chǎn)品的單位價(jià)格、單位生產(chǎn)成本、每年的產(chǎn)品銷售額、實(shí)際所得稅率以及資本成本，在產(chǎn)品的生命周期里都是不變的，那么式子（3）則可以簡化為：
NPV=■-I[1-■]（4）
滿足約束條件：NPV？叟0（4-A）
上式（4）右邊的第一項(xiàng)是產(chǎn)品經(jīng)營收入的稅后現(xiàn)值，而第二項(xiàng)是投入資金在生命周期內(nèi)資金成本的現(xiàn)值。式子（4-A）表示生產(chǎn)產(chǎn)品必須滿足的約束條件，即產(chǎn)品必須獲得等于或超過其資本成本的回報(bào)。實(shí)際上，和式子（1）、（1-A）一樣，式子（4）和（4-A）可用于實(shí)施目標(biāo)成本法。兩個(gè)模型之間唯一的區(qū)別在于，基于式（4）和（4-A）的目標(biāo)成本法，包含了資金成本的現(xiàn)值，即每期期初的EVA貼現(xiàn)。
更換每個(gè)期間的式（4），即相當(dāng)于得出資本成本率為r的N期年金現(xiàn)值，即PVN，r。則式（4）可被改寫為：
NPV=（P-C）Q（1-t）PVN，r-I（1-PVN，r/N）（5）
滿足約束條件：NPV？叟0（5-A）
把式（5）的右邊的項(xiàng)代入式（5-A）的左邊，求得C的最大值：C=■（6）
式（6）中，C等于產(chǎn)品的目標(biāo)成本。當(dāng)一個(gè)產(chǎn)品的價(jià)格、年銷售收入、稅率以及資本成本隨產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)周期變化時(shí)，式（3）可以用來確定產(chǎn)品的目標(biāo)成本。
4 討論
在傳統(tǒng)的目標(biāo)成本法模型下，產(chǎn)品的利潤率可能被夸大了，從而更有可能接受產(chǎn)品投產(chǎn)的決定。然而，當(dāng)投入資金的機(jī)會(huì)成本納入到產(chǎn)品的成本時(shí)，產(chǎn)品的回報(bào)率可能會(huì)低于公司的資本成本率。因此，傳統(tǒng)的目標(biāo)成本法模型可能導(dǎo)致管理層作出為公司生產(chǎn)無價(jià)值產(chǎn)品而不是有價(jià)值產(chǎn)品的決策。
目標(biāo)成本法的一個(gè)缺陷是它在評估產(chǎn)品生產(chǎn)決策時(shí)沒有考慮到資本成本。EVA貼現(xiàn)模型代表了包含資本成本的目標(biāo)成本法模型。傳統(tǒng)的目標(biāo)成本法模型會(huì)接受負(fù)凈現(xiàn)值的產(chǎn)品，同時(shí)會(huì)排除正凈現(xiàn)值的產(chǎn)品。我們在做決策時(shí)，應(yīng)比較公式（2）和公式（6）得出的成本數(shù)額，取兩者小的作為目標(biāo)成本，然后進(jìn)行成本分解、擠壓。這樣才能制定出充分可靠的生產(chǎn)決策。
參考文獻(xiàn)：
下面我們通過具體實(shí)例來分析考生在解答語言表達(dá)題時(shí)常易犯的錯(cuò)誤。
一、審題不到位
例1.請以“夢想與現(xiàn)實(shí)”為內(nèi)容，仿照下面的示例寫兩個(gè)句子。要求每個(gè)句子都采用比擬的修辭方法，兩個(gè)句子之間構(gòu)成對偶。
太陽熱烈、奔放，帶著萬丈光芒，給生靈以活力；
月亮溫馨、寬容，帶著無際清輝，給萬物以安寧。
[解析]
答本題，有幾個(gè)注意點(diǎn)：（1）明確所寫內(nèi)容；（2）每個(gè)句子都用比擬修辭；（3）句子之間構(gòu)成對偶形式。但有些考生誤答成“大海與森林”“山峰與河流”“教師與父母”“山與水”“辣椒與薄荷”等等，沒有“以‘夢想與現(xiàn)實(shí)’為內(nèi)容”。這樣的回答，只能得0分。
原試卷未提供答案，筆者試擬：夢想輕盈、綺麗，猶如一顆流星，劃亮整個(gè)夜空；現(xiàn)實(shí)沉穩(wěn)、樸實(shí)，猶如步步臺(tái)階，踏遍人生旅程。
例2.一位學(xué)者指出，“”是一個(gè)早已普遍使用的漢字，它形簡而意賅，直觀而獨(dú)特，但許多重要的漢語辭書卻沒有收錄。請用一個(gè)生動(dòng)形象的句子表達(dá)讓“”字盡快收錄到漢語辭書中這樣的意思。
要求：（1）切合原意；（2）運(yùn)用比喻或比擬的修辭方法。
[解析]
此題考查按照具體要求正確運(yùn)用常見的修辭方法的能力。值得注意的是，試題不是要考生講道理、作議論，自行寫出一個(gè)將“”收進(jìn)辭書的“理由”，而是要求表達(dá)“讓‘’字盡快收錄到漢語辭書中”這樣一個(gè)意思――許多考生卻都誤讀了題意。
答案示例：（1）不要讓“”字到處漂泊，讓它有“籍”可入，有“家”可歸。（2）“”字睜著圓圓的大眼睛，期盼著回到母親的懷抱。（3）“”字睜著圓圓的大眼睛，盼望回到自己的家園。（4）無家可歸的“”字，盼望和自己的兄弟姐妹們一起生活。
例3.請用“月光如水水如天”為統(tǒng)率句，寫一段情景交融的文字。要求想象合理，語言連貫，不少于80字。
[解析]
回答本題，除注意“想象合理，語言連貫，不少于80字”外，還有兩個(gè)隱性要求須遵守：（1）“用‘月光如水水如天’為統(tǒng)率句”，意味著“月光如水水如天”應(yīng)置于語段開頭；（2）既然是“月光如水水如天”，內(nèi)容上就要先寫“月光如水”，再寫“水如天”，既不能有所遺漏，又得講究順序。
答案示例：“月光如水水如天?！狈叛弁?，但見清冷如水的月光，傾瀉在波光粼粼的江面上，月光就像熠熠閃動(dòng)的江水，江水又仿佛和幽深的藍(lán)天連成一片，整個(gè)世界好像都融化在無邊的迷茫、恬靜的月色水光之中。一個(gè)多么清涼、寂靜的夜晚啊！詩人不禁觸景生情，感到寂寞悵惘。
二、內(nèi)容不合理、格調(diào)欠高雅或色彩不協(xié)調(diào)
例4.請參照下面材料中畫線的部分，另選我國兩個(gè)傳統(tǒng)節(jié)日（如春節(jié)、清明節(jié)、端午節(jié)、重陽節(jié)等），仿寫句子。要求字?jǐn)?shù)相同，句式相似。
黃土黃，那是江北世世代代淳樸的厚實(shí)；清水清，那是江南祖祖輩輩悠然的淡雅，蕩漾著千年的風(fēng)物與風(fēng)華。唯在中秋，江南江北，共賞一輪明月；或在元宵，將一鍋鍋湯圓，煮成千年不變的甜甜蜜蜜與團(tuán)團(tuán)圓圓。
[解析]
有考生的答案是：“唯在端午，江南江北，同敬一位詩人；或在清明，將一張張白紙，折成百年依舊的悲悲戚戚與凄凄慘慘?！比绱嘶卮?，感彩與原句喜慶的基調(diào)不符，得分自然就不會(huì)高。
【答題指津】
一、壓縮語段
（1）根據(jù)閱讀材料的性質(zhì)，明確其側(cè)重點(diǎn)。記敘性材料中，時(shí)間、地點(diǎn)、人物、事件等是重要信息；議論性材料，關(guān)鍵是找到論點(diǎn)句；說明性材料中，對象、范圍、特征是主體內(nèi)容；新聞材料，要抓住“導(dǎo)語”不放松。（2）分析閱讀材料的結(jié)構(gòu)，弄清其內(nèi)在關(guān)系。（3）對文段殊的句子（如中心句、首尾句、過渡句、設(shè)問句）和詞語（如“首先”“其次”等）要高度重視。（4）扣住題目要求，盡量用主謂句（尤其是主動(dòng)句）表達(dá)；盡可能選用材料中負(fù)載主要信息的原詞；嚴(yán)格控制字?jǐn)?shù)，使用單音節(jié)詞、簡稱、代詞等。（5）最后來個(gè)“回頭望”，檢查所概括的信息要點(diǎn)全不全、語句連貫不連貫等。
二、仿用句式
（1）弄清題目要求。有時(shí)題目規(guī)定陳述對象，這時(shí)須以給定的對象為主語。（2）弄清原句中心，理解原句的隱含意義，在讀懂文意的基礎(chǔ)上把握主旨，循旨聯(lián)想，遵旨選材，按旨索句。（3）注意句子結(jié)構(gòu)形式的高度一致。（4）分析所給例句所用的修辭格。（5）仿寫的句子同例句相比，色彩要和諧（如詞語的褒貶雅俗，感情的憂傷、喜悅、沉重、明快等）。此外，仿句立意境界要高，最好有一定的意趣。（6）對聯(lián)是一種更為嚴(yán)格的仿寫。對聯(lián)的基本要求：上下聯(lián)字?jǐn)?shù)相等，詞性相同；內(nèi)容關(guān)聯(lián)而不重復(fù)；仄起平落（上聯(lián)末字是仄聲，下聯(lián)末字是平聲）。
三、變換句式
（1）審清要求，明確答題的方向。（2）分析原句特點(diǎn)，包括原句的句式特點(diǎn)、各分句間的關(guān)系等。（3）根據(jù)題目要求改變句式，同時(shí)須相應(yīng)地改變原句中的詞語甚至句子結(jié)構(gòu)。比如主動(dòng)句與被動(dòng)句的變換，要將主動(dòng)者與被動(dòng)者的位置互換，表主動(dòng)和被動(dòng)關(guān)系的介詞“把”“被”等也要改換；再如長句變短句，最基本的就是使長句的附加成分“消腫”，方法有三：一是把長句的附加成分獨(dú)立出來，單獨(dú)成句；二是利用復(fù)指的辦法，使句子主干突出；三是重新組句。變換時(shí)可添加必要的句子成分或關(guān)聯(lián)詞語，有時(shí)還要重復(fù)某些詞語或添加代詞。
四、語言簡明
（1）掌握消除歧義的方法：一是更換詞語，把容易產(chǎn)生歧義的詞語換成意義單一的詞語；二是增設(shè)語境，給歧義句增設(shè)上下文；三是調(diào)語序，把句內(nèi)有關(guān)詞語的位置改動(dòng)一下；四是改動(dòng)標(biāo)點(diǎn)；五是重新造句。（2）掌握避免冗余的方法：一是找主干，理枝葉，發(fā)現(xiàn)并消除贅余的詞語；二是分析句間關(guān)系，發(fā)現(xiàn)和刪除重復(fù)的語句；三是把握語段主旨，發(fā)現(xiàn)和刪除游離于中心之外的內(nèi)容；四是恰當(dāng)?shù)剡\(yùn)用省略和指代；五是恰當(dāng)?shù)貙δ承﹥?nèi)容進(jìn)行概括與合并。
五、語言得體
語言得體涉及以下幾點(diǎn)。（1）要考慮一些特殊用語的含義和用法，如謙稱和敬稱、自稱和他稱、褒義和貶義、口語與書面語等。以敬稱來說，常見的有：看望別人說“拜訪”，陪伴朋友說“奉陪”，中途退席說“失陪”，求人幫忙說“勞駕”，請人指點(diǎn)說“賜教”，贊人見解說“高見”，等等。（2）要考慮說話人（或聽話人）的身份地位、職業(yè)經(jīng)歷、性格修養(yǎng)、表達(dá)目的以及心理因素與文化修養(yǎng)等。（3）要根據(jù)外部環(huán)境――場合、時(shí)間、氣氛等考慮詞句的選用。
六、擬寫公益廣告
【中圖分類號】Q94-34 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1009-9646(2008)08-0191-02
植物標(biāo)本是與植物相關(guān)的教學(xué)中不可缺少的直觀教具,它能幫助學(xué)生了解植物形態(tài)特征,增強(qiáng)記憶,并可克服課時(shí)進(jìn)度與季節(jié)脫節(jié)而導(dǎo)致選材的困難,便于學(xué)生觀察和學(xué)習(xí),增加教學(xué)效果。另外,植物標(biāo)本也是科研工作的重要資源,還是保護(hù)植物種質(zhì)、鑒定植物種屬的重要依據(jù)。
1 植物標(biāo)本的干態(tài)保色保存
1.1 常規(guī)保色保存
常規(guī)保存的標(biāo)本也叫臘葉標(biāo)本。蠟葉標(biāo)本的傳統(tǒng)制作方法是將采集來的植物標(biāo)本經(jīng)整理后,平放在標(biāo)本夾的吸水紙上,壓制吸水幾天而成。臘葉標(biāo)本在制作過程中應(yīng)根據(jù)植物的不同特點(diǎn),進(jìn)行特殊處理,使其達(dá)到最佳效果[1]。王艷秋等對肉質(zhì)、易掉葉植物和易變黑植物標(biāo)本的壓制方法進(jìn)行了研究,結(jié)果表明通過把植物材料均勻放在吸水紙上,每天翻一次標(biāo)本和每天翻二次標(biāo)本進(jìn)行觀察研究,發(fā)現(xiàn)含水量較低的植物,經(jīng)8天8次的處理,成品率較高;但對含水量較高、花瓣較大的肉質(zhì)植物則需要經(jīng)8天16次的處理,其成品率常低于前者[2]。因而在處理標(biāo)本時(shí),既要考慮到植物材料的差異,又要考慮到處理時(shí)所采用的方法、時(shí)間的長短及環(huán)境因素等,不同類型采用不同的處理,使標(biāo)本盡量保持它的本色,以達(dá)到最佳效果。
1.2 烘干保色保存
用烘箱干燥標(biāo)本,也有很好的效果,一般溫度在30℃～50℃[3],黃艷花等把夾好的標(biāo)木夾放入40～50℃的干燥箱中烘干,效果較好[4]?；蛘哂眉t外燈烘干壓制,也就是用瓦楞紙板、泡沫板把夾著標(biāo)本的草紙隔開,用標(biāo)本夾捆住,放于烘烤架上(金屬材料),紅外燈放于烘烤架下進(jìn)行烘烤,溫度為40℃左右[5]。用紅外燈烘干壓制不但保持標(biāo)本的原有色彩,而且還可殺死標(biāo)本上的一些蟲卵和病菌,值得推廣應(yīng)用。王蘭州等依據(jù)風(fēng)、熱能夠加速水分蒸發(fā)的原理,首次研制出了一種便于攜帶、又能省時(shí)省力地對新鮮植物標(biāo)本進(jìn)行快速、優(yōu)質(zhì)干燥的機(jī)電一體化設(shè)備,命名為“便捷式植物標(biāo)本干燥器”,這種設(shè)備使植物標(biāo)本壓制時(shí)能夠省時(shí)省力、優(yōu)質(zhì)而又便于攜帶[6]。
1.3 熱熨保色保存
就是將整形后的花、葉放在兩層吸水紙的中間 ,鋪于平板上,以預(yù)熱的熨斗或裝有熱水的搪瓷杯來回熨3～4次,標(biāo)本驟然失水,色素未破壞。倘標(biāo)本較厚實(shí),失水不足,可換吸水紙?jiān)凫?然后再把熨好的標(biāo)本整理、固定、上蠟,貼上標(biāo)簽[7]。對于在一般的干燥條件下花會(huì)褪色的植物也可用熱熨保色保存,把采集到的植物先放在標(biāo)本夾中1～2天,然后在紙的上面用熾熱的烙鐵熨燙,這樣干燥的花,顏色便能保存很好[3]。對于含水量較高易變色、霉變的植物標(biāo)本,舒孝喜采用電熨斗隔著吸水紙小心熨燙(注意溫度不易過高),使其快速脫水,來保持植物的原有鮮艷的色彩[8]。
1.4 硅膠干燥保存
將事先烘干的硅膠顆粒(1～1.5毫米)慢慢倒入盛放標(biāo)本的盒子或標(biāo)本瓶中使其充滿標(biāo)本的每個(gè)空隙,直到完全覆蓋為止,然后將標(biāo)本放入干燥箱中5～6天,硅膠作為干燥劑吸去標(biāo)本中的水,如有真空干燥器將標(biāo)本置于其中抽氣并保持低壓二天左右也可完成脫水過程[9]。陳尚義將采集的植物標(biāo)本放在夾有草紙干燥過的硅膠粉的標(biāo)本夾中捆緊,放入烘干箱(通電后高溫中)迅速烘干的方法也成功的進(jìn)行了標(biāo)本的保存[10]。
1.5 微波干燥保存
將按常規(guī)方法整理好的標(biāo)木夾放入微波爐內(nèi)的轉(zhuǎn)盤上,將微波爐門關(guān)閉,根據(jù)植物體含水量,來確定處理功率和時(shí)間[11]。劉淑琴將采集到的植物標(biāo)本在形態(tài)和顏色沒有改變之前置于微波爐中,通電幾秒鐘就完成了干燥過程[9]。
2 植物標(biāo)本的浸制保色保存
因干態(tài)保存的標(biāo)本未經(jīng)過原色的固定,所以保色的時(shí)間較短,保色的效果往往不是很好,科技工作者做了大量的實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)通過對采集的植物進(jìn)行化學(xué)處理,使原色固定,然后進(jìn)行浸制保存,可使制作的標(biāo)本色澤自然、形態(tài)逼真,能較長時(shí)間保持原色澤不變。
2.1 綠色植物標(biāo)本的浸制保色保存
植物體之所以呈綠色是因?yàn)橹参矬w的葉綠體中含有葉綠素,葉綠素是一種復(fù)雜的有機(jī)化合物,其分了結(jié)構(gòu)的中央有一個(gè)金屬鎂原了,葉綠素呈現(xiàn)綠色的原因就是由于含有鎂原了的核心結(jié)構(gòu)。葉綠素極容易分解破壞,且易溶解在酒精或福爾馬林等保存液中,所以浸在酒精或福爾馬林等保存液中的標(biāo)本以及干制的臘葉標(biāo)本如果不進(jìn)行保色處理,很容易褪色,當(dāng)葉綠素與酸發(fā)生反應(yīng)時(shí),鎂就分離出來,此時(shí)因葉綠素缺鎂,所以植物就變成褐色,這種沒有鎂的葉綠素一般稱為植物黑素。與此同時(shí)如果把另一種金屬銅原了放入黑素分子中,使葉綠素分了中的核心結(jié)構(gòu)恢復(fù)原來的有機(jī)金屬化合狀態(tài),植物體便獲得了象葉綠素樣的綠色物質(zhì),而重變綠。以銅原子為核心的葉綠素分子結(jié)構(gòu)很穩(wěn)定,不容易分解破壞,且不溶于酒精或福爾馬林中,所以經(jīng)過如此處理的植物標(biāo)本在保存液中可以保存綠色。
韓峻等將醋酸銅結(jié)晶加入50%冰醋酸溶液中,直加到溶液飽和為止,然后用4倍水稀釋,再加熱至80～85℃,把要做成標(biāo)本的植物放進(jìn)燒熱的溶液中,繼續(xù)加熱,直到植物由綠變褐,再由褐轉(zhuǎn)綠時(shí),把植物取出用清水洗凈,保存于5%福爾馬林中,進(jìn)行綠色標(biāo)本的保存[12,13]。宋良科等對藥用植物原色標(biāo)本的制作進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)將清洗且晾干的材料標(biāo)本用7%CuS04硫酸銅溶液固定2～4 d,取出洗凈,(根據(jù)標(biāo)本的老嫩程度確定,老的時(shí)間長些,嫩的短些),再用0.2%亞硫酸溶液保存于標(biāo)本瓶中,密閉瓶蓋的方法,無論從效果、操作和經(jīng)濟(jì)適用上均較好[14]。劉淑琴將硫酸銅[CuSO4?5H2O]制成飽和溶液按比例將100份飽和溶液跟67份甲醛,333份水混合得到處理液,然后將綠色標(biāo)本放入處理液中浸泡20天后取出,用清水洗凈后浸入4%甲醛溶液中長期密封保存,其保色效果也很好[9]。
對不適于熱煮或藥液不容易透入的植物,可以改用硫酸銅飽和水溶液700m1、福爾馬林50m1、水250m1的混合液,將植物放入這種液體中浸漬,浸漬時(shí)間的長短,要視植物老嫩程度和種類而定,當(dāng)植物褪成黃色而又重新變成綠色時(shí),即可取出,用清水將藥液洗凈,然后放到5%福爾馬林中保存,標(biāo)本就制成了[12]。對于葉薄而嫩的植物因其在高溫下易變軟,可將50%乙醇90ml、福爾馬林5ml、甘油2.5ml、冰醋酸2.5ml、氯化銅10g配成混合溶液,將標(biāo)本浸漬數(shù)日,即可保色[15,16]。
2.2 紅色植物標(biāo)本的浸制保色保存
某些器官呈現(xiàn)紅色是由其細(xì)胞里的花青素決定的,而花青素具有遇堿性溶液易變蘭、遇酸性溶液變紅的特性。因此,采用合理的酸性溶液來加以處理即可達(dá)到使植物保持紅色的目的。
寧小清實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)用硼酸45g,95%酒精200ml,40%福爾馬林200ml,加蒸餾水至1000ml,將植株置于其中浸制且保存,這種方法對澳洲合歡花、辣椒果、荔枝果的紅色保存效果較好[17]。韓 峻用硼酸粉450g、水2000~4000m1、75～95%酒精2000m1,福爾馬林原液300m1混合起來,取澄清液作為浸制液,直接用來保存標(biāo)本。如果保存粉紅色的標(biāo)本時(shí),須將福爾馬林減至微量或不加[12]。劉淑琴等研究發(fā)現(xiàn)將硼酸3克,40%的甲醛4毫升與水400毫升混合制成固定液,然后將洗干凈的紅色植物標(biāo)本放在固定液中浸泡1-3天,如不發(fā)生混濁現(xiàn)象即可取出放入由甲醛25毫升、甘油25毫升、水1000毫升制成的保存液或由10%亞硫酸20毫升、硼酸10克、水580毫升制成的保存液中長期密封保存,對較大的果實(shí)標(biāo)本最好用注射器注入少量保存液再長期密封保存效果會(huì)更好[9][18]。
2.3 黃色或黃綠色植物的浸制保色保存
黃色的花和果實(shí)主要是其中含有類胡蘿卜素和核黃素,類胡蘿卜素和核黃素又是由胡蘿卜素和葉黃素組成,胡蘿卜素為橙紅色而葉黃素為黃色。用化學(xué)方法保持其結(jié)構(gòu)從而保存其顏色。
取6%亞硫酸500毫升和80~90%酒精500毫升加入400毫升蒸餾水混合得保存液,將采集來的標(biāo)本直接浸入保存液密封保存效果較好[9]。寧小清用亞硫酸50ml,95%酒精50ml,加蒸餾水至1000ml,將植株置于其中浸制且保存,效果較理想[17]。韓 峻用亞硫酸飽和溶液568ml、95%酒精568ml、水4500 ml混合起來取澄清液對標(biāo)本進(jìn)行了保存[12]。
2.4 黑色、紅紫色、紫色標(biāo)本的浸制保色保存
對黑色、紅紫色、紫色標(biāo)本的浸制保色保存,一種方法是用福爾馬林450ml,95%酒精540ml、水18100ml混合起來,取澄清液來保存標(biāo)本。另一種方法是用福爾馬林500ml、飽和氯化鈉溶液1000ml、水8700ml混合液的澄清液,來保存標(biāo)本[12]。
3 植物標(biāo)本保存的新方法
因干態(tài)標(biāo)本在使用和保存過程中易氧化變色、易腐蝕、被蟲咬,標(biāo)本的莖、葉容易折斷,花果實(shí)等也易脫落,且使用不方便。而浸制的標(biāo)本由于保存液揮發(fā)后減少,需經(jīng)常添加保存液,保存液揮發(fā)的氣味也使室內(nèi)空氣有難聞的甲醛污染,影響工作人員的健康,也不利于參觀學(xué)習(xí)。隨著社會(huì)的發(fā)展和科技人員的研究,目前所使用的新的植物標(biāo)本保存方法有以下幾種:
3.1 塑化法
唐安科把原有的浸制和新鮮的植物標(biāo)本經(jīng)過加工處理,即先給綠色植物保色,再用水溶性塑料聚乙二醇(PEG)處理來替換植物內(nèi)的水,制成了高分子水溶性塑料處理的標(biāo)本,這種標(biāo)本不需加入甲醛、乙醇等防腐劑浸泡,就能防霉防蟲,有一定的實(shí)用價(jià)值[19]。
3.2 塑封法
把制成的干態(tài)標(biāo)本或化學(xué)保色后的浸制標(biāo)本制干后,用塑封膜塑封,這種方法保存的標(biāo)本保色期長、使用方便(可用實(shí)物投影儀在課堂上展示)克服了用掛圖的死板,同時(shí)彌補(bǔ)了新鮮標(biāo)本容易損壞及課時(shí)進(jìn)度與季節(jié)脫節(jié)而導(dǎo)致選材困難等不足,用塑封法還可制作葉形、葉脈及其剪貼標(biāo)本等,不僅容易保存而且使用方便、效果明顯,且具有一定的藝術(shù)性和觀賞價(jià)值[11][12][20]。
3.3 電子標(biāo)本保存法
隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和數(shù)碼相機(jī)的普及,電子標(biāo)本越來越引起重視,它克服了傳統(tǒng)標(biāo)本的局限性,比如傳統(tǒng)標(biāo)本在植物標(biāo)本的采集、制作時(shí)成本高,需要時(shí)間長,許多植物種類的標(biāo)本很難采到,標(biāo)本使用過程中破損和廢棄嚴(yán)重,保存需要很大的標(biāo)本室空間和專門人員的管理等等,而植物電子標(biāo)本具有圖片清晰、易拷貝、不占室內(nèi)空間、易管理等優(yōu)點(diǎn),它的電子圖片也可用于多媒體教學(xué),為傳統(tǒng)課程實(shí)現(xiàn)電子化和網(wǎng)絡(luò)化教學(xué)奠定了基礎(chǔ)[21]。
4 標(biāo)本制作中有待注意的問題
雖然絕大多數(shù)植物按物理和化學(xué)方法都能解決好保色問題,但也有一些植物保色效果不理想,如桂花樹、松科的植物等基本上還沒有找到理想保色方法;葉中含有膠汁的一類植物如橡膠樹、印度榕、桕等,保色后,葉子顏色容易發(fā)黑;而女貞、黃檀等植物在保色過程中不僅顏色不綠,而且葉子容易脫落;還有馬齒莧保色后,標(biāo)本呈現(xiàn)紫紅色等問題均有待進(jìn)一步研究[16]。另外,電子標(biāo)本不能完全代替?zhèn)鹘y(tǒng)的蠟葉標(biāo)本和液浸標(biāo)本,因?yàn)樵谠S多方面,實(shí)體標(biāo)本仍具有其獨(dú)特的作用,比如植物新的形態(tài)變異或新種類、新類型的比較鑒定,從標(biāo)本中提取樣品,不同產(chǎn)地標(biāo)本形態(tài)的變化,生物多樣性研究等方面,傳統(tǒng)標(biāo)本的優(yōu)勢是電子標(biāo)本所不能替代的[21]。
參考文獻(xiàn)
[1] 李文祥.干花制做方法的探討[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1995.(3):207-212.
[2] 王艷秋,王春,劉明等.關(guān)于植物標(biāo)本保色的研究[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)1997,19(增刊):45-47.
[3] 閆潔,崔學(xué)明.淺談植物標(biāo)本的采集與壓制[J].內(nèi)蒙古林業(yè)科技,1998年第3期,40-42.
[4] 黃艷花,覃連紅,梁萍等.植物病害標(biāo)本固綠保綠技術(shù)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(29):9138-9139.
[5] 林祁.新型的植物標(biāo)本烘干壓制法[J].植物雜志,1997,3.
[6] 王蘭州,令利軍,王一峰.一種快速、優(yōu)質(zhì)壓制植物標(biāo)本的新設(shè)備及使用方法[J].草業(yè)科學(xué),2000年(第17卷)第1期:86-88.
[7] 姚遠(yuǎn),姜姝姝.論植物標(biāo)本的采集和制作[J].成才之路,2007年27期:54.
[8] 舒孝喜.植物蠟葉標(biāo)本制法的改進(jìn)與應(yīng)用[J].農(nóng)業(yè)科技與信息,2004年01期:9-10.
[9] 劉淑琴.原形原色生物標(biāo)本的制作及保存方法[J].教學(xué)儀器與實(shí)驗(yàn),2000年第10期,22-23.
[10] 陳尚義.植物標(biāo)本保色新方法[J].教學(xué)儀器與實(shí)驗(yàn),2000年第1期,16.
[11] 張美萍.植物塑封標(biāo)本的制作[J].生物學(xué)雜志,1999年(第16卷)第5期,31.
[12] 韓峻,李玉卿,武煜明等.幾種常用植物教學(xué)標(biāo)本的制作方法[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),第2006年(第29卷)第2期:31-34.
[13] 蘇紹科.植物原色復(fù)膜標(biāo)本的制作[J]. 實(shí)驗(yàn)教學(xué)與儀器,2006年01期:22.
[14] 宋良科,易志剛,蔣合眾.藥用植物原色標(biāo)本的制作研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2005年(第19卷)第4期:47-48.
[15] 劉曉霞,張金環(huán).植物標(biāo)本的采集、制作與保存[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2008年01期:223-224.
[16] 黃肇宇,蔣波,覃雪梅.植物標(biāo)本原色澤的保色技術(shù)研究[J].玉林師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)),2006年(第27卷)第3期:126-128.
[17] 寧小清,郭建華.植物綠色固定保色AB液的實(shí)驗(yàn)研究[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)2005年(第8卷)第1期:3-5.
[18] 段顯德.植物標(biāo)本保色術(shù)[J].丹東師專學(xué)報(bào),1994年03期:64-66.
關(guān)鍵詞：巢蛋白陽性細(xì)胞 胰腺 表達(dá)
關(guān)鍵詞：巢蛋白陽性細(xì)胞 胰腺 表達(dá)
早在1985年Hockfield 和Mckay首先發(fā)現(xiàn)巢蛋白在胚胎大鼠脊髓神經(jīng)管神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)，將其稱為神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白。以后發(fā)現(xiàn)巢蛋白存在于胚胎期的膠質(zhì)細(xì)胞、成年的神經(jīng)前體細(xì)胞等細(xì)胞中。Hunziker等[1]發(fā)現(xiàn)在胰腺內(nèi)有巢蛋白陽性細(xì)胞（nestin+）。Lumelsky等[2]認(rèn)為巢蛋白可以作為多潛能的胰腺干細(xì)胞的標(biāo)志。體外分離克隆胰腺干細(xì)胞作為種子細(xì)胞，并定向誘導(dǎo)其分化為功能性胰島移植治療糖尿病，是解決胰島供體短缺的有效途徑。因此檢測胰腺中的nestin+并對其進(jìn)行分離、體外增殖、誘導(dǎo)分化及克隆成為人們研究的熱點(diǎn)之一。本文綜述巢蛋白在胰腺中的表達(dá)及相關(guān)研究進(jìn)展。
早在1985年Hockfield 和Mckay首先發(fā)現(xiàn)巢蛋白在胚胎大鼠脊髓神經(jīng)管神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)，將其稱為神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白。以后發(fā)現(xiàn)巢蛋白存在于胚胎期的膠質(zhì)細(xì)胞、成年的神經(jīng)前體細(xì)胞等細(xì)胞中。Hunziker等[1]發(fā)現(xiàn)在胰腺內(nèi)有巢蛋白陽性細(xì)胞（nestin+）。Lumelsky等[2]認(rèn)為巢蛋白可以作為多潛能的胰腺干細(xì)胞的標(biāo)志。體外分離克隆胰腺干細(xì)胞作為種子細(xì)胞，并定向誘導(dǎo)其分化為功能性胰島移植治療糖尿病，是解決胰島供體短缺的有效途徑。因此檢測胰腺中的nestin+并對其進(jìn)行分離、體外增殖、誘導(dǎo)分化及克隆成為人們研究的熱點(diǎn)之一。本文綜述巢蛋白在胰腺中的表達(dá)及相關(guān)研究進(jìn)展。
1.巢蛋白在胰腺中的分布及定性、定位
1.巢蛋白在胰腺中的分布及定性、定位
1.1 巢蛋白在大鼠胰腺中的分布及定性、定位
1.1 巢蛋白在大鼠胰腺中的分布及定性、定位
2000年Hunziker等[1]首先發(fā)現(xiàn)在胰腺內(nèi)有nestin+。Zulewski等[3]發(fā)現(xiàn)，成年大鼠的nestin+位于胰島及散在腺泡周圍的外分泌部中。胰島來源的巢蛋白可以參與胰島內(nèi)分泌細(xì)胞的新生。該細(xì)胞在胰島和導(dǎo)管內(nèi)不同于導(dǎo)管上皮細(xì)胞，因其不表達(dá)導(dǎo)管標(biāo)志物CK219。為進(jìn)一步明確在大鼠胰腺中nestin+的類型，Lardon 等[4] 通過免疫組化發(fā)現(xiàn)，nestin+定位在正常和再生成年胰腺的間充質(zhì)細(xì)胞內(nèi)。在導(dǎo)管結(jié)扎所致的胰腺炎大鼠中，每個(gè)胰島至少含有2～3個(gè)nestin+。大多數(shù)細(xì)胞有星形細(xì)胞的形態(tài)，一種典型的與血管相關(guān)的外周細(xì)胞。另外，nestin+也存在于胰腺再生過程中的新生毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞。在胰腺組織移植時(shí)，nestin+在間充質(zhì)迅速增生，并表達(dá)結(jié)蛋白、波形蛋白，GFAP(代表星形細(xì)胞標(biāo)志物) 。巢蛋白也是星形細(xì)胞、增生時(shí)的血管源性內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物。國內(nèi)倪雪峰[5]等研究顯示在大鼠胚胎后期、新生期、成年三階段nestin在核酸、蛋白水平均有表達(dá)，nestin +主要分布在胰島，在腺泡周圍的外分泌中有少量分布。隨大鼠胰腺的生長發(fā)育，nestin核酸、蛋白表達(dá)下調(diào)，胰島內(nèi)nestin+數(shù)也呈下降趨勢。
2000年Hunziker等[1]首先發(fā)現(xiàn)在胰腺內(nèi)有nestin+。Zulewski等[3]發(fā)現(xiàn)，成年大鼠的nestin+位于胰島及散在腺泡周圍的外分泌部中。胰島來源的巢蛋白可以參與胰島內(nèi)分泌細(xì)胞的新生。該細(xì)胞在胰島和導(dǎo)管內(nèi)不同于導(dǎo)管上皮細(xì)胞，因其不表達(dá)導(dǎo)管標(biāo)志物CK219。為進(jìn)一步明確在大鼠胰腺中nestin+的類型，Lardon 等[4] 通過免疫組化發(fā)現(xiàn)，nestin+定位在正常和再生成年胰腺的間充質(zhì)細(xì)胞內(nèi)。在導(dǎo)管結(jié)扎所致的胰腺炎大鼠中，每個(gè)胰島至少含有2～3個(gè)nestin+。大多數(shù)細(xì)胞有星形細(xì)胞的形態(tài)，一種典型的與血管相關(guān)的外周細(xì)胞。另外，nestin+也存在于胰腺再生過程中的新生毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞。在胰腺組織移植時(shí)，nestin+在間充質(zhì)迅速增生，并表達(dá)結(jié)蛋白、波形蛋白，GFAP(代表星形細(xì)胞標(biāo)志物) 。巢蛋白也是星形細(xì)胞、增生時(shí)的血管源性內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物。國內(nèi)倪雪峰[5]等研究顯示在大鼠胚胎后期、新生期、成年三階段nestin在核酸、蛋白水平均有表達(dá)，nestin +主要分布在胰島，在腺泡周圍的外分泌中有少量分布。隨大鼠胰腺的生長發(fā)育，nestin核酸、蛋白表達(dá)下調(diào)，胰島內(nèi)nestin+數(shù)也呈下降趨勢。
1.2 巢蛋白在小鼠胰腺中分布及定性、定位
1.2 巢蛋白在小鼠胰腺中分布及定性、定位
為明確巢蛋白在小鼠胰腺中的定位，Selander等[6]發(fā)現(xiàn)nestin+在間充質(zhì)中表達(dá)，上皮細(xì)胞中不表達(dá)。早期胰腺干細(xì)胞的標(biāo)志物IPF1PPDX1，祖細(xì)胞的標(biāo)志物ngn3；胰腺分化細(xì)胞的標(biāo)志物Isl1均表達(dá)在上皮鈣連素陽性的上皮細(xì)胞內(nèi)，但不表達(dá)巢蛋白。nestin+在包繞胰腺上皮和正在發(fā)育的胃腸來源的上皮周圍，但不在胰腺上皮細(xì)胞內(nèi)。從而支持nestin+不同于導(dǎo)管上皮內(nèi)的觀點(diǎn)。
為明確巢蛋白在小鼠胰腺中的定位，Selander等[6]發(fā)現(xiàn)nestin+在間充質(zhì)中表達(dá)，上皮細(xì)胞中不表達(dá)。早期胰腺干細(xì)胞的標(biāo)志物IPF1PPDX1，祖細(xì)胞的標(biāo)志物ngn3；胰腺分化細(xì)胞的標(biāo)志物Isl1均表達(dá)在上皮鈣連素陽性的上皮細(xì)胞內(nèi)，但不表達(dá)巢蛋白。nestin+在包繞胰腺上皮和正在發(fā)育的胃腸來源的上皮周圍，但不在胰腺上皮細(xì)胞內(nèi)。從而支持nestin+不同于導(dǎo)管上皮內(nèi)的觀點(diǎn)。
1.3 巢蛋白在人胚胎和成人胰腺中的分布及定性、定位
1.3 巢蛋白在人胚胎和成人胰腺中的分布及定性、定位
鄭宗梅等[7]研究顯示nestin和Ngn3在12～14周人胚胎胰腺組織均廣泛表達(dá)，該陽性細(xì)胞中均無胰島素及胰高血糖素表達(dá)；在胰島中未見到該二者的共表達(dá)，但在導(dǎo)管中可見共表達(dá)。說明nestin和Ngn3在人胚胎胰腺未分化細(xì)胞中表達(dá)，而具有分泌功能的內(nèi)分泌細(xì)胞無表達(dá)。夏修金[8]等發(fā)現(xiàn)16周人胚胎胰腺的胰島以及胰導(dǎo)管和腺泡結(jié)構(gòu)中檢測到nestin+，以腺泡結(jié)構(gòu)和小導(dǎo)管中的數(shù)目為多。部分胰島素和CK19染色強(qiáng)陽性的細(xì)胞中巢蛋白染色為弱陽性，胰升糖素強(qiáng)陽性的部位則未見nestin+。認(rèn)為nestin+可能是胰腺組織中一個(gè)特殊的細(xì)胞亞群，代表了一群未成熟細(xì)胞。楊開明[9]等研究顯示人胚胎6～14 w胰腺中nestin+存在于胰腺的間質(zhì)，數(shù)量極少，認(rèn)為胚胎胰腺的發(fā)育中，胰腺間質(zhì)存在胰腺干細(xì)胞。我們的實(shí)驗(yàn)顯示各胎齡段(10 ~ 37 w)胰腺均有nestin+表達(dá)，存在于胰島、間充質(zhì)和血管中，在腺泡、導(dǎo)管中未發(fā)現(xiàn)nestin+，胚胎發(fā)育晚期階段（29 ~ 37 w）nestin+高于其它胎齡組。因此隨著胎齡的變化，胰腺nestin+數(shù)也發(fā)生了變化[10]。
鄭宗梅等[7]研究顯示nestin和Ngn3在12～14周人胚胎胰腺組織均廣泛表達(dá)，該陽性細(xì)胞中均無胰島素及胰高血糖素表達(dá)；在胰島中未見到該二者的共表達(dá)，但在導(dǎo)管中可見共表達(dá)。說明nestin和Ngn3在人胚胎胰腺未分化細(xì)胞中表達(dá)，而具有分泌功能的內(nèi)分泌細(xì)胞無表達(dá)。夏修金[8]等發(fā)現(xiàn)16周人胚胎胰腺的胰島以及胰導(dǎo)管和腺泡結(jié)構(gòu)中檢測到nestin+，以腺泡結(jié)構(gòu)和小導(dǎo)管中的數(shù)目為多。部分胰島素和CK19染色強(qiáng)陽性的細(xì)胞中巢蛋白染色為弱陽性，胰升糖素強(qiáng)陽性的部位則未見nestin+。認(rèn)為nestin+可能是胰腺組織中一個(gè)特殊的細(xì)胞亞群，代表了一群未成熟細(xì)胞。楊開明[9]等研究顯示人胚胎6～14 w胰腺中nestin+存在于胰腺的間質(zhì)，數(shù)量極少，認(rèn)為胚胎胰腺的發(fā)育中，胰腺間質(zhì)存在胰腺干細(xì)胞。我們的實(shí)驗(yàn)顯示各胎齡段(10 ~ 37 w)胰腺均有nestin+表達(dá)，存在于胰島、間充質(zhì)和血管中，在腺泡、導(dǎo)管中未發(fā)現(xiàn)nestin+，胚胎發(fā)育晚期階段（29 ~ 37 w）nestin+高于其它胎齡組。因此隨著胎齡的變化，胰腺nestin+數(shù)也發(fā)生了變化[10]。
郭宏波[12]等研究發(fā)現(xiàn)，nestin+在正常成人胰腺組織中的分布最強(qiáng)在于胰島內(nèi)，胰腺外分泌部未見明確的nestin+。Tino[13]等應(yīng)用免疫組織化學(xué)雙重染色檢測。發(fā)現(xiàn)nestin在胰島、外分泌部中均存在，在胰島的內(nèi)分泌細(xì)胞、腺泡和導(dǎo)管中沒有陽性細(xì)胞，所有nestin+共表達(dá)CD31、CD105、CD34和波形蛋白，出現(xiàn)在圍繞導(dǎo)管上皮細(xì)胞周圍的結(jié)締組織血管內(nèi)皮中，但不存在于導(dǎo)管上皮。nestin+在成人胰腺中表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞，因此它在成人胰腺中不代表表達(dá)內(nèi)分泌祖細(xì)胞的標(biāo)志物。
郭宏波[12]等研究發(fā)現(xiàn)，nestin+在正常成人胰腺組織中的分布最強(qiáng)在于胰島內(nèi)，胰腺外分泌部未見明確的nestin+。Tino[13]等應(yīng)用免疫組織化學(xué)雙重染色檢測。發(fā)現(xiàn)nestin在胰島、外分泌部中均存在，在胰島的內(nèi)分泌細(xì)胞、腺泡和導(dǎo)管中沒有陽性細(xì)胞，所有nestin+共表達(dá)CD31、CD105、CD34和波形蛋白，出現(xiàn)在圍繞導(dǎo)管上皮細(xì)胞周圍的結(jié)締組織血管內(nèi)皮中，但不存在于導(dǎo)管上皮。nestin+在成人胰腺中表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞，因此它在成人胰腺中不代表表達(dá)內(nèi)分泌祖細(xì)胞的標(biāo)志物。
2.胰腺nestin+的分離與分化
2.胰腺nestin+的分離與分化
2.1 大鼠胰腺nestin+的分離與分化
2.1 大鼠胰腺nestin+的分離與分化
Zulewski等[3]發(fā)現(xiàn)，成年大鼠胰島內(nèi)的nestin+在體外培養(yǎng)( > 8個(gè)月) ，有不同尋常的多潛能增生能力，可以反復(fù)克隆。經(jīng)誘導(dǎo)分化可以表達(dá)肝、外分泌胰腺的標(biāo)志物：甲胎蛋白、淀粉酶；顯示導(dǎo)管P內(nèi)皮形態(tài)：表達(dá)CK219；分化為內(nèi)分泌細(xì)胞，表達(dá)胰島素、胰高血糖素、胰腺十二指腸同源盒轉(zhuǎn)錄因子( IDX21) 。巢蛋白可以作為多潛能的胰腺干細(xì)胞的標(biāo)志。
Zulewski等[3]發(fā)現(xiàn)，成年大鼠胰島內(nèi)的nestin+在體外培養(yǎng)( > 8個(gè)月) ，有不同尋常的多潛能增生能力，可以反復(fù)克隆。經(jīng)誘導(dǎo)分化可以表達(dá)肝、外分泌胰腺的標(biāo)志物：甲胎蛋白、淀粉酶；顯示導(dǎo)管P內(nèi)皮形態(tài)：表達(dá)CK219；分化為內(nèi)分泌細(xì)胞，表達(dá)胰島素、胰高血糖素、胰腺十二指腸同源盒轉(zhuǎn)錄因子( IDX21) 。巢蛋白可以作為多潛能的胰腺干細(xì)胞的標(biāo)志。
2.2 小鼠胰腺nestin+的分離與分化
2.2 小鼠胰腺nestin+的分離與分化
Lumelsky 等[2]通過篩選巢蛋白陽性的胚胎干細(xì)胞(ES)，體外經(jīng)誘導(dǎo)分化后，可產(chǎn)生分泌胰島素的內(nèi)分泌細(xì)胞。當(dāng)將這些分化的細(xì)胞注射入糖尿病小鼠，分泌胰島素的細(xì)胞可以迅速血管化，形成胰島樣組織。葉健等[13]以lV型膠原酶消化小鼠胰腺組織進(jìn)行低糖DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行體外連續(xù)培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，從內(nèi)分泌部分離的nestin+呈集落樣生長，開始表達(dá)PDX21，呈現(xiàn)向胰腺內(nèi)分泌部的B細(xì)胞分化的趨勢。來源于胰腺外分泌部的nestin+呈鋪路石樣形態(tài)，表達(dá)導(dǎo)管上皮細(xì)胞的特異性標(biāo)志CK219，呈現(xiàn)向胰腺外分泌部的導(dǎo)管上皮細(xì)胞分化的趨勢。同一細(xì)胞集落中發(fā)生分化的胰腺nestin+亦隨時(shí)間延長逐漸增多。
Lumelsky 等[2]通過篩選巢蛋白陽性的胚胎干細(xì)胞(ES)，體外經(jīng)誘導(dǎo)分化后，可產(chǎn)生分泌胰島素的內(nèi)分泌細(xì)胞。當(dāng)將這些分化的細(xì)胞注射入糖尿病小鼠，分泌胰島素的細(xì)胞可以迅速血管化，形成胰島樣組織。葉健等[13]以lV型膠原酶消化小鼠胰腺組織進(jìn)行低糖DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行體外連續(xù)培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，從內(nèi)分泌部分離的nestin+呈集落樣生長，開始表達(dá)PDX21，呈現(xiàn)向胰腺內(nèi)分泌部的B細(xì)胞分化的趨勢。來源于胰腺外分泌部的nestin+呈鋪路石樣形態(tài)，表達(dá)導(dǎo)管上皮細(xì)胞的特異性標(biāo)志CK219，呈現(xiàn)向胰腺外分泌部的導(dǎo)管上皮細(xì)胞分化的趨勢。同一細(xì)胞集落中發(fā)生分化的胰腺nestin+亦隨時(shí)間延長逐漸增多。
2.3 人胰腺nestin+的分離與分化
2.3 人胰腺nestin+的分離與分化
鑒于多數(shù)學(xué)者認(rèn)為巢蛋白是胰腺干細(xì)胞，如能提取人胰腺中nestin+并進(jìn)行分離培養(yǎng)、體外增殖及功能誘導(dǎo)，若能分化為B細(xì)胞，則是解決胰島供體短缺的有效途徑。張玲[15]等采用膠原酶消化法，從胎兒胰腺組織中分離獲得胰島樣細(xì)胞簇(ICCs)，發(fā)現(xiàn)ICCs細(xì)胞具有很強(qiáng)的增殖能力，可至少連續(xù)傳16代；可表達(dá)巢蛋白和ABCG2；在多種細(xì)胞因子和無血清的條件下，nestin+經(jīng)誘導(dǎo)后可出現(xiàn)胰島素、胰升糖素和PDX21mRNA的表達(dá)，而巢蛋白和Ngn3mRNA表達(dá)消失。RIA分析也可檢測到誘導(dǎo)后的細(xì)胞內(nèi)有胰島素產(chǎn)生。因此從胎兒胰腺中分離得到的nestin+具有胰腺前體細(xì)胞的特性，在體外具有很強(qiáng)的增殖能力，并可誘導(dǎo)分化為胰島內(nèi)分泌細(xì)胞。nestin+有望為胰島移植提供一種新的細(xì)胞來源。國外學(xué)者已從成人胰管中分離出nestin+并進(jìn)行培養(yǎng)，成功地誘導(dǎo)分化出了既含胰管細(xì)胞又含胰島細(xì)胞的細(xì)胞群[15]，證實(shí)胰腺外分泌部存在著巢蛋白陽性的干細(xì)胞。王宏[16]等從胎兒胰中分離的nestin+進(jìn)行篩選后擴(kuò)增，純化后的其表面標(biāo)志與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志相似，此類細(xì)胞可在體外誘導(dǎo)為脂肪細(xì)胞或骨細(xì)胞，胎兒胰腺來源的nestin+具有一定間充質(zhì)干細(xì)胞的特性。黃海霞[17]等對人胎胰腺中有nestin+進(jìn)行分離和體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)胎胰nestin+表達(dá)高水平ABCG2/BCRPI，并在形態(tài)和生長方式上均不同于導(dǎo)管上皮細(xì)胞；nestin+在體外可自發(fā)形成ICC，ICC中的nestin+具有多向分化潛能，可表達(dá)多種細(xì)胞特異抗原，經(jīng)體外誘導(dǎo)可產(chǎn)生少量胰島素陽性的類B細(xì)胞。并且ICC在NOD-Scid糖尿病模型小鼠和正常小鼠腎膜下移植，發(fā)現(xiàn)移植處有明顯的血管增生，ICC可使糖尿病小鼠血糖明顯降低，在正常小鼠體內(nèi)分化為多種結(jié)構(gòu)，同時(shí)繼續(xù)增殖侵入腎實(shí)質(zhì)。鄭宗梅[18]等用Ⅴ型膠原酶消化胚胎胰腺，獲得貼壁生長的人胚胰腺細(xì)胞，觀察其原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、增殖能力及體外誘導(dǎo)分化能力，結(jié)果人胚胎胰腺可以體外分離獲得nestin和Ngn3陽性細(xì)胞，為未分化細(xì)胞，能在體外大量擴(kuò)增，可長期培養(yǎng)，總蛋白中有胰島素表達(dá)，有分化為nestin+的潛能，有望為胰腺組織工程移植提供足夠的種子細(xì)胞。
鑒于多數(shù)學(xué)者認(rèn)為巢蛋白是胰腺干細(xì)胞，如能提取人胰腺中nestin+并進(jìn)行分離培養(yǎng)、體外增殖及功能誘導(dǎo)，若能分化為B細(xì)胞，則是解決胰島供體短缺的有效途徑。張玲[15]等采用膠原酶消化法，從胎兒胰腺組織中分離獲得胰島樣細(xì)胞簇(ICCs)，發(fā)現(xiàn)ICCs細(xì)胞具有很強(qiáng)的增殖能力，可至少連續(xù)傳16代；可表達(dá)巢蛋白和ABCG2；在多種細(xì)胞因子和無血清的條件下，nestin+經(jīng)誘導(dǎo)后可出現(xiàn)胰島素、胰升糖素和PDX21mRNA的表達(dá)，而巢蛋白和Ngn3mRNA表達(dá)消失。RIA分析也可檢測到誘導(dǎo)后的細(xì)胞內(nèi)有胰島素產(chǎn)生。因此從胎兒胰腺中分離得到的nestin+具有胰腺前體細(xì)胞的特性，在體外具有很強(qiáng)的增殖能力，并可誘導(dǎo)分化為胰島內(nèi)分泌細(xì)胞。nestin+有望為胰島移植提供一種新的細(xì)胞來源。國外學(xué)者已從成人胰管中分離出nestin+并進(jìn)行培養(yǎng)，成功地誘導(dǎo)分化出了既含胰管細(xì)胞又含胰島細(xì)胞的細(xì)胞群[15]，證實(shí)胰腺外分泌部存在著巢蛋白陽性的干細(xì)胞。王宏[16]等從胎兒胰中分離的nestin+進(jìn)行篩選后擴(kuò)增，純化后的其表面標(biāo)志與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志相似，此類細(xì)胞可在體外誘導(dǎo)為脂肪細(xì)胞或骨細(xì)胞，胎兒胰腺來源的nestin+具有一定間充質(zhì)干細(xì)胞的特性。黃海霞[17]等對人胎胰腺中有nestin+進(jìn)行分離和體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)胎胰nestin+表達(dá)高水平ABCG2/BCRPI，并在形態(tài)和生長方式上均不同于導(dǎo)管上皮細(xì)胞；nestin+在體外可自發(fā)形成ICC，ICC中的nestin+具有多向分化潛能，可表達(dá)多種細(xì)胞特異抗原，經(jīng)體外誘導(dǎo)可產(chǎn)生少量胰島素陽性的類B細(xì)胞。并且ICC在NOD-Scid糖尿病模型小鼠和正常小鼠腎膜下移植，發(fā)現(xiàn)移植處有明顯的血管增生，ICC可使糖尿病小鼠血糖明顯降低，在正常小鼠體內(nèi)分化為多種結(jié)構(gòu)，同時(shí)繼續(xù)增殖侵入腎實(shí)質(zhì)。鄭宗梅[18]等用Ⅴ型膠原酶消化胚胎胰腺，獲得貼壁生長的人胚胰腺細(xì)胞，觀察其原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、增殖能力及體外誘導(dǎo)分化能力，結(jié)果人胚胎胰腺可以體外分離獲得nestin和Ngn3陽性細(xì)胞，為未分化細(xì)胞，能在體外大量擴(kuò)增，可長期培養(yǎng)，總蛋白中有胰島素表達(dá)，有分化為nestin+的潛能，有望為胰腺組織工程移植提供足夠的種子細(xì)胞。
存入我的閱覽室
3.結(jié)束語
3.結(jié)束語
結(jié)合文獻(xiàn)資料，認(rèn)為巢蛋白是在胚胎胰腺發(fā)育過程中存在的胰腺干細(xì)胞，也代表著胰腺的增殖水平。從人胚胎后期胰島中可分離得到更多的巢蛋白陽性干細(xì)胞，更容易獲得大量的干細(xì)胞而進(jìn)行篩選、體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化，從而為糖尿病胰腺干細(xì)胞移植提供了更多的細(xì)胞來源。
結(jié)合文獻(xiàn)資料，認(rèn)為巢蛋白是在胚胎胰腺發(fā)育過程中存在的胰腺干細(xì)胞，也代表著胰腺的增殖水平。從人胚胎后期胰島中可分離得到更多的巢蛋白陽性干細(xì)胞，更容易獲得大量的干細(xì)胞而進(jìn)行篩選、體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化，從而為糖尿病胰腺干細(xì)胞移植提供了更多的細(xì)胞來源。
參考文獻(xiàn)：
參考文獻(xiàn)：
[1]Hunziker，Stein M．nestin expressing cells in the pancreatic islets of Langerhans[J]．Biochem Biophys Res Commun，2000，271（1）：116-119．
[1]Hunziker，Stein M．nestin expressing cells in the pancreatic islets of Langerhans[J]．Biochem Biophys Res Commun，2000，271（1）：116-119．
[2]Lumelsky N，Blondel O，Laeng P，et al．Differentiation of embryonic stem cells to insulin-secreting structures similar to pancreatic islets [J]. Science，2001，292（5520）：1389-1394．res similar to pancreatic islets [J]. Science，2001，292（5520）：1389-1394．
[3]Zulewski H，Abraham EJ，Gerlach MJ， et al .Multipotential nestin-positive stem cells isolated frompancreatic islets differentiate Ex vivo into pancreatic endocrine ，exocrine ，and hepatic phenotypes [J]. Diabetes，2001，50(3) :521-533.
[3]Zulewski H，Abraham EJ，Gerlach MJ， et al .Multipotential nestin-positive stem cells isolated frompancreatic islets differentiate Ex vivo into pancreatic endocrine ，exocrine ，and hepatic phenotypes [J]. Diabetes，2001，50(3) :521-533.
[4]Lardon J，Rooman I，Bouwens L. Nestin expression in pancreatic stellate cells and angiogenic endothelial cells [J] . Histochem Cell Biol，2002，117(6) :535-540.
[4]Lardon J，Rooman I，Bouwens L. Nestin expression in pancreatic stellate cells and angiogenic endothelial cells [J] . Histochem Cell Biol，2002，117(6) :535-540.
[5]倪雪峰,袁 櫟,程志祥,等.巢蛋白在大鼠胚胎、新生及成年胰腺中的表達(dá)變化[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004 ,25(3):193-196
[5]倪雪峰,袁 櫟,程志祥,等.巢蛋白在大鼠胚胎、新生及成年胰腺中的表達(dá)變化[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004 ,25(3):193-196
[6]Selander L，Edlund H. Nestin is expressed in mesenchymal and not epithelial cells of the developing mouse pancreas [J]. Mech Dev，2002，113(2) :189-192.
[6]Selander L，Edlund H. Nestin is expressed in mesenchymal and not epithelial cells of the developing mouse pancreas [J]. Mech Dev，2002，113(2) :189-192.
[7]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.巢蛋白和神經(jīng)元素3在人胚胎胰腺中的表達(dá)和分布[J].中華外科雜志，2005，43（23）：1537-1540．
[7]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.巢蛋白和神經(jīng)元素3在人胚胎胰腺中的表達(dá)和分布[J].中華外科雜志，2005，43（23）：1537-1540．
[8]夏修金，鮑衛(wèi)漢，陳東明，等．巢蛋白在人胚胎胰腺中的表達(dá)[J].中國糖尿病雜志，2003， 11(3)：204-207．
[8]夏修金，鮑衛(wèi)漢，陳東明，等．巢蛋白在人胚胎胰腺中的表達(dá)[J].中國糖尿病雜志，2003， 11(3)：204-207．
[9]楊開明，李愛冬，羊惠君，等．Nestin、CK19及insulin等在胚胎胰腺發(fā)育中的表達(dá)[J]．細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2005，21 (3)：353-355．
[9]楊開明，李愛冬，羊惠君，等．Nestin、CK19及insulin等在胚胎胰腺發(fā)育中的表達(dá)[J]．細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2005，21 (3)：353-355．
[10]楊最素，江 峰，郁迪，等.人胚胎胰發(fā)育中巢蛋白和轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)的變化[J]．解剖學(xué)雜志，2010，34（3）：311-314．
[10]楊最素，江 峰，郁迪，等.人胚胎胰發(fā)育中巢蛋白和轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)的變化[J]．解剖學(xué)雜志，2010，34（3）：311-314．
[11]郭宏波，徐秀紅，張玉海.巢蛋白免疫陽性細(xì)胞在成人胰腺中的分布[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2002，1（14）：218-219．
[11]郭宏波，徐秀紅，張玉海.巢蛋白免疫陽性細(xì)胞在成人胰腺中的分布[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2002，1（14）：218-219．
[12]Tino Klein,Zhidong Ling,Harry Heimberg,et al. Nestin Is Expressed in Vascular Endothelial Cells in the Adult Human Pancreas[J].J Histochem Cytochem, 2003,51(6):697-706.
[12]Tino Klein,Zhidong Ling,Harry Heimberg,et al. Nestin Is Expressed in Vascular Endothelial Cells in the Adult Human Pancreas[J].J Histochem Cytochem, 2003,51(6):697-706.
[13]葉健，何少健，劉瓊東，等.新生昆明小鼠胰腺巢蛋白陽性細(xì)胞的自然分化[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13(14)：2680-2684．
[13]葉健，何少健，劉瓊東，等.新生昆明小鼠胰腺巢蛋白陽性細(xì)胞的自然分化[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13(14)：2680-2684．
[14]張玲，洪天配，胡江，等．胎兒胰腺組織中巢蛋白陽性細(xì)胞的分離和體外增殖以及誘導(dǎo)分化[J].中國糖尿病雜志，2003，11（6）：414-419.
[14]張玲，洪天配，胡江，等．胎兒胰腺組織中巢蛋白陽性細(xì)胞的分離和體外增殖以及誘導(dǎo)分化[J].中國糖尿病雜志，2003，11（6）：414-419.
[15]Bonner - Weir S, Taneja M, Weir GC, et al.In vitrocultivation of human islets from expanded ductal tissue[J]．Proc Natl Acad Sci USA,2000,97 (14): 7999-8004.
[15]Bonner - Weir S, Taneja M, Weir GC, et al.In vitrocultivation of human islets from expanded ductal tissue[J]．Proc Natl Acad Sci USA,2000,97 (14): 7999-8004.
[16]王宏，胡江，李凌松，等.篩選后的巢蛋白陽性細(xì)胞流式鑒定及誘導(dǎo)分化[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，27（6）：683-688
[16]王宏，胡江，李凌松，等.篩選后的巢蛋白陽性細(xì)胞流式鑒定及誘導(dǎo)分化[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，27（6）：683-688
[17]黃海霞，陳玉英，倉輝，等.人胎胰巢蛋白陽性細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其生物學(xué)特性研究[J].實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào)，2003，36(1)；25-31．
[17]黃海霞，陳玉英，倉輝，等.人胎胰巢蛋白陽性細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其生物學(xué)特性研究[J].實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào)，2003，36(1)；25-31．
[18]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.體外培養(yǎng)及其誘導(dǎo)分化人胚胰腺巢蛋白和神經(jīng)元素3陽性細(xì)胞的實(shí)驗(yàn).中國臨床康復(fù)，2005，269（9）：62-67．
[18]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.體外培養(yǎng)及其誘導(dǎo)分化人胚胰腺巢蛋白和神經(jīng)元素3陽性細(xì)胞的實(shí)驗(yàn).中國臨床康復(fù)，2005，269（9）：62-67．
作者簡介：
作者簡介：
甘西西（1962-），女，漢，湖北咸豐，浙江海洋學(xué)院醫(yī)學(xué)院，高級講師。
甘西西（1962-），女，漢，湖北咸豐，浙江海洋學(xué)院醫(yī)學(xué)院，高級講師。
楊最素（1967-），女，漢，浙江定海，浙江海洋學(xué)院醫(yī)學(xué)院，副教授，碩士生導(dǎo)師。
楊最素（1967-），女，漢，浙江定海，浙江海洋學(xué)院醫(yī)學(xué)院，副教授，碩士生導(dǎo)師。
存入我的閱覽室
3.結(jié)束語
3.結(jié)束語
結(jié)合文獻(xiàn)資料，認(rèn)為巢蛋白是在胚胎胰腺發(fā)育過程中存在的胰腺干細(xì)胞，也代表著胰腺的增殖水平。從人胚胎后期胰島中可分離得到更多的巢蛋白陽性干細(xì)胞，更容易獲得大量的干細(xì)胞而進(jìn)行篩選、體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化，從而為糖尿病胰腺干細(xì)胞移植提供了更多的細(xì)胞來源。
結(jié)合文獻(xiàn)資料，認(rèn)為巢蛋白是在胚胎胰腺發(fā)育過程中存在的胰腺干細(xì)胞，也代表著胰腺的增殖水平。從人胚胎后期胰島中可分離得到更多的巢蛋白陽性干細(xì)胞，更容易獲得大量的干細(xì)胞而進(jìn)行篩選、體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化，從而為糖尿病胰腺干細(xì)胞移植提供了更多的細(xì)胞來源。
參考文獻(xiàn)：
參考文獻(xiàn)：
[1]Hunziker，Stein M．nestin expressing cells in the pancreatic islets of Langerhans[J]．Biochem Biophys Res Commun，2000，271（1）：116-119．
[1]Hunziker，Stein M．nestin expressing cells in the pancreatic islets of Langerhans[J]．Biochem Biophys Res Commun，2000，271（1）：116-119．
[2]Lumelsky N，Blondel O，Laeng P，et al．Differentiation of embryonic stem cells to insulin-secreting structures similar to pancreatic islets [J]. Science，2001，292（5520）：1389-1394．92（5520）：1389-1394．
[3]Zulewski H，Abraham EJ，Gerlach MJ， et al .Multipotential nestin-positive stem cells isolated frompancreatic islets differentiate Ex vivo into pancreatic endocrine ，exocrine ，and hepatic phenotypes [J]. Diabetes，2001，50(3) :521-533.
[3]Zulewski H，Abraham EJ，Gerlach MJ， et al .Multipotential nestin-positive stem cells isolated frompancreatic islets differentiate Ex vivo into pancreatic endocrine ，exocrine ，and hepatic phenotypes [J]. Diabetes，2001，50(3) :521-533.
[4]Lardon J，Rooman I，Bouwens L. Nestin expression in pancreatic stellate cells and angiogenic endothelial cells [J] . Histochem Cell Biol，2002，117(6) :535-540.
[4]Lardon J，Rooman I，Bouwens L. Nestin expression in pancreatic stellate cells and angiogenic endothelial cells [J] . Histochem Cell Biol，2002，117(6) :535-540.
[5]倪雪峰,袁 櫟,程志祥,等.巢蛋白在大鼠胚胎、新生及成年胰腺中的表達(dá)變化[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004 ,25(3):193-196
[5]倪雪峰,袁 櫟,程志祥,等.巢蛋白在大鼠胚胎、新生及成年胰腺中的表達(dá)變化[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004 ,25(3):193-196
[6]Selander L，Edlund H. Nestin is expressed in mesenchymal and not epithelial cells of the developing mouse pancreas [J]. Mech Dev，2002，113(2) :189-192.
[6]Selander L，Edlund H. Nestin is expressed in mesenchymal and not epithelial cells of the developing mouse pancreas [J]. Mech Dev，2002，113(2) :189-192.
[7]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.巢蛋白和神經(jīng)元素3在人胚胎胰腺中的表達(dá)和分布[J].中華外科雜志，2005，43（23）：1537-1540．
[7]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.巢蛋白和神經(jīng)元素3在人胚胎胰腺中的表達(dá)和分布[J].中華外科雜志，2005，43（23）：1537-1540．
[8]夏修金，鮑衛(wèi)漢，陳東明，等．巢蛋白在人胚胎胰腺中的表達(dá)[J].中國糖尿病雜志，2003， 11(3)：204-207．
[8]夏修金，鮑衛(wèi)漢，陳東明，等．巢蛋白在人胚胎胰腺中的表達(dá)[J].中國糖尿病雜志，2003， 11(3)：204-207．
[9]楊開明，李愛冬，羊惠君，等．Nestin、CK19及insulin等在胚胎胰腺發(fā)育中的表達(dá)[J]．細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2005，21 (3)：353-355．
[9]楊開明，李愛冬，羊惠君，等．Nestin、CK19及insulin等在胚胎胰腺發(fā)育中的表達(dá)[J]．細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2005，21 (3)：353-355．
[10]楊最素，江 峰，郁迪，等.人胚胎胰發(fā)育中巢蛋白和轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)的變化[J]．解剖學(xué)雜志，2010，34（3）：311-314．
[10]楊最素，江 峰，郁迪，等.人胚胎胰發(fā)育中巢蛋白和轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)的變化[J]．解剖學(xué)雜志，2010，34（3）：311-314．
[11]郭宏波，徐秀紅，張玉海.巢蛋白免疫陽性細(xì)胞在成人胰腺中的分布[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2002，1（14）：218-219．
[11]郭宏波，徐秀紅，張玉海.巢蛋白免疫陽性細(xì)胞在成人胰腺中的分布[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2002，1（14）：218-219．
[12]Tino Klein,Zhidong Ling,Harry Heimberg,et al. Nestin Is Expressed in Vascular Endothelial Cells in the Adult Human Pancreas[J].J Histochem Cytochem, 2003,51(6):697-706.
[12]Tino Klein,Zhidong Ling,Harry Heimberg,et al. Nestin Is Expressed in Vascular Endothelial Cells in the Adult Human Pancreas[J].J Histochem Cytochem, 2003,51(6):697-706.
[13]葉健，何少健，劉瓊東，等.新生昆明小鼠胰腺巢蛋白陽性細(xì)胞的自然分化[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13(14)：2680-2684．
[13]葉健，何少健，劉瓊東，等.新生昆明小鼠胰腺巢蛋白陽性細(xì)胞的自然分化[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13(14)：2680-2684．
[14]張玲，洪天配，胡江，等．胎兒胰腺組織中巢蛋白陽性細(xì)胞的分離和體外增殖以及誘導(dǎo)分化[J].中國糖尿病雜志，2003，11（6）：414-419.
[14]張玲，洪天配，胡江，等．胎兒胰腺組織中巢蛋白陽性細(xì)胞的分離和體外增殖以及誘導(dǎo)分化[J].中國糖尿病雜志，2003，11（6）：414-419.
[15]Bonner - Weir S, Taneja M, Weir GC, et al.In vitrocultivation of human islets from expanded ductal tissue[J]．Proc Natl Acad Sci USA,2000,97 (14): 7999-8004.
[15]Bonner - Weir S, Taneja M, Weir GC, et al.In vitrocultivation of human islets from expanded ductal tissue[J]．Proc Natl Acad Sci USA,2000,97 (14): 7999-8004.
[16]王宏，胡江，李凌松，等.篩選后的巢蛋白陽性細(xì)胞流式鑒定及誘導(dǎo)分化[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，27（6）：683-688
[16]王宏，胡江，李凌松，等.篩選后的巢蛋白陽性細(xì)胞流式鑒定及誘導(dǎo)分化[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，27（6）：683-688
[17]黃海霞，陳玉英，倉輝，等.人胎胰巢蛋白陽性細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其生物學(xué)特性研究[J].實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào)，2003，36(1)；25-31．
[17]黃海霞，陳玉英，倉輝，等.人胎胰巢蛋白陽性細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其生物學(xué)特性研究[J].實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào)，2003，36(1)；25-31．
[18]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.體外培養(yǎng)及其誘導(dǎo)分化人胚胰腺巢蛋白和神經(jīng)元素3陽性細(xì)胞的實(shí)驗(yàn).中國臨床康復(fù)，2005，269（9）：62-67．
[18]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.體外培養(yǎng)及其誘導(dǎo)分化人胚胰腺巢蛋白和神經(jīng)元素3陽性細(xì)胞的實(shí)驗(yàn).中國臨床康復(fù)，2005，269（9）：62-67．
作者簡介：
作者簡介：
甘西西（1962-），女，漢，湖北咸豐，浙江海洋學(xué)院醫(yī)學(xué)院，高級講師。
甘西西（1962-），女，漢，湖北咸豐，浙江海洋學(xué)院醫(yī)學(xué)院，高級講師。
