序論：速發(fā)表網(wǎng)結(jié)合其深厚的文秘經(jīng)驗(yàn)，特別為您篩選了11篇光學(xué)顯微鏡的技術(shù)范文。如果您需要更多原創(chuàng)資料，歡迎隨時(shí)與我們的客服老師聯(lián)系，希望您能從中汲取靈感和知識(shí)！

篇1

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.11.816 文章編號(hào)：1004-7484（2013）-11-6794-02

顯微鏡是基層檢驗(yàn)科工作中常用設(shè)備之一，是臨床診斷及生物學(xué)檢查的重要檢測(cè)器械，對(duì)疾病臨床診斷具有重要指導(dǎo)意義。本文將對(duì)2012年2月――2013年2月期間我院進(jìn)行治療患者的新鮮晨尿80份作為研究對(duì)象，對(duì)比顯微鏡檢驗(yàn)技術(shù)和全自動(dòng)尿沉渣分析儀檢測(cè)結(jié)果，其宗旨為加強(qiáng)顯微鏡檢驗(yàn)技術(shù)在基層檢驗(yàn)科的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年2月――2013年2月期間我院進(jìn)行治療患者的80份新鮮晨尿（血尿）20ml作為研究對(duì)象，且均經(jīng)腎臟病理檢查確診為腎小球血尿。

1.2 方法 對(duì)所采集的新鮮晨尿平均分為兩個(gè)試管，一試管采用UF-100全自動(dòng)尿沉渣分析儀，并嚴(yán)格參照操作說明書進(jìn)行檢驗(yàn)，另一試管采用光學(xué)顯微鏡檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)，具體操作如下：將標(biāo)本采用離心機(jī)，以1500r/min速率離心5min后，去除上清液，取底部0.2ml帶沉淀的液體，將保留液充分搖勻后均勻涂片鏡檢，高倍鏡下將RBC和WBC分為20個(gè)視野進(jìn)行觀察，以平均數(shù)為統(tǒng)計(jì)量，低倍鏡下對(duì)管型分為10個(gè)視野進(jìn)行觀察，以平均數(shù)為統(tǒng)計(jì)量。雙人雙盲法計(jì)算平均值，尿液標(biāo)本在收集后2h內(nèi)檢測(cè)完畢。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察對(duì)比兩組檢驗(yàn)方法對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)結(jié)果及與腎臟病理的符合情況。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 UF-100全自動(dòng)尿沉渣分析儀檢測(cè) 參考Hyodo提供的參考標(biāo)準(zhǔn)：①非腎小球性血尿，80%紅細(xì)胞前前向散光射強(qiáng)度（FSC）≤84ch，呈均一性紅細(xì)胞；②腎小球性血尿，F(xiàn)SC≤126ch且84ch，呈非均一性紅細(xì)胞；③混合性血尿，F(xiàn)SC介于兩者之間。

1.4.2 顯微鏡檢測(cè) 鏡下血尿?yàn)槊扛弑兑曇熬梢姟?個(gè)紅細(xì)胞。①腎小球血尿，畸形紅細(xì)胞80%，呈非均一性紅細(xì)胞；③混合性血尿，介于兩者之間。

2 結(jié) 果

全自動(dòng)尿沉渣分析儀和光學(xué)顯微鏡對(duì)80份血尿標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)并與腎臟病理比較，其光學(xué)顯微鏡腎小球血尿檢出率為83.75%，明顯高于全自動(dòng)尿沉渣分析儀的67.5%，兩種檢驗(yàn)方法比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P

3 討 論

隨著醫(yī)療技術(shù)進(jìn)步，先進(jìn)檢驗(yàn)設(shè)備逐漸應(yīng)用于檢驗(yàn)科，其自動(dòng)化水平高，可簡(jiǎn)化操作流程，降低檢驗(yàn)污染率，快速有效為臨床提供檢出結(jié)果，但因受干擾物等因素的影響，可能會(huì)出現(xiàn)假性結(jié)果或漏檢，而應(yīng)用光學(xué)顯微鏡檢查，因其觀察檢驗(yàn)標(biāo)本具有直觀、簡(jiǎn)便、特異性好等優(yōu)點(diǎn)，可顯著提高檢出率，具有較高臨床檢驗(yàn)價(jià)值。

本文研究中，收集臨床數(shù)據(jù)資料作為加強(qiáng)顯微鏡檢驗(yàn)技術(shù)在基層檢驗(yàn)科應(yīng)用的依據(jù)，分別采用全自動(dòng)尿沉渣分析儀和光學(xué)顯微鏡對(duì)80份血尿標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)并與腎臟病理比較，其光學(xué)顯微鏡腎小球血尿檢出率為83.75%，明顯高于全自動(dòng)尿沉渣分析儀的67.5%，結(jié)果提示，全自動(dòng)尿沉渣分析儀對(duì)血尿標(biāo)本檢查起到篩查作用，而顯微鏡檢查相對(duì)來說才是“金標(biāo)準(zhǔn)”。盡管顯微鏡檢查操作繁瑣且操作要求較高，但臨床檢出率較高，為此臨床應(yīng)加強(qiáng)顯微鏡檢驗(yàn)技術(shù)在基層檢驗(yàn)科的應(yīng)用，進(jìn)一步提高檢出率。

由此，本文將加強(qiáng)顯微鏡檢驗(yàn)技術(shù)的臨床應(yīng)用體會(huì)總結(jié)如下：①加強(qiáng)對(duì)顯微鏡技術(shù)的重視，基礎(chǔ)檢驗(yàn)科檢驗(yàn)人員應(yīng)正確認(rèn)識(shí)顯微鏡技術(shù)在臨床診斷中的積極臨床意義，由于顯微鏡下形態(tài)學(xué)涉及血液、體液、微生物學(xué)及免疫學(xué)，為此工作人員應(yīng)熟悉掌握檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)各個(gè)亞專業(yè)及特點(diǎn)，如對(duì)高菌群失調(diào)引起的腹瀉診斷中，顯微鏡下直接涂片后即可做出初步診斷，并將分泌物進(jìn)行培養(yǎng)檢驗(yàn)，即可發(fā)現(xiàn)致病菌株，對(duì)臨床針對(duì)性用藥具有重要臨床價(jià)值；②摒棄對(duì)顯微鏡檢驗(yàn)消耗時(shí)間、人力、精力的錯(cuò)誤觀點(diǎn)，使其認(rèn)識(shí)到顯微鏡檢測(cè)陽性細(xì)菌結(jié)果明顯并其他先進(jìn)儀器檢測(cè)更為準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，定期開展顯微鏡臨床應(yīng)用知識(shí)培訓(xùn)，正確引導(dǎo)使用顯微鏡的技巧，積累工作經(jīng)驗(yàn)，以此加強(qiáng)檢驗(yàn)工作人員的業(yè)務(wù)能力及檢驗(yàn)技能，并提高顯微鏡檢驗(yàn)準(zhǔn)確率；③醫(yī)院及檢驗(yàn)科領(lǐng)導(dǎo)加強(qiáng)對(duì)檢驗(yàn)科質(zhì)量監(jiān)督，要求檢驗(yàn)人員嚴(yán)格遵守顯微鏡檢測(cè)流程，對(duì)全自動(dòng)尿沉渣分析儀等先進(jìn)儀器檢驗(yàn)后，再應(yīng)用顯微鏡技術(shù)復(fù)查，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，為臨床診斷及治療提供理論支持。

綜上所述，顯微鏡檢驗(yàn)技術(shù)是基層檢驗(yàn)科不可缺少的重要檢驗(yàn)工作環(huán)節(jié)，積極加強(qiáng)顯微鏡檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用，促進(jìn)科學(xué)、規(guī)范化顯微鏡檢驗(yàn)，對(duì)提升醫(yī)學(xué)形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)水平有重要的臨床價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳雪，王帥，翁亞光，等.基層衛(wèi)生院政府配送設(shè)備使用情況及影響因素分析――以重慶市基層檢驗(yàn)科為例[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，13（01）：147-149.

篇2

光波的限制

早在公元前1世紀(jì)，人們就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了這么一個(gè)現(xiàn)象：通過球形透明物體去觀察微小的物體時(shí)，可以使其放大成像。1590年，荷蘭和意大利的眼鏡制造者已經(jīng)造出類似顯微鏡的放大儀器。1665年前后，英國(guó)生物學(xué)家胡克發(fā)明了類似現(xiàn)在學(xué)校實(shí)驗(yàn)室里用的顯微鏡，并通過這臺(tái)顯微鏡看到了軟木中網(wǎng)格狀的結(jié)構(gòu)，胡克稱之為細(xì)胞。這是人類歷史上最偉大的發(fā)現(xiàn)之一，大大推動(dòng)了生物學(xué)的發(fā)展。

自從顯微鏡發(fā)明以來，科學(xué)家就不斷對(duì)它進(jìn)行改進(jìn)，期待獲得更大的放大倍數(shù)和更高的分辨精度。1873年，德國(guó)顯微鏡學(xué)家恩斯特?阿貝通過計(jì)算發(fā)現(xiàn)，由于光波相互干擾的原因，光學(xué)顯微鏡不能無限度地放大微小物質(zhì)，最多只能“看到”光波波長(zhǎng)一半的物質(zhì)，即尺寸不小于200納米的物質(zhì)。這就是有名的“阿貝原則”，200納米也被稱為光學(xué)顯微鏡的“繞射極限”。

“阿貝原則”公布之后，科學(xué)家感到十分沮喪，因?yàn)榉肿雍驮拥某叽绱蠖嘣?00納米以下。也就是說，光學(xué)顯微鏡似乎難以“看到”分子和原子所活動(dòng)的納米世界了。打個(gè)比方來說，如果生命是一座城市，那么細(xì)胞就是城市中的每一個(gè)房間。我們?nèi)庋壑荒芸吹缴俺鞘小焙推鞴?、組織等“建筑”，光學(xué)顯微鏡只能看到細(xì)胞“房間”，卻難以看到“房間”內(nèi)的物品。

因此，科學(xué)家開始發(fā)明多種能“看清”納米世界的電子顯微鏡。這些顯微鏡居然可以看到最小尺寸為0.2納米的原子，是光學(xué)顯微鏡精度的1 000倍！

讓分子發(fā)光

正當(dāng)電子顯微鏡大展身手的時(shí)候，分子生物學(xué)家很快發(fā)現(xiàn)了一個(gè)問題：在物理學(xué)和化學(xué)研究中得心應(yīng)手的電子顯微鏡，到了分子生物學(xué)研究中往往有些“水土不服”。因?yàn)殡娮语@微鏡不能研究活物，它們必須把細(xì)胞“殘忍地殺死”后才能進(jìn)行觀察。這樣一來，生物學(xué)家就難以研究分子在活細(xì)胞中的正?；顒?dòng)。

于是，生物學(xué)家就得重新考慮如何研制出精度超越200納米的光學(xué)顯微鏡。顯然，按照傳統(tǒng)的方法繼續(xù)研究，那就是“鉆牛角尖”了，到了必須換種思路來突破“繞射極限”。這種新思路還真被科學(xué)家想到了，那就是不再用外來的光源觀察細(xì)胞，而是讓細(xì)胞中的分子發(fā)出熒光來觀察它們。因此，目前生物學(xué)家所用的超分辨率顯微鏡也叫熒光顯微鏡。

如何讓細(xì)胞中的分子發(fā)出熒光呢？赫爾發(fā)明了熒光手電來解決這個(gè)問題。赫爾先利用成熟的分子染色技術(shù)給細(xì)胞注射熒光物質(zhì)，熒光物質(zhì)像染料一樣沾染到細(xì)胞中的生物大分子上。然后，利用熒光手電發(fā)出極細(xì)的激光束照射生物大分子，大分子上的熒光物質(zhì)被激發(fā)而發(fā)出熒光，就像是生物大分子本身發(fā)光一樣。

突破極限

為何發(fā)出熒光的細(xì)胞就可以讓光學(xué)顯微鏡突破極限呢？因?yàn)樵谥車h(huán)境黑暗的情況下，顯微鏡就可以看到細(xì)胞中發(fā)光的分子。有一個(gè)很好的例子可以說明這個(gè)問題。在明亮的白天，我們很難看到幾百米外的一盞燈泡；如果是在漆黑的夜晚，這盞燈泡亮起來之后，我們就可以看到它了。

如果夜晚遠(yuǎn)處只有一盞燈，我們可以很好地分辨出這盞燈。如果夜晚遠(yuǎn)處有一大片燈，甚至有一座明亮的城市，我們就很難分辨其中的一盞燈，這是因?yàn)楣饩€相互干擾，“阿貝原則”又起作用了。因此，赫爾得想辦法消除光線干擾。他改進(jìn)熒光手電，讓它可以發(fā)出一束激光讓生物分子發(fā)光，再用另一束激光消除其他熒光，通過兩束激光交替掃描細(xì)胞，就可以“看清”生物中的大分子了。

莫爾納爾和白茲格進(jìn)一步想出了一些辦法，消除或?yàn)V掉細(xì)胞中多余的熒光，結(jié)果讓顯微鏡居然成功地“看到”單個(gè)的生物分子，這被稱為單分子熒光顯微鏡。

活生生的納米世界

諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)評(píng)委會(huì)認(rèn)為：“理論上講，如今沒有什么物質(zhì)結(jié)構(gòu)小得無法研究?！痹陔娮语@微鏡時(shí)代，納米世界就像沙漠一樣一片死寂，其中的所有物質(zhì)都靜靜地躺在那里。然而，超分辨率光學(xué)顯微鏡讓我們可以看到活生生的納米世界，所有的生物分子按照它們?cè)镜摹吧罘绞健崩^續(xù)活動(dòng)，就像顯微鏡、熒光染料、激光這些東西不存在一樣。

有了超分辨光學(xué)顯微鏡，科學(xué)家就可以從分子層面看到生命生老病死所帶來的變化，為研究疾病機(jī)理和開發(fā)藥物提供了一個(gè)新的視野。我們將是這些成果的最大受益者，因?yàn)檫@些成果可以更好地維護(hù)我們的健康。

篇3

中圖分類號(hào)： O43 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)：

隨著更小、更快、更高度集成的光學(xué)和電子設(shè)備的需求日益增加，存在許多具有挑戰(zhàn)性的問題，在制造光學(xué)零件，例如，大尺寸，高數(shù)值孔徑，大型非球面零件，對(duì)表面粗糙度、表面結(jié)構(gòu)等要嚴(yán)格控制制造公差。三維測(cè)量不僅保證了光學(xué)產(chǎn)品的質(zhì)量，也為制造過程的監(jiān)測(cè)/控制提供了保障，是一項(xiàng)實(shí)用的技術(shù)。

1、微/納米結(jié)構(gòu)的三維測(cè)量

有多種技術(shù)可用于測(cè)量微/納米結(jié)構(gòu)，包括成像方法和非成象方法。每種方法都有其優(yōu)點(diǎn)一方面，但也有缺點(diǎn)在另一方面。光學(xué)顯微鏡作為最經(jīng)典的方法，具有快速和容易使用的特點(diǎn)。其中有些是可以執(zhí)行具有高垂直分辨率的三維測(cè)量。然而，由于光的衍射性質(zhì)，光學(xué)顯微鏡的橫向分辨率也是有限的。使用高孔徑物鏡和光源更短的波長(zhǎng)是一種有效的方式，以提高其橫向分辨率。掃描電子顯微鏡具有很高的分辨率，在下降到1.5時(shí)，使用的電子能量小于1千電子伏。但是，它必須在真空中進(jìn)行，也缺乏三維測(cè)量能力，有時(shí)還具有破壞性。電子光學(xué)測(cè)量系統(tǒng)由低電壓的掃描電子顯微鏡中一個(gè)大的真空室和一個(gè)300毫米x-y定位階段控制的真空激光干涉建立起來的，早在1998年就已經(jīng)出現(xiàn)。散射測(cè)量能夠快速用于直接測(cè)量，但是，它需要先進(jìn)的數(shù)學(xué)建模工具和數(shù)據(jù)評(píng)估系統(tǒng)，以解決其存在的問題，其中的幾何形狀的三維結(jié)構(gòu)是必備的知識(shí)。系統(tǒng)的概念是可變的和通用的，所以，可以執(zhí)行許多不同類型的測(cè)量，例如，經(jīng)典的散射儀，橢偏散射儀等。掃描探針顯微鏡技術(shù)允許直接測(cè)量三維形狀的納米結(jié)構(gòu)，既具有高的橫向和垂直分辨率，也不具有非破壞性。

1.1計(jì)量大范圍顯微鏡

SPM通常有一個(gè)小的掃描范圍內(nèi)，一般為幾十微米。這一方面極大地限制了其進(jìn)一步的應(yīng)用。為了延長(zhǎng)測(cè)量量，以及提高校準(zhǔn)能力，計(jì)量大范圍原子力顯微鏡的出現(xiàn)使測(cè)量體積達(dá)到25mm×25mm×5mm。將待測(cè)量的樣品沿z軸方向放置在2μm的z壓電階段。z壓電階段的延伸是由嵌入的電容式傳感器具有亞納米分辨率進(jìn)行測(cè)量的。機(jī)械地安裝在一個(gè)三維（3D）機(jī)械定位階段的運(yùn)動(dòng)平臺(tái)的z壓電階段，簡(jiǎn)稱為納米測(cè)量機(jī)。NMM的運(yùn)動(dòng)平臺(tái)包括三個(gè)高精度的彼此正交的平面鏡和一個(gè)反射鏡角。三個(gè)嵌入式零差干涉儀是用來測(cè)量運(yùn)動(dòng)平臺(tái)的位置相計(jì)量幀的，分辨率為0.08 nm。自制一種新的原子力顯微鏡頭，被機(jī)械的固定在微晶玻璃柱上。三個(gè)干涉儀的測(cè)量光束的交點(diǎn)處位于懸臂尖端位置。在這種方式，測(cè)量原理得到滿足。在NMM的z壓電階段的詳細(xì)描述中也介紹了其他方面。

1.2層厚度的測(cè)量

涂層是一個(gè)重要的光學(xué)部件的制造過程。光層的厚度和均勻性，需要精確地測(cè)量/控制中。有多種技術(shù)可用于層厚度的測(cè)量，包括光學(xué)顯微鏡，反射計(jì)和橢圓儀。其中，橢偏儀的主要應(yīng)用的方法之一是能夠表征薄膜厚度的單層或復(fù)雜的多層。它可以實(shí)現(xiàn)極高的測(cè)量穩(wěn)定性。然而，它的測(cè)量不確定度大，對(duì)系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生一定的誤差，因此該儀器的校準(zhǔn)是一個(gè)關(guān)鍵問題。

1.3側(cè)壁結(jié)構(gòu)的測(cè)量

光學(xué)結(jié)構(gòu)的側(cè)壁特性，可能會(huì)影響光學(xué)部件的性能。例如，在光波導(dǎo)和菲涅爾透鏡，大型側(cè)壁的粗糙度將導(dǎo)致高光散射造成的損失。側(cè)壁結(jié)構(gòu)的測(cè)量是比較困難的。盡管目前由多種顯微技術(shù)弧測(cè)量微納米結(jié)構(gòu)，但是幾乎所有的技術(shù)在側(cè)壁測(cè)量時(shí)都會(huì)遇到問題。如圖1示例，原子力顯微鏡（AFM）和觸針的探針通常有一個(gè)尖與錐體或圓錐形狀，在圖1（a）中，觸針永遠(yuǎn)不會(huì)靠近側(cè)壁。在光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡下，圖7（b）中由于在側(cè)壁或側(cè)壁之間存在多重反射的反射差導(dǎo)致測(cè)量比較困難。在以往，通常采用破壞性切割來測(cè)量結(jié)構(gòu)的側(cè)壁。

（a）原子顯微鏡和輪廓儀（b）光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡

圖1 傳統(tǒng)測(cè)量技術(shù)在測(cè)量側(cè)壁中的遇到的問題

1.4未來納米結(jié)構(gòu)的三維測(cè)量

雖然大多數(shù)原子力顯微鏡結(jié)構(gòu)提供完美的3D視圖，但它們不是真正的3D測(cè)量?jī)x器，這是由多種因素引起的。首先，幾乎所有的原子力顯微鏡探針具有圓錐形或錐體形狀，具有陡峭的側(cè)壁，這是不能夠測(cè)量三維形狀的結(jié)構(gòu)，如圖1（a）所示。其次，正常的原子力顯微鏡適用于沿z軸的伺服回路保持的前端樣品相互作用常數(shù)。在測(cè)量時(shí)可能會(huì)遇到困難，例如，垂直結(jié)構(gòu)。第三，正常的原子力顯微鏡測(cè)量表面像素平等的橫向距離。

2、形狀計(jì)量

光學(xué)部件的形狀誤差的對(duì)光學(xué)系統(tǒng)的性能有著顯著的影響作用。由于對(duì)光學(xué)系統(tǒng)對(duì)性能要求非常高，也使得光學(xué)部件的幾何量計(jì)量變得越來越有難度。例如，在先進(jìn)的光刻機(jī)或同步反射鏡透鏡的制造中，制造公差變低，甚至下降到納米級(jí)。在這些光學(xué)制造過程中，越來越多的是減少光學(xué)像差和減少光學(xué)元件的數(shù)量，而不是球面透鏡的非球面鏡片強(qiáng)度。

在多種可計(jì)量形式中，光學(xué)干涉是最常用的計(jì)量方法之一。在它的配置中，從測(cè)量表面反射的波陣面與從參考反射鏡反射的波陣面進(jìn)行干涉。波陣面的差異也就是參考和測(cè)量表面的形式之間的差異，通過內(nèi)插的干涉條紋可確定。邁克爾遜干涉儀或菲佐型強(qiáng)麥都比較適用。光學(xué)干涉有諸多的優(yōu)點(diǎn)，如可以結(jié)合而為城鄉(xiāng)對(duì)測(cè)量速度進(jìn)行提高，不確定性低，操作簡(jiǎn)單等。采用2D光學(xué)干涉測(cè)量非球面結(jié)構(gòu)時(shí)，如直接采用計(jì)算機(jī)產(chǎn)生全息圖的剖面是，是一種廣泛使用的儀器，用于測(cè)量光學(xué)零件的輪廓和形式。許多不同種類的傳感器，包括非接觸式光學(xué)傳感器和手寫筆傳感器與干涉輪廓儀相比更加靈活，能夠適用與不同形式的測(cè)量。

3、結(jié)束語

三維測(cè)量技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用過程中不僅保證了光學(xué)產(chǎn)品的質(zhì)量，也為相關(guān)制造過程提供的監(jiān)測(cè)/控制依據(jù)。本文介紹了一些三維測(cè)量的研究，以支持光學(xué)制造。計(jì)量大范圍原子力顯微鏡，真正的3D原子力顯微鏡適用于多功能三維測(cè)量微/納米結(jié)構(gòu)。

參考文獻(xiàn)

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目的：利用激光共聚焦顯微鏡評(píng)價(jià)超聲乳化白內(nèi)障摘除術(shù)后角膜的活體組織學(xué)改變。方法：隨機(jī)選擇中國(guó)醫(yī)科大學(xué)眼科醫(yī)院30例欲行白內(nèi)障摘除手術(shù)的患者進(jìn)行超聲乳化白內(nèi)障摘除術(shù)?；颊哂谑中g(shù)前、術(shù)后1，7，30d；6mo，利用海德堡Retina Tomograph IIIRostock Cornea Module (HRTIII RCM)激光共聚焦顯微鏡對(duì)角膜各層細(xì)胞及神經(jīng)進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。結(jié)果：形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)角膜上皮細(xì)胞和前基質(zhì)細(xì)胞在術(shù)后無明顯改變。角膜基質(zhì)神經(jīng)纖維呈不規(guī)則的節(jié)段狀改變，在術(shù)后第7d最為顯著。中基質(zhì)及后基質(zhì)層的角膜細(xì)胞同術(shù)前相比反射更為明顯。角膜內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)腫脹。結(jié)論：超聲乳化白內(nèi)障摘除手術(shù)對(duì)角膜組織有一定的影響，導(dǎo)致細(xì)胞和組織形態(tài)的改變，但這些改變是可逆的。

【關(guān)鍵詞】 超聲乳化白內(nèi)障手術(shù)；角膜；組織學(xué)

Abstract　AIM:To define the microscopic cornea changes with in vivo laser scanning confocal microscopy after phacoemulsification.METHODS: Thirty eyes were assigned to undergo cataract extraction by ultrasonic phacoemulsification in China Medical University. The morphologies of corneal layer by layer were evaluated in vivo with the Heidelberg Retina Tomograph IIIRostock Cornea Module (HRTIII RCM) confocal microscope pre and postoperation for up to six months.RESULTS: For morphology， some irregular segments of nerve fiber were most pronounced seven days postoperation. Stroma keratocytes were obvious compared with the preoperative condition. Corneal endothelial cells become obviously swollen in both the cytoplasm and nucleus. At six months， corneal cell and nerve morphology recovered to normal.CONCLUSION: Microstructural abnormalities were identified at each level of the cornea recovery process after phacoemulsification and lead to corneal morphology changes， but these could be recovered to normal in six months.



KEYWORDS: phacoemulsification; cornea; histology

0　引言

超聲乳化白內(nèi)障吸除術(shù)最主要的優(yōu)點(diǎn)是減小手術(shù)切口、減輕組織損傷、使患者視力更快恢復(fù)?，F(xiàn)代白內(nèi)障手術(shù)技術(shù)的進(jìn)步將手術(shù)引起的散光和炎癥降到最低，術(shù)后視力恢復(fù)快［1］。而角膜水腫成為影響術(shù)后視力恢復(fù)的主要因素。在過去圍繞術(shù)后角膜并發(fā)癥的研究多集中在角膜內(nèi)皮失代償和觀察內(nèi)皮細(xì)胞改變上（例如細(xì)胞數(shù)、密度和/或形態(tài)）［24］。目前還沒有活體角膜各層組織改變的觀察。新一代海德堡激光共焦顯微鏡的角膜模塊，可以提供高分辨率的眼表組織圖像，使我們能夠活體動(dòng)態(tài)觀察角膜組織改變和角膜界面的形態(tài)［5］，分析超聲乳化白內(nèi)障吸除術(shù)后角膜組織的改變。我們利用該設(shè)備觀察超聲乳化白內(nèi)障摘除術(shù)后6mo內(nèi)角膜的組織學(xué)改變，包括：角膜上皮細(xì)胞、角膜上皮下神經(jīng)纖維、角膜基質(zhì)神經(jīng)纖維束、角膜基質(zhì)細(xì)胞、角膜內(nèi)皮細(xì)胞等。

1　對(duì)象和方法

1.1　對(duì)象

我們隨機(jī)選取200609/200704我院行年齡相關(guān)性白內(nèi)障吸除術(shù)的患者25例30眼，男13例，女12例，平均年齡57.8（52±6.7）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：散瞳后瞳孔≥7mm，圖1 A：術(shù)前角膜上皮細(xì)胞為大小不一的多角形細(xì)胞鑲嵌在一起，部分細(xì)胞可見細(xì)胞核；B：術(shù)后第1d部分患者出現(xiàn)片狀的翼狀細(xì)胞邊界消失；C：術(shù)前角膜神經(jīng)纖維；D：術(shù)后第7d神經(jīng)纖維呈不規(guī)則的節(jié)段狀；E：正常角膜前彈力層的朗格漢斯細(xì)胞；F：手術(shù)后朗格漢斯細(xì)胞形態(tài)沒有變化；G：術(shù)前基質(zhì)層的神經(jīng)纖維；H：術(shù)后1mo兩例患者出現(xiàn)基質(zhì)神經(jīng)不規(guī)則彎曲和串珠狀改變。

角膜內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)＞2000 個(gè)/mm2。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有眼部其他疾病或影響角膜恢復(fù)的全身疾患，如：角膜病變、青光眼、葡萄膜炎、干眼或有內(nèi)眼手術(shù)史、系統(tǒng)疾病如：糖尿病。

1.2　方法

常規(guī)術(shù)前檢查，包括視力檢查，雙眼裸眼遠(yuǎn)近視力(UCVA)和最佳矯正遠(yuǎn)近視力(BCVA)；裂隙燈顯微鏡檢查角膜、前房、晶狀體混濁程度；眼底檢查；眼壓；角膜內(nèi)皮細(xì)胞檢查；B超；屈光狀態(tài)(自動(dòng)驗(yàn)光儀等)及生物學(xué)測(cè)量(A超、IOL Master等)測(cè)量眼軸長(zhǎng)度等。全部手術(shù)由同一位有經(jīng)驗(yàn)的術(shù)者進(jìn)行。使用Infiniti超聲乳化儀(Alcon， USA)，全部患者術(shù)前接受5g/L鹽酸丙美卡因滴眼液(Alcaine， Alcon， USA)表面麻醉，3.0mm透明角膜切口，3g/L透明質(zhì)酸鈉與40g/L硫酸軟骨素(Viscoat)（Alcon， USA）保護(hù)角膜內(nèi)皮。行5.5～6.0mm連續(xù)環(huán)形撕囊，白內(nèi)障超聲乳化吸除，負(fù)壓500mmHg、流量35mL/min，瓶高95cm。囊內(nèi)植入Acrysof SN60AT或SA60AT人工晶狀體(Alcon， USA)，I/A吸除黏彈劑。術(shù)后自第1d起給予典必殊滴眼液3次/眼，療程4wk，全部患者無術(shù)中或術(shù)后并發(fā)癥。利用最新的HRT Ⅲ/RCM共焦顯微鏡檢查全部患者，HRT Ⅲ縱向分辨率約1μm，可以實(shí)現(xiàn)活體角膜各層的圖2 A：角膜基質(zhì)；B：術(shù)后1mo內(nèi)，前基質(zhì)層細(xì)胞形態(tài)未見明顯變化；C：術(shù)前的中基質(zhì)層細(xì)胞；D：手術(shù)后角膜中基質(zhì)細(xì)胞形態(tài)無明顯改變；E：手術(shù)前后層基質(zhì)細(xì)胞；F：手術(shù)后后基質(zhì)細(xì)胞層細(xì)胞反射明顯且細(xì)胞明顯腫脹；G：角膜內(nèi)皮細(xì)胞；H：術(shù)后1mo的角膜內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)明顯下降，細(xì)胞明顯腫脹，失去六角形外形而變得不規(guī)則，細(xì)胞核清晰可見。

研究［5，6］。HRT Ⅲ/RCM的激光光源使用波長(zhǎng)670nm的二極管激光。進(jìn)行活體共焦顯微鏡檢查前，于結(jié)膜囊下穹窿部滴1滴5g/L鹽酸丙美卡因滴眼液和1滴凝膠型人工淚液2g/L卡波姆（Bausch & Lomb， US）。檢查在矢狀軸進(jìn)行，因此檢查時(shí)，能夠精確顯示角膜各層結(jié)構(gòu)。對(duì)全部患者進(jìn)行中央角膜各層采集，每個(gè)患者在同一檢查層面至少采集5張共焦顯微鏡圖片。每眼的檢查時(shí)間

2　結(jié)果

2.1　角膜上皮

術(shù)后1mo中央角膜上皮形態(tài)無明顯改變。術(shù)前角膜上皮細(xì)胞為大小不一的多角形細(xì)胞鑲嵌在一起，部分細(xì)胞可見細(xì)胞核（圖1A）。有8例在術(shù)后第1d出現(xiàn)片狀的翼狀細(xì)胞邊界消失（圖1B），在第3d恢復(fù)。

2.2　角膜神經(jīng)纖維

角膜神經(jīng)纖維位于前彈力層和基底上皮細(xì)胞之間。術(shù)前可見角膜神經(jīng)呈清晰的、反射均一的線狀結(jié)構(gòu)。局部還觀察到一些樹枝狀或細(xì)小神經(jīng)纖維束(圖1C)。手術(shù)后神經(jīng)纖維呈不規(guī)則的節(jié)段狀，于術(shù)后第7d最明顯(圖1D)。部分神經(jīng)纖維出現(xiàn)異常分支，斷續(xù)排列，主干神經(jīng)纖維增粗、彎曲，反射強(qiáng)弱不均。術(shù)后30d尚未恢復(fù)，于術(shù)后6mo形態(tài)恢復(fù)正常。

2.3　前彈力層和朗格漢斯細(xì)胞

在正常角膜，前彈力層為無定形的均一的間質(zhì)層。Patel和McGhee研究發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)于前彈力層的細(xì)胞稱為朗格漢斯細(xì)胞［6］。本研究觀察到手術(shù)前朗格漢斯細(xì)胞表現(xiàn)為亮的細(xì)胞微粒和無突起的細(xì)胞體，或細(xì)胞樹突（圖1E）。手術(shù)后細(xì)胞形態(tài)沒有變化（圖1F）。

2.4　角膜基質(zhì)層的神經(jīng)纖維

基質(zhì)層的神經(jīng)纖維位于前部和中間基質(zhì)層之間。術(shù)前基質(zhì)層的神經(jīng)纖維為粗的、高反射、直線性結(jié)構(gòu)（圖1G）。術(shù)后1mo，有兩例患者出現(xiàn)基質(zhì)神經(jīng)不規(guī)則彎曲和串珠狀改變（圖1H）。

2.5　角膜基質(zhì)

前基質(zhì)細(xì)胞界限清晰、高反射、細(xì)胞核呈卵圓形，位于不同位置 （圖2A）。在術(shù)后1mo內(nèi)，前基質(zhì)層細(xì)胞形態(tài)未見明顯變化（圖2B）。中基質(zhì)層細(xì)胞為規(guī)則的橢圓形，較前基質(zhì)層細(xì)胞密度低（圖2C）。手術(shù)后角膜中基質(zhì)細(xì)胞形態(tài)無明顯改變，但細(xì)胞較術(shù)前反射高（圖2D）。手術(shù)前，后層基質(zhì)細(xì)胞較前基質(zhì)層細(xì)胞圓（圖2E），手術(shù)后，后基質(zhì)細(xì)胞層細(xì)胞反射明顯，且細(xì)胞明顯腫脹（圖2F），至術(shù)后6mo恢復(fù)。

2.6　角膜內(nèi)皮細(xì)胞

術(shù)前角膜內(nèi)皮細(xì)胞呈規(guī)則排列的六角形細(xì)胞，細(xì)胞體高反射、細(xì)胞邊界低反射，細(xì)胞核不明顯（圖2G）。術(shù)后角膜內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)明顯下降，細(xì)胞明顯腫脹，失去六角形外形而變得不規(guī)則，細(xì)胞核清晰可見，至術(shù)后1mo未恢復(fù)（圖2H），手術(shù)后6mo細(xì)胞形態(tài)恢復(fù)正常，但仍然可見細(xì)胞核。

3　討論

與白內(nèi)障囊外摘除手術(shù)（ECCE）相比，超聲乳化白內(nèi)障吸除術(shù)最主要的優(yōu)點(diǎn)是減輕組織損傷、使視力更快恢復(fù)，但是仍然存在術(shù)后并發(fā)癥。研究表明白內(nèi)障手術(shù)后內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)降低和術(shù)后角膜水腫與超聲乳化白內(nèi)障吸除術(shù)后角膜內(nèi)皮細(xì)胞的丟失有著密切的關(guān)系［7］。目前對(duì)術(shù)后角膜并發(fā)癥的研究集中在角膜內(nèi)皮細(xì)胞丟失和角膜厚度方面，其檢測(cè)設(shè)備有角膜厚度測(cè)量?jī)x、非接觸式角膜內(nèi)皮鏡等，但觀察活體角膜各層修復(fù)過程的檢查方法十分有限。最近活體激光共焦顯微鏡開始在實(shí)驗(yàn)室和臨床應(yīng)用。它可以實(shí)現(xiàn)對(duì)角膜顯微結(jié)構(gòu)更詳細(xì)的逐層觀察，能夠提供眼表的高分辨率圖像，以供觀察角膜組織的改變。

我們利用活體激光共聚焦顯微鏡觀察了超聲乳化白內(nèi)障吸除術(shù)后角膜各層的改變。至術(shù)后1mo，大部分病例與術(shù)前比較，中央角膜上皮細(xì)胞的形態(tài)無明顯變化。部分病例表現(xiàn)為術(shù)后第1d翼狀細(xì)胞邊界不清，3d后恢復(fù)。在角膜神經(jīng)方面，我們觀察到一些纖維節(jié)段不規(guī)則增粗。與術(shù)前比較，一些神經(jīng)纖維出現(xiàn)中斷、更加迂曲等改變。角膜基質(zhì)層可以觀察到術(shù)后角膜基質(zhì)細(xì)胞水腫和細(xì)胞密度降低，這種現(xiàn)象多出現(xiàn)于角膜后基質(zhì)層。對(duì)于角膜內(nèi)皮細(xì)胞，與術(shù)前比較出現(xiàn)顯著的內(nèi)皮細(xì)胞密度減低，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后內(nèi)皮細(xì)胞及細(xì)胞核水腫明顯，至術(shù)后6mo細(xì)胞形態(tài)才恢復(fù)正常。以上各層角膜組織的形態(tài)改變?cè)谛g(shù)后6mo的復(fù)查中均恢復(fù)了正常。

根據(jù)對(duì)術(shù)后角膜情況的觀察，我們將白內(nèi)障手術(shù)中可能影響角膜的因素歸納為以下4類：（1）對(duì)角膜內(nèi)皮的直接機(jī)械損傷包括：切口和手術(shù)過程中晶狀體碎屑、器械或人工晶狀體（IOL）接觸角膜；（2）灌注液的影響（化學(xué)成分、流速、湍流、滲透壓）［810］；（3）超聲乳化能夠在前房產(chǎn)生羥基，引起組織損傷；（4）針頭在切口內(nèi)前后運(yùn)動(dòng)，金屬針頭振蕩壓迫袖套，使溫度升高引起熱損傷。

盡管超聲乳化白內(nèi)障摘除術(shù)后利用激光共聚焦顯微鏡可以觀察到角膜組織在顯微結(jié)構(gòu)上存在一定的異常改變，但這些損傷在術(shù)后很快就能恢復(fù)。將來對(duì)于各層細(xì)胞還應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行定量分析，以指導(dǎo)臨床醫(yī)生對(duì)白內(nèi)障術(shù)后角膜恢復(fù)過程的全面了解。

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篇5

與傳統(tǒng)尿紅細(xì)胞檢測(cè)方法相比， HT-2000尿沉渣分析儀具有檢測(cè)速度快、精密度高以及重復(fù)性好等顯著優(yōu)勢(shì)， 能夠有效緩解因工作人員短缺而無菌尿液標(biāo)本數(shù)量大所帶來的工作壓力， 解決了尿沉渣分析無法標(biāo)準(zhǔn)化的重大難題 。均一性與非均一性尿紅細(xì)胞檢測(cè)能夠?qū)δI性與非腎性血尿診斷產(chǎn)生重要的影響 。本次研究收集2014年5月～2015年5月送檢住院患者的無菌尿液3000份， 使用HT-2000尿沉渣分析儀檢測(cè)尿紅細(xì)胞時(shí)結(jié)合光學(xué)顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)， 有效提高了檢測(cè)準(zhǔn)確性， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取遼寧省義縣人民醫(yī)院2014年5月～ 2015年5月送檢住院患者的無菌尿液3000份， 標(biāo)本于采集后2 h內(nèi)完成。儀器與試劑：HT-2000尿沉渣分析儀、質(zhì)控品與配套試劑， 普通光學(xué)顯微鏡， 刻度離心管與水平離心機(jī)。

1. 2 方法 將收集到的無菌尿液樣本進(jìn)行混合， 攪勻后分裝入兩支管中， 每管各10 ml， 采用雙盲法進(jìn)行操作。其中一管采用HT-2000尿沉渣分析儀進(jìn)行檢測(cè)， 另一管首先1500 r/min， 離心5 min， 再棄掉上清液， 沉渣后使用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)， 2 h內(nèi)完成檢測(cè)。

1. 3 判斷標(biāo)準(zhǔn) HT-2000尿沉渣分析儀標(biāo)準(zhǔn)：紅細(xì)胞每微升>24個(gè)， 則為檢出陽性。光學(xué)顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)：每高倍視野紅細(xì)胞>3個(gè)， 反之則是陰性結(jié)果， 對(duì)兩種方法的紅細(xì)胞陽性率與HT-2000尿沉渣分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞的假陽性率進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié)果

3000份無菌尿液標(biāo)本中， HT-2000尿沉渣分析儀檢測(cè)結(jié)果顯示陽性663例， 陽性率為22.1%；光學(xué)顯微鏡檢測(cè)結(jié)果顯示沉渣分析儀無漏診， 僅有誤診， 陽性524例， 假陽性139例， 陽性率為17.5%， 假陽性率為5.6%。139例假陽性無菌尿液樣本中， 有酵母菌11例， 占7.9%， 有細(xì)菌56例， 占40.3%， 結(jié)晶68例， 占48.9%， 其他因素4例， 占2.9%。見表1。

3 討論

尿沉渣就是尿液中的有形狀成分， 是原尿經(jīng)過離心后， 形成的沉渣， 是尿液有形成分質(zhì)和量的組合， 包括細(xì)胞、管形、結(jié)晶、細(xì)菌、等各種有形成分， 因此， 尿沉淀檢測(cè)可以準(zhǔn)確判定泌尿系統(tǒng)疾病的具體發(fā)病部位， 還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病診斷、鑒別診斷與預(yù)后的判斷。此外， 應(yīng)注意的是患者采尿后應(yīng)該迅速地進(jìn)行檢測(cè)， 否則放置時(shí)間過長(zhǎng)， 如果是低張尿可出現(xiàn)溶血；如果是高張尿有可能出現(xiàn)脫水而使紅細(xì)胞形狀發(fā)生變化；如果是堿性尿可使血細(xì)胞成分和管型崩壞， 影響檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性 。

尿沉淀檢測(cè)可以發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室檢查過程中難以檢測(cè)到的異常情況[1-3]。因?yàn)槟虺恋頇z測(cè)有著非常高的準(zhǔn)確性， 所以在臨床中規(guī)范尿沉淀檢測(cè)的操作與檢測(cè)是十分必要的。尿沉淀檢測(cè)中最為重要的指標(biāo)是尿紅細(xì)胞：在腎臟病診斷、病情發(fā)展以及預(yù)后判斷中， 尿紅細(xì)胞檢測(cè)有著非常重要的意義， 對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行定量分析是對(duì)其臨床意義進(jìn)行研究的關(guān)鍵所在[4-6]。HT-2000尿沉渣分析儀對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)， 結(jié)果顯示假陽性比較少， 在用于標(biāo)本量較大的實(shí)驗(yàn)室中時(shí)能夠有效提升工作效率。

當(dāng)前， 尿沉淀分析檢測(cè)采用的主要方法有干化學(xué)法、顯微鏡檢測(cè)法以及流式尿液檢測(cè)法等。HT-2000尿沉渣分析儀在檢測(cè)不同項(xiàng)目采用不同的雙波長(zhǎng)測(cè)定試紙塊顏色變化， 以鑒別尿液樣本中的有形成分。因?yàn)镠T-2000尿沉渣分析儀具有圖形直觀、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果值穩(wěn)定以及檢測(cè)速度快等特點(diǎn)， 所以在臨床中的應(yīng)用非常廣泛。

HT-2000尿沉渣分析儀的主要工作機(jī)理是采用冷光源積分球檢測(cè)技術(shù)， 報(bào)告結(jié)晶、上皮細(xì)胞、細(xì)菌、紅細(xì)胞與白細(xì)胞等有形成分。但是尿液中的有形成分較為相似， 且尿液中成分非常復(fù)雜， 各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)與檢測(cè)項(xiàng)目中因染色、雜質(zhì)等因素有存在一定相似性。此外HT-2000尿沉渣分析儀在檢測(cè)過程中會(huì)受到一定限制， 從而使檢測(cè)結(jié)果有一定的偏差。比如UF-100尿沉渣分析儀就無法有效識(shí)別藥物結(jié)晶成分、脂肪滴以及腫瘤細(xì)胞等物質(zhì)， 同時(shí)也無法識(shí)別紅細(xì)胞的病理類型及形態(tài)[7， 8]。所以， 如果患者尿液中存有大量細(xì)菌成分或結(jié)晶成分時(shí)， 會(huì)影響到紅細(xì)胞的測(cè)定， 導(dǎo)致假陽性結(jié)果的發(fā)生， 進(jìn)而影響到患者疾病的診斷。

本次研究收集2014年5月～2015年5月送檢住院患者的無菌尿液3000份， HT-2000尿沉渣分析儀檢測(cè)結(jié)果顯示陽性663例， 陽性率為22.1%；光學(xué)顯微鏡檢測(cè)結(jié)果顯示沉渣分析儀無漏診， 僅有誤診， 陽性524例， 假陽性139例， 陽性率為17.5%， 假陽性率為5.6%。139例假陽性無菌尿液樣本中， 有酵母菌11例， 占7.9%， 有細(xì)菌56例， 占40.3%， 結(jié)晶68例， 占48.9%， 其他因素4例， 占2.9%。對(duì)HT-2000尿沉渣分析儀檢測(cè)紅細(xì)胞顯示為陽性， 需要再接受鏡檢復(fù)查， 避免發(fā)生臨床誤診。諸多學(xué)者與專家也曾建議， 對(duì)尿液進(jìn)行分析時(shí)， 最好采用干化學(xué)法聯(lián)合尿沉渣自動(dòng)分析儀共同進(jìn)行篩查， 并對(duì)尿沉渣全自動(dòng)分析儀提示類酵母菌、項(xiàng)目結(jié)晶、病例管型陽性以及細(xì)菌計(jì)數(shù)過高的標(biāo)本和腎病患者的標(biāo)本， 同時(shí)結(jié)合顯微鏡檢測(cè)， 能夠有效提升尿液標(biāo)本的檢驗(yàn)質(zhì)量 。

綜上所述， 使用HT-2000尿沉渣分析儀檢測(cè)尿紅細(xì)胞時(shí)結(jié)合光學(xué)顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)， 能夠有效提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性， 值得在臨床中進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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1.1金剛石自支撐膜的制備本實(shí)驗(yàn)采用自制的30kW直流電弧等離子體噴射設(shè)備。襯底為直徑65mm的鉬片，沉積前先用金剛石粉對(duì)鉬片表面進(jìn)行研磨處理提高形核密度，然后用酒精超聲清洗。沉積條件為：Ar/H2/C3H8混合氣體,其中C3H8的體積分?jǐn)?shù)1%，輸入功率17kW，反應(yīng)壓力4.5kPa，沉積時(shí)間62h，薄膜沉積厚度700μm~800μm。采用機(jī)械方法對(duì)金剛石薄膜形核面和生長(zhǎng)面進(jìn)行雙面拋光，拋光后薄膜厚度在450μm左右，薄膜表面粗糙度Ra＜30nm。

1.2金剛石薄膜“黑色組織”表征

利用光學(xué)顯微鏡對(duì)拋光前后的膜進(jìn)行透射光、反射光以及側(cè)入射光模式的觀察，利用X射線光電子能譜（XPS）和拉曼光譜（Raman）對(duì)黑色組織成分進(jìn)行表征。

2結(jié)果與討論

圖1是樣品拋光前后的光學(xué)顯微鏡對(duì)比圖。圖A、B是拋光前在高倍光學(xué)顯微鏡下觀察某特定晶粒的顯微圖，由于生長(zhǎng)面晶粒尺寸較大，光學(xué)顯微鏡景深很小，所以光學(xué)顯微鏡視場(chǎng)下除了焦平面，其余視場(chǎng)成像模糊。A圖是反射光成像，中間最明亮的大三角形即為（111）結(jié)晶面。晶面表面不是完全平滑的，有很多缺陷，中間表面“斷裂”部分尤其明顯。在反射光下，“斷裂”部分表現(xiàn)為黑色的粗線，其余表面相對(duì)平滑，反射光下黑色區(qū)域不明顯。當(dāng)采用透射光時(shí)，（111）結(jié)晶面除原反射光下顯示的黑色區(qū)域外，黑色區(qū)域面積增大了。該區(qū)域邊緣模糊，深淺不一，占了晶面的大部分區(qū)域，但是這些黑色區(qū)域的范圍都在（111）晶面的晶界內(nèi)部，這些增加的黑影即為晶粒內(nèi)部“黑色缺陷”在晶粒表面形成的投影，“黑色缺陷”降低了薄膜的光學(xué)透過率。陷主要有兩種顯示形式：一種為團(tuán)絮狀黑斑。這種團(tuán)絮狀黑斑在視場(chǎng)中有兩塊，且它們集中分布區(qū)域的形狀與晶粒輪廓大致吻合，對(duì)比圖B，可以推斷圖中上下兩個(gè)大黑斑處于兩個(gè)大晶粒內(nèi)部，這兩個(gè)晶粒中的黑色缺陷明顯多于其他區(qū)域。很多文獻(xiàn)報(bào)道[9~11]，（111）面容易出現(xiàn)位錯(cuò)、孿晶等缺陷，這和圖1中我們的觀察結(jié)果一致。而且在拋光的過程中，（111）面很容易出現(xiàn)一些凹坑，這也說明（111）面存在一些缺陷導(dǎo)致晶粒在拋光過程中會(huì)出現(xiàn)“局部破碎”現(xiàn)象。這些證據(jù)都表明晶粒內(nèi)部的一些缺陷影響了光的透射，形成了黑色缺陷，從而降低了金剛石膜的光學(xué)性能。

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目的：探討利用熒光顯微技術(shù)對(duì)黎族藥物大青進(jìn)行顯微鑒別的可行性，并為建立大青藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。方法：利用研究級(jí)正置熒光顯微鏡對(duì)未經(jīng)試劑處理的大青莖粉末和新鮮葉片進(jìn)行觀察，并拍照。結(jié)果：大青莖粉末中主要含有3種類型的纖維，還含有木栓細(xì)胞、網(wǎng)狀導(dǎo)管、方晶、腺毛和非腺毛、鐘乳體，且圖像清晰。更特別的是在表皮細(xì)胞中還含有銅錢狀的物質(zhì)及一圈熒光存在于皮層中。在葉片下表皮中氣孔數(shù)較多，角質(zhì)層細(xì)胞波紋狀、還有鐘乳體、2細(xì)胞的腺毛、非腺毛等結(jié)構(gòu)。結(jié)論：利用熒光顯微鏡鑒別生藥粉末，操作簡(jiǎn)便，圖像直觀，值得開發(fā)利用。在葉片鑒別方面角質(zhì)層、腺毛等結(jié)構(gòu)清晰可辯，可代替掃描電子顯微鏡，但是還需結(jié)合普通光學(xué)顯微鏡來確定氣孔的類型。

【關(guān)鍵詞】 熒光顯微鏡；大青；黎族藥物；顯微鑒定

［ABSTRACT］ Objective: To explore the feasibility of fluorescence microscopic technique in the identification of Clerodendrum cyrtophyllum used in Li medicine and to collect scientific evidence for the development of its quality standards. Methods： The stem powder without reagent and fresh leaves of Clerodendrum cyrtophyllum were observed and photographed under fluorescent microscopy. Results：Under fluorescent microscopy， it was clearly shown that stem powder of Clerodendrum cyrtophyllum was mainly consisted of 3 types of fiber， cork cells， mesh tube， square crystal， glandular， non glandular and cystolith. More specifically， there were coinlike substances in the epidermis， a fluorescent ring in the cortex. Many stomata in the lower epidermis with ripplelike cuticle cells， cystolith， 2 cells glandular hairs， nonglandular hairs were shown in the fresh leaves images. Conclusions：It is feasible to use fluorescence microscopic technique in the identification of stem powder of Clerodendrum cyrtophyllum and the cuticle cells and glandular hairs in fresh leaves， but light microscope is also needed for the identification of stomata types.

［KEY WORDS］ Fluorescence microscopy; Clerodendrum cyrtophyllum; Li medicine; Microscopic identification

黎族藥物大青來源于馬鞭草科植物大青Clerodendrum cyrtophyllum Turcz.， 其根、莖、葉入藥，夏秋季采收，洗凈，鮮用。長(zhǎng)期以來在華南地區(qū)常代替板藍(lán)根使用［1-3］。其黎藥名為雅楓能，莖葉入藥，具有清熱解毒的功效［4］。前人已對(duì)其根、莖的橫切片顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，但是對(duì)莖粉末結(jié)構(gòu)的研究未見報(bào)道，在葉結(jié)構(gòu)方面，也未見有研究報(bào)道［5］。另外，以往研究均利用普通光學(xué)顯微鏡，均需用試劑處理，才能觀察，并需一定的繪圖機(jī)能。在熒光技術(shù)方面，以往的熒光分析技術(shù)需將有效成分用試劑提取后才能在熒光分光光度計(jì)下測(cè)量其熒光光譜［6，7］，操作較麻煩。在葉片研究方面有報(bào)道認(rèn)為利用熒光顯微鏡可觀察氣孔形狀，但不知對(duì)葉片其他結(jié)構(gòu)形態(tài)是否有效［8］，因此，在本研究中通過嘗試對(duì)未經(jīng)試劑處理的生藥粉末和新鮮葉片在熒光顯微鏡下，進(jìn)行觀察，以探討利用熒光顯微技術(shù)進(jìn)行生藥顯微鑒定的可行性，為開拓一種簡(jiǎn)便有效的顯微鑒定方法，同時(shí)為黎族藥物大青質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立及開發(fā)黎藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

馬鞭草科植物大青Clerodendrum cyrtophyllum Turcz.， 從海南醫(yī)學(xué)院黎族藥用植物觀賞園采集，將其莖去掉葉片后曬干粉碎，取其粉末作為試驗(yàn)材料。另外在實(shí)驗(yàn)前夕取成熟大青葉片一塊，沖洗干凈晾干備用。所用儀器為研究級(jí)正置熒光顯微鏡（Olympus BX51）。

1.2 方法

在研究級(jí)正置熒光顯微鏡（Olympus BX51）的自然光下找到大青莖粉末觀察目標(biāo)，再關(guān)上光柵，在熒光下觀察，并拍照。從備用大青葉片中間剪取2mm×2mm的葉塊，背面朝上置于載玻片蓋上蓋玻片后，同樣先在自然光下找到觀察目標(biāo)，再關(guān)上光柵，在熒光下觀察，并拍照。

2 結(jié)果

2.1 大青莖粉末觀察結(jié)果

粉末淡黃色，含有的纖維主要有3種，即X形，L形和分叉狀等纖維（圖1A～C），木栓細(xì)胞表面觀四邊形，排列較整齊（圖1D），晶鞘纖維含量豐富，里面同樣含有很多數(shù)量的方晶（圖1E）。導(dǎo)管多破碎，多為網(wǎng)紋導(dǎo)管（圖1F～G），在粉末中含有鐘乳體、石細(xì)胞（圖1H～I(xiàn)），在木部薄壁細(xì)胞可看到一圈綠色的熒光，很快消失。在粉末中含有一定數(shù)量的非腺毛和腺毛（圖1J～K），值得注意的是在表皮細(xì)胞中還有許多銅錢狀的分泌組織（圖1L）。

2.2 大青新鮮葉觀察結(jié)果

大青葉下表皮淺綠色，在熒光顯微鏡下其角質(zhì)層細(xì)胞垂周壁波狀或深波狀彎曲（圖1M），在葉表皮中可以看到存在鐘乳體（圖1N），單位面積上氣孔數(shù)量較多，同時(shí)也存在較多2細(xì)胞的腺毛，及少量非腺毛（圖1O）。

3 討論

3.1 大青莖粉末結(jié)構(gòu)與大青莖橫切片結(jié)構(gòu)比較

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［3］， 大青莖（徑約5mm）之橫切面，最外緣表皮細(xì)胞，散見非腺毛；皮層韌皮纖維與石細(xì)胞，多個(gè)連生，排列成環(huán)，強(qiáng)木化，形成層，2～3層，細(xì)胞小，呈類長(zhǎng)方形或扁長(zhǎng)方形。木質(zhì)部，由導(dǎo)管、木部薄壁細(xì)胞、髓線所組成，導(dǎo)管單個(gè)或2～4個(gè)連生，主要為網(wǎng)紋導(dǎo)管；髓線細(xì)胞呈類長(zhǎng)方形、類方形及扁長(zhǎng)方形；木部薄壁細(xì)胞，與導(dǎo)管伴生，細(xì)胞呈類長(zhǎng)方形、類方形及扁長(zhǎng)方形。中央為髓部，散見石細(xì)胞及草酸鈣方晶。

本組研究中，大青粉末除含有上述非腺毛、石細(xì)胞、方晶、導(dǎo)管、纖維外還具有少數(shù)腺毛和鐘乳體，而鐘乳體是馬鞭草科植物的一個(gè)顯著特征。另外纖維的種類也較豐富，因此粉末研究是生藥顯微研究中不可缺少的內(nèi)容。由于大青在華南地區(qū)分布比較廣泛，但不同地區(qū)其有效成分的含量有所不同，其有效成分的含量高低直接影響其治療效果，而在熒光顯微鏡下可在木部薄壁細(xì)胞觀察到一圈顯著的綠色熒光，這可能是大青莖有效成分的存在部位，根據(jù)其熒光強(qiáng)度的不同可比較來源于不同地區(qū)的大青莖質(zhì)量的優(yōu)劣。

3.2 不同顯微鏡觀察大青莖粉末結(jié)構(gòu)效果的比較

以往對(duì)生藥粉末形態(tài)觀察一般先采用水合氯醛透化，稀甘油裝片后再在普通光學(xué)顯微鏡觀察，由于受稀甘油等試劑的影響，觀察效果不是較理想，且觀察的結(jié)構(gòu)形態(tài)一般平面狀態(tài)；但是在熒光顯微鏡下操作步驟簡(jiǎn)便，生藥不須試劑處理，可直接用粉末裝片觀察，由于無甘油等試劑干擾影響，其視野潔靜，結(jié)構(gòu)層次感較強(qiáng)。如所觀察的晶纖維、木栓細(xì)胞等，因此，整體效果要優(yōu)于普通光學(xué)顯微鏡。更重要的是，在熒光顯微鏡下，有些結(jié)構(gòu)可發(fā)出熒光，如大青莖粉末含有的不同纖維發(fā)出的熒光及亮度不一樣，為我們鑒別不同種類的生藥提供了重要的依據(jù)。

3.3 不同顯微鏡觀察大青新鮮葉結(jié)構(gòu)效果的比較

在熒光顯微鏡下觀察新鮮大青葉片的下表皮，能夠清晰地觀察到氣孔的數(shù)量及腺毛、非腺毛，其次在葉片上觀察到其存在著一定數(shù)量的鐘乳體，立體狀的波紋狀角質(zhì)層細(xì)胞也很容易觀察，另外可清晰地看到氣孔的開合狀態(tài)，在一定程度上利用熒光顯微鏡可代替掃描電子顯微鏡觀察上述葉片結(jié)構(gòu)。關(guān)于氣孔類型，已有的關(guān)于馬鞭草科氣孔的觀察研究通過解離染色方法證明該科中氣孔類型較為豐富，有直軸式、平周式、不定式等［5］，但在熒光顯微鏡下葉片氣孔的類型不好判別，因此其有一定缺陷，而據(jù)我們?cè)诠鈱W(xué)顯微鏡下將大青葉下表皮撕裂后加蒸餾水后觀察，大青葉氣孔類型很容易就能被判斷為無規(guī)則形，因此判別葉片氣孔的類型還需利用將下表皮撕裂或解離后等方法再在普通光學(xué)顯微鏡觀察才方便。

近年來，隨著新技術(shù)的不斷涌現(xiàn)，迅速地推動(dòng)了中藥或生藥鑒定的發(fā)展［9，10］，關(guān)于生藥顯微鑒別儀器，常見的有普通光學(xué)顯微鏡、偏振光顯微鏡、掃描電子顯微鏡等，利用熒光顯微鏡進(jìn)行化學(xué)成分組織定位也有報(bào)道［11］，但最常見的儀器是光學(xué)顯微鏡，在鑒別生藥方面熒光顯微鏡的使用還未見報(bào)道。我們利用熒光顯微鏡觀察黎族藥物大青莖粉末和新鮮葉片顯微構(gòu)造是一次成功的嘗試，它為生藥顯微鑒定開拓了一條新的途徑，且操作簡(jiǎn)便，無須任何試劑處理，保留了生藥的原樣，圖像更加直觀、清晰，值得深入研究。但也需要注意，有些部位熒光消失較快，需快速觀察。本組資料只探討了定性實(shí)驗(yàn)問題，其他涉及到如何對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行定量等問題還需繼續(xù)探討，但是至少我們知道化學(xué)成分存在的部位，這為我們繼續(xù)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)提供了契機(jī)。由于本次研究材料中無淀粉粒結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)在熒光顯微鏡下效果如何？有待下次在其他材料中研究。

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中圖分類號(hào) TH7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1674-6708（2016）166-0148-02

20世紀(jì)80年代以來，我國(guó)光學(xué)顯微鏡的設(shè)計(jì)發(fā)生了很大的進(jìn)展，在其制作上，越來越注重實(shí)用性。為了改進(jìn)光學(xué)顯微鏡的多功能方面，采用組合方式的裝配設(shè)計(jì)集普通光鏡加相差、暗視野、熒光、DIC、攝影裝置于一體，使光學(xué)顯微鏡在使用中操作方便且靈活[1]。倒置顯微鏡與此原理相同，也是結(jié)合其他技術(shù)達(dá)到使用功能的目的，根據(jù)倒置顯微鏡的用途可以分為生物倒置顯微鏡、偏光倒置顯微鏡、金相倒置顯微鏡、熒光倒置顯微鏡等種類，從而在諸多領(lǐng)域被廣泛使用。根據(jù)其使用功能特點(diǎn)，我們可以看出倒置顯微鏡技術(shù)具有極其寬闊的發(fā)展前景。

1 倒置顯微鏡技術(shù)的原理和具體操作

1.1 倒置顯微鏡技術(shù)的結(jié)構(gòu)原理

倒置顯微鏡的結(jié)構(gòu)主要由機(jī)械、光學(xué)和照明3個(gè)部分組成，每部分的功能組成都不相同，接下來我們將對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)介紹。

首先，在機(jī)械部分，與普通光學(xué)顯微鏡相似，主要有鏡座、鏡臂、觀察鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)以及調(diào)節(jié)器（包括粗螺旋和細(xì)螺旋）組成，在倒置顯微鏡中有著不用的功能作用，例如，鏡座是用以支持整個(gè)鏡體的一個(gè)底座；鏡臂是在取放顯微鏡的時(shí)候用來手握的部位；物鏡轉(zhuǎn)換器是可以調(diào)換不同倍數(shù)物鏡的結(jié)構(gòu)；載物臺(tái)用以放置玻片標(biāo)本；調(diào)節(jié)器是調(diào)節(jié)標(biāo)本與物鏡相對(duì)位置的裝置。

然后，光學(xué)部分主要包括目鏡和物鏡。區(qū)別于正置顯微鏡的是，倒置顯微鏡的物鏡在觀察用品的下方，有4～6個(gè)，其中，刻有“10×”符號(hào)的物鏡較短，為低倍鏡，刻有“40×”符號(hào)的較長(zhǎng)，為高倍鏡，最長(zhǎng)的是刻有“100×”符號(hào)的油鏡[2]。而且，在油鏡和高倍鏡上經(jīng)常會(huì)有一圈顏色不同的線，以示區(qū)別。目鏡裝在鏡筒的上端，目鏡上面分別刻有5×、10×、15×，表示其放大倍數(shù)，10×的目鏡較為常用。另外，顯微鏡的放大倍數(shù)是目鏡放大倍數(shù)和物鏡放大倍數(shù)的乘積，如物鏡為10×，目鏡為15×，其放大倍數(shù)就為10×15=150。

最后，照明部分分為透反射2種，透射式照明在載物臺(tái)的上方，提供明場(chǎng)、相襯、諾馬斯基干涉相襯等顯微術(shù)的照明；反射式照明安裝在物鏡的下方，提供熒光觀察、金相的明暗場(chǎng)觀察、偏振光觀察等；隨著高分辨成像技術(shù)的發(fā)展，研究級(jí)的倒置顯微鏡還配置了3～4個(gè)的外接照明端口，用于激光共聚焦、熒光漂白后恢復(fù)等模塊照明；通常倒置顯微鏡的照明系統(tǒng)均采用科勒照明，使均勻度達(dá)到80%以上。聚光器（集光器）的主要作用則是光線集中于所要觀察的標(biāo)本上，其由聚光鏡和光圈2部分組成，位于鏡臺(tái)下方的集光器架上[3]。

1.2 倒置顯微鏡技術(shù)的具體操作

在倒置顯微鏡操作中，最常用的觀察方法是相差。這種方法在觀察活細(xì)胞和微生物的時(shí)候不需要染色，是一種比較理想的觀察方法。在此基礎(chǔ)上，提供各種聚光器來滿足需要，可以觀察到具有高對(duì)比度和對(duì)比度的自然背景顏色圖像。以下我們敘述一下倒置顯微鏡的具體操作流程。首先接連電源開機(jī)，打開鏡體下方的電控開關(guān)。在使用的之前，先把要觀察的對(duì)象放在載物臺(tái)上，轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，選擇物鏡，然后進(jìn)行觀察，調(diào)節(jié)鉸鏈?zhǔn)诫p目目鏡到舒適的狀態(tài)為止，接下來開始推拉調(diào)節(jié)鏡下的亮度調(diào)節(jié)器至適宜光源狀態(tài)，再調(diào)節(jié)聚光鏡下面的光闌，調(diào)節(jié)光源大小。下一步是調(diào)節(jié)像距，即轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器選擇合適倍數(shù)的物鏡和目鏡的同時(shí)，調(diào)節(jié)升降來減小或消除圖像周圍的光暈，從而提高圖像的襯度。下一步就可以直接通過目鏡進(jìn)行觀察了，在觀察過程中可以調(diào)整載物臺(tái)，選擇想要觀察視野。最后一步是關(guān)機(jī)：取下觀察對(duì)象，使用光源亮度調(diào)節(jié)器把光線調(diào)至最暗；然后關(guān)閉鏡體下方開關(guān)，斷開電源，轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，把物鏡鏡片置于載物臺(tái)下側(cè)。

2 倒置顯微鏡技術(shù)的主要特點(diǎn)和應(yīng)用

2.1 倒置顯微鏡技術(shù)的主要特點(diǎn)

根據(jù)倒置顯微鏡的結(jié)構(gòu)分析和具體操作，我們可以發(fā)現(xiàn)倒置顯微鏡組成與普通顯微鏡相似，但其物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，倒置顯微鏡在觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞的時(shí)候，具有相差物鏡。倒置顯微鏡和放大鏡起的作用是相同的，就是把近處的一個(gè)微小物體放大成一個(gè)在人眼視力中清晰的圖像，但是，倒置顯微鏡比放大鏡的放大率更高。除了此特點(diǎn)，倒置顯微鏡的發(fā)展趨勢(shì)逐漸與光電轉(zhuǎn)換技術(shù)、計(jì)算機(jī)成像技術(shù)等技術(shù)結(jié)合，在使用中越來越方便靈活。根據(jù)其用途可以分為生物倒置顯微鏡、偏光倒置顯微鏡、金相倒置顯微鏡、熒光倒置顯微鏡等種類，在生物學(xué)、醫(yī)療科研等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

2.2 倒置顯微鏡技術(shù)的主要應(yīng)用

倒置顯微鏡種類較多，根據(jù)目鏡類別可分為單目倒置顯微鏡、雙目倒置顯微鏡和三目倒置顯微鏡，其中三目倒置顯微鏡的構(gòu)造中，除了用于雙眼觀察的兩目，還有一目可以用來外接數(shù)碼相機(jī)或計(jì)算機(jī)，從而組成數(shù)碼相型倒置顯微鏡、電腦型倒置顯微鏡，而電腦型倒置顯微鏡可以分為生物倒置顯微鏡和金相倒置顯微鏡，根據(jù)其不同構(gòu)造發(fā)揮的功能，不同的倒置顯微鏡應(yīng)用的領(lǐng)域也有所不同。以倒置生物顯微鏡和金相倒置顯微鏡為例，倒置生物顯微鏡適用于生物領(lǐng)域，可以用來觀察細(xì)菌以及活體組織培養(yǎng)、生物切片、流質(zhì)沉淀以及其他透明或者半透明物體、粉末、細(xì)小顆粒等物體，與普通生物顯微鏡相比較，倒置生物顯微鏡對(duì)附著培養(yǎng)皿底部和懸浮培養(yǎng)基中的活體物質(zhì)具有高效的觀察功能，另外，倒置生物顯微鏡在食品檢驗(yàn)、水質(zhì)鑒定、晶體結(jié)構(gòu)分析及化學(xué)反應(yīng)沉淀物分析等領(lǐng)域也能發(fā)揮巨大作用。金相倒置顯微鏡的物鏡在工作臺(tái)下方，在使用金相倒置顯微鏡的時(shí)候不需要考慮所觀察物體非觀察面的平整情況，并且由于倒置的結(jié)構(gòu)，工作臺(tái)面的上方比較空曠，也不用考慮所觀察物體的高低大小[4]。因此，金相倒置顯微鏡在金屬材料以及其它固體塊狀物體的工業(yè)企業(yè)研究中應(yīng)用廣泛。不過，在工作臺(tái)下方的鏡頭十分容易沉積灰塵，因此金相倒置顯微鏡使用者需要勤加保養(yǎng)，以免由于鏡頭的污漬影響觀察效果。

3 倒置顯微鏡技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)

綜合以上對(duì)倒置顯微鏡的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和主要應(yīng)用來分析，我們可以看出倒置顯微鏡能夠供高校科研實(shí)驗(yàn)、醫(yī)療衛(wèi)生單位等部門使用，可以用于細(xì)胞、微生物、細(xì)菌、組織培養(yǎng)、沉淀物、懸浮體等的觀察，能夠連續(xù)觀察并拍攝記錄細(xì)菌等生物在培養(yǎng)液中繁殖分裂的過程，在免疫學(xué)、細(xì)胞學(xué)、遺傳工程學(xué)、腫瘤學(xué)、寄生蟲學(xué)、工業(yè)微生物學(xué)、植物學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮十分重要的作用。接下來我們將根據(jù)倒置顯微鏡技術(shù)的具體應(yīng)用情況，可以看出倒置顯微鏡技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)主要體現(xiàn)在倒置顯微鏡本身儀器精化、計(jì)算機(jī)系統(tǒng)應(yīng)用于倒置顯微鏡技術(shù)和樣品制作方法3個(gè)方向，接下來我們將分析倒置顯微鏡技術(shù)在這3個(gè)方向的具體進(jìn)程。

首先，在倒置顯微鏡儀器本身方面，可以將單一功能的儀器逐漸發(fā)展為多功能組合的大型儀器，提高儀器的使用效率，并且不斷精化各個(gè)部件儀器，有效提高其分辨率，能夠使倒置顯微鏡技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中能夠觀察到更加精細(xì)的結(jié)構(gòu)，推進(jìn)微觀生物學(xué)的發(fā)展。其次，關(guān)于計(jì)算機(jī)技術(shù)與倒置顯微鏡技術(shù)相結(jié)合的方向，可以使科研能夠和信息時(shí)代的發(fā)展接軌，將計(jì)算機(jī)技術(shù)與倒置顯微鏡技術(shù)有效結(jié)合，促進(jìn)儀器的操作技術(shù)準(zhǔn)確化和科學(xué)化，促進(jìn)圖像分析技術(shù)高度自動(dòng)化，在方便倒置顯微鏡技術(shù)操作的同時(shí)，使倒置顯微鏡技術(shù)能夠更具有實(shí)用性和靈活性。最后，在樣品制作方面，要嚴(yán)格規(guī)范樣品制作的過程和環(huán)境，研制出特殊環(huán)境的樣品室和超高壓倒置顯微鏡，使用科學(xué)有效的方法，使研究的生物能夠在自然環(huán)境下完成動(dòng)態(tài)過程，并觀察到自然狀態(tài)下的生物形貌，提高觀察研究成果的質(zhì)量和效率。除此之外，在對(duì)倒置顯微鏡的保養(yǎng)方面，一定要注重各個(gè)零件構(gòu)造的清潔和養(yǎng)護(hù)，以保證儀器的使用性能，從而延長(zhǎng)顯微鏡的使用壽命。

1674年，列文？虎克研制發(fā)明出來了第一臺(tái)光學(xué)顯微鏡，從此以后，顯微鏡成為了人們觀測(cè)微觀世界的必不可少的工具，在各個(gè)學(xué)科領(lǐng)域中得到廣泛的應(yīng)用并發(fā)揮了巨大的作用。隨著科技的發(fā)展和社會(huì)的進(jìn)步，為了滿足各個(gè)領(lǐng)域科研對(duì)顯微鏡的需求，倒置顯微鏡技術(shù)作為一種新型的顯微鏡操作技術(shù)在各個(gè)科學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用后受到了極大的推崇。科學(xué)是沒有止境的，伴隨著倒置顯微鏡技術(shù)在生命科學(xué)教學(xué)、科研、醫(yī)療研究等方面的推廣，倒置顯微鏡技術(shù)會(huì)逐漸趨向成熟，使其在實(shí)際使用中更加方便靈活，具有更大的實(shí)用性和使用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1]沈思嗣，楊怡姝，王小利，李澤琳，曾毅. 配有電動(dòng)載物臺(tái)倒置顯微鏡的操作[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索，2010，29（12）：4-8.

篇9

        白血病是造血干細(xì)胞克隆性疾病，是一組高度異質(zhì)性的惡性白血病，嚴(yán)重威脅著人們的身體健康。急性白血病因分型不同，采用的治療方案也不同，療效和預(yù)后也不同[1]。急性白血病的診斷除依據(jù)臨床癥狀體征與血象外，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)是診斷急性白血病的主要依據(jù)和必要檢查。但是由于多種原因，導(dǎo)致白血病漏診、誤診的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。因此本文通過多媒體顯微成像技術(shù)在骨髓細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用，提高急性白血病的正確分型，從而更好的為白血病的診斷、確定治療方案、判斷預(yù)后、觀察療效服務(wù)。

        1 對(duì)象與方法

        1.1對(duì)象：選取56例臨床患者的骨髓片及外周血涂片進(jìn)行觀察。器材：大眾世紀(jì)dz-510多媒體顯微成像儀；xsp-2ca雙目普通顯微鏡;瑞氏-姬姆薩復(fù)合染液；玻片等。

        1.2 方法：（1）骨髓涂片：取有骨髓小粒部分，制備厚薄適宜、染色良好的骨髓涂片，同時(shí)做外周血涂片。（2）染色：采用瑞氏-姬姆薩復(fù)合染液進(jìn)行骨髓涂片染色。（3）顯微鏡檢查：嚴(yán)格按照先低倍鏡視野后油鏡觀察的步驟，分別用雙目普通顯微鏡及大眾世紀(jì)dz-510多媒體顯微成像儀進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析。

        2  結(jié)果

        2.1屏幕圖像與鏡下視野基本形態(tài)無異

        通過與普通光學(xué)顯微鏡下的視野進(jìn)行對(duì)比觀察，多媒體顯微成像分析系統(tǒng)可以清晰無損實(shí)時(shí)的顯示圖像，與鏡下觀察的視野基本形態(tài)無異，只是放大倍數(shù)增大。

        2.2屏幕圖像比普通顯微鏡下的更加生動(dòng)化化、清晰化

        通過采集裝置（數(shù)碼ccd攝像頭）獲取的圖像更加生動(dòng)、形象、直觀、動(dòng)態(tài)的反映在顯示器上，使檢測(cè)者更方便、清晰地觀察、診斷采集圖像，甚至在高放大倍率的條件下，能看到在普通光學(xué)顯微鏡下難以觀察或觀察不到的圖像。

        2.3能更快速、更準(zhǔn)確的觀察骨髓片及外周血涂片

        普通光學(xué)顯微鏡因受其放大倍率的限制，致使對(duì)骨髓涂片難于作出快速、準(zhǔn)確的判斷分析。多媒體顯微成像技術(shù)中的屏幕圖像更易于觀察，比鏡下目視更方便、更快捷，而且更有利于多人對(duì)血液病進(jìn)行共同分析判斷。

        2.4對(duì)疑似患有血液病患者的骨髓涂片進(jìn)行存儲(chǔ)、管理、傳輸

        多媒體顯微成像分析系統(tǒng)不但能進(jìn)行屏幕圖像觀察，更彌補(bǔ)了普通光學(xué)顯微鏡所不具有的存儲(chǔ)、管理、傳輸功能。它既可以建立大容量靜態(tài)圖片庫(kù)，可以無限保存采集下來的骨髓涂片和外周血涂片診斷結(jié)果，也可以通過圖像存檔與傳輸系統(tǒng)與醫(yī)院信息系統(tǒng)、個(gè)人健康檔案等聯(lián)網(wǎng)，實(shí)現(xiàn)復(fù)雜的查詢和全方位的統(tǒng)計(jì)，實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)遠(yuǎn)距離傳輸，進(jìn)行及時(shí)的會(huì)診和診斷疾病

        2.5多媒體顯微成像技術(shù)的應(yīng)用緩解了檢驗(yàn)工作者的眼疲勞

        作為檢驗(yàn)工作者，首先，持續(xù)的鏡下目視工作，易使睫狀肌和眼外肌處于高度緊張狀態(tài)，導(dǎo)致睫狀肌痙攣，調(diào)節(jié)不能放松，引起眼干、眼澀、眼酸脹，視物模糊甚至視力下降，還會(huì)引發(fā)和加重各種眼病；再者，神經(jīng)高度緊張會(huì)使眼睛發(fā)脹，視神經(jīng)功能慢性減退，直接影響著檢驗(yàn)工作者的工作與生活。屏幕圖像的直觀化、清晰化解決了普通顯微鏡難以觀察或觀察不到的現(xiàn)象，不但提高急性白血病的正確分型，更緩解了檢驗(yàn)工作者在繁雜工作中的眼疲勞。

        3  討論

篇10

白血病是造血干細(xì)胞克隆性疾病，是一組高度異質(zhì)性的惡性白血病，嚴(yán)重威脅著人們的身體健康。急性白血病因分型不同，采用的治療方案也不同，療效和預(yù)后也不同[1]。急性白血病的診斷除依據(jù)臨床癥狀體征與血象外，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)是診斷急性白血病的主要依據(jù)和必要檢查。但是由于多種原因，導(dǎo)致白血病漏診、誤診的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。因此本文通過多媒體顯微成像技術(shù)在骨髓細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用，提高急性白血病的正確分型，從而更好的為白血病的診斷、確定治療方案、判斷預(yù)后、觀察療效服務(wù)。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象：選取56例臨床患者的骨髓片及外周血涂片進(jìn)行觀察。器材：大眾世紀(jì)DZ-510多媒體顯微成像儀；XSP-2CA雙目普通顯微鏡;瑞氏-姬姆薩復(fù)合染液；玻片等。

1.2 方法：（1）骨髓涂片：取有骨髓小粒部分，制備厚薄適宜、染色良好的骨髓涂片，同時(shí)做外周血涂片。（2）染色：采用瑞氏-姬姆薩復(fù)合染液進(jìn)行骨髓涂片染色。（3）顯微鏡檢查：嚴(yán)格按照先低倍鏡視野后油鏡觀察的步驟，分別用雙目普通顯微鏡及大眾世紀(jì)DZ-510多媒體顯微成像儀進(jìn)行骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1屏幕圖像與鏡下視野基本形態(tài)無異

通過與普通光學(xué)顯微鏡下的視野進(jìn)行對(duì)比觀察，多媒體顯微成像分析系統(tǒng)可以清晰無損實(shí)時(shí)的顯示圖像，與鏡下觀察的視野基本形態(tài)無異，只是放大倍數(shù)增大。

2.2屏幕圖像比普通顯微鏡下的更加生動(dòng)化化、清晰化

通過采集裝置（數(shù)碼CCD攝像頭）獲取的圖像更加生動(dòng)、形象、直觀、動(dòng)態(tài)的反映在顯示器上，使檢測(cè)者更方便、清晰地觀察、診斷采集圖像，甚至在高放大倍率的條件下，能看到在普通光學(xué)顯微鏡下難以觀察或觀察不到的圖像。

2.3能更快速、更準(zhǔn)確的觀察骨髓片及外周血涂片

普通光學(xué)顯微鏡因受其放大倍率的限制，致使對(duì)骨髓涂片難于作出快速、準(zhǔn)確的判斷分析。多媒體顯微成像技術(shù)中的屏幕圖像更易于觀察，比鏡下目視更方便、更快捷，而且更有利于多人對(duì)血液病進(jìn)行共同分析判斷。

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2.4對(duì)疑似患有血液病患者的骨髓涂片進(jìn)行存儲(chǔ)、管理、傳輸

多媒體顯微成像分析系統(tǒng)不但能進(jìn)行屏幕圖像觀察，更彌補(bǔ)了普通光學(xué)顯微鏡所不具有的存儲(chǔ)、管理、傳輸功能。它既可以建立大容量靜態(tài)圖片庫(kù)，可以無限保存采集下來的骨髓涂片和外周血涂片診斷結(jié)果，也可以通過圖像存檔與傳輸系統(tǒng)與醫(yī)院信息系統(tǒng)、個(gè)人健康檔案等聯(lián)網(wǎng)，實(shí)現(xiàn)復(fù)雜的查詢和全方位的統(tǒng)計(jì)，實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)遠(yuǎn)距離傳輸，進(jìn)行及時(shí)的會(huì)診和診斷疾病

2.5多媒體顯微成像技術(shù)的應(yīng)用緩解了檢驗(yàn)工作者的眼疲勞

作為檢驗(yàn)工作者，首先，持續(xù)的鏡下目視工作，易使睫狀肌和眼外肌處于高度緊張狀態(tài)，導(dǎo)致睫狀肌痙攣，調(diào)節(jié)不能放松，引起眼干、眼澀、眼酸脹，視物模糊甚至視力下降，還會(huì)引發(fā)和加重各種眼?。辉僬?，神經(jīng)高度緊張會(huì)使眼睛發(fā)脹，視神經(jīng)功能慢性減退，直接影響著檢驗(yàn)工作者的工作與生活。屏幕圖像的直觀化、清晰化解決了普通顯微鏡難以觀察或觀察不到的現(xiàn)象，不但提高急性白血病的正確分型，更緩解了檢驗(yàn)工作者在繁雜工作中的眼疲勞。

3 討論

篇11

一半是技術(shù)，一半是生物

馬炯1999年進(jìn)入復(fù)旦大學(xué)物理系，2008年取得物理系光學(xué)專業(yè)博士學(xué)位。博士階段開始，馬炯就致力于發(fā)展光學(xué)技術(shù)與生物課題相結(jié)合的研究工作。期間他曾作為訪問學(xué)者前往南非羅德斯大學(xué)化學(xué)系和挪威奧斯陸大學(xué)生理系進(jìn)行學(xué)術(shù)交流。

在南非期間，他確認(rèn)水溶性CdTe量子點(diǎn)的光催滅機(jī)理，首次測(cè)定其單態(tài)氧產(chǎn)量，并開創(chuàng)出一種應(yīng)用于其實(shí)現(xiàn)光動(dòng)力治療癌癥的方法。2008年赴美從事博士后工作后，他一直致力于發(fā)展新型的單分子超分辨熒光顯微鏡，用于細(xì)胞核孔復(fù)合物的研究工作。在美國(guó)，馬炯與Yang教授共同開發(fā)了SPEED顯微技術(shù)，并在10nm空間精度和400μs時(shí)間精度下，研究了各類分子穿越細(xì)胞核孔的選擇機(jī)制。他首次觀測(cè)到細(xì)胞核孔內(nèi)非折疊蛋白的三維結(jié)構(gòu)，并首次獲得生物小分子穿越細(xì)胞核孔三維路徑，確定了其間的選擇性機(jī)制，并于2010年及2012年在Proceedings of the National Academy of Sciences上發(fā)表了兩篇高質(zhì)量論文。

馬炯還與Walter教授合作，開發(fā)應(yīng)用于超分辨顯微鏡的mRNA熒光標(biāo)記系統(tǒng)，結(jié)合單分子顯微追蹤技術(shù)，完成了mRNA穿越核孔的選擇機(jī)制的初步研究，確認(rèn)了mRNA核孔輸出三維路徑，糾正了一維路徑數(shù)據(jù)所造成的認(rèn)知誤解，并發(fā)表在Nature Communication上。

而談到技術(shù)和生物研究，馬炯說他從來沒有糾結(jié)兩者之間的取舍，而是始終游走在兩者的平衡之中。曾經(jīng)在南非和挪威做訪問學(xué)者的時(shí)候，他感到技術(shù)上偏重太多時(shí)，就在前去美國(guó)的時(shí)候有意識(shí)地加重了生物研究的選擇。技術(shù)是他的“技”，而生物就是他的“巧”。有技方成巧，通過超分辨率光學(xué)顯微鏡的技術(shù)不斷提高，他在細(xì)胞核孔復(fù)合物領(lǐng)域的研究也不斷加深；以巧推動(dòng)技，通過細(xì)胞核孔復(fù)合物實(shí)驗(yàn)研究的需求，他又不斷革新超分辨光學(xué)顯微鏡的技術(shù)。雙子的多面性，他展現(xiàn)在了科研領(lǐng)域中，并且大獲成功。

2015年6月，馬炯?xì)w國(guó)。他坦言，歸國(guó)的一部分原因是因?yàn)楣枢l(xiāng)的父母，另一部分則是國(guó)家現(xiàn)在對(duì)于青年學(xué)者的重視，能夠讓他在最有精力的時(shí)刻投入到科研中去。“能夠?yàn)閲?guó)家做一點(diǎn)事情，國(guó)家也重視我做的事情，這當(dāng)然是再好不過了?！瘪R炯笑言。

超分辨光學(xué)顯微鏡下看世界

顯微鏡的發(fā)展?jié)M足了人們對(duì)觀察微觀世界的需求，讓人們可以看得越來越“小”。但由于衍射極限的存在，幾十年來光學(xué)顯微鏡的分辨率停滯在了200nm左右。2014年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)?lì)C發(fā)給了美國(guó)及德國(guó)三位科學(xué)家Eric Betzig、Stefan W. Hell和William E. Moerner，獲獎(jiǎng)理由是“研制出超分辨率熒光顯微鏡”。幾位獲獎(jiǎng)?wù)咔擅钤O(shè)計(jì)了避開衍射極限的方法，其研究突破性地將光學(xué)顯微鏡帶入了納米維度。在納米顯微鏡下，科學(xué)家實(shí)現(xiàn)了活體細(xì)胞中單個(gè)分子通路的可視化，能夠觀察到分子是如何在大腦神經(jīng)細(xì)胞之間生成神經(jīng)突觸；可以追蹤帕金森病、阿爾茲海默癥和亨廷頓癥患者體內(nèi)相關(guān)蛋白的累積情況；還能跟蹤受精卵在分裂形成胚胎時(shí)蛋白質(zhì)的變化過程?，F(xiàn)在已經(jīng)進(jìn)入了“光學(xué)顯微鏡2.0”的時(shí)代，超分辨熒光顯微鏡推動(dòng)著新一輪生物醫(yī)學(xué)的飛速發(fā)展。

現(xiàn)今，已具有多種不同超分辨成像技術(shù)實(shí)際應(yīng)用于生物系統(tǒng)的范例，也已出現(xiàn)了商業(yè)化的超分辨顯微鏡系統(tǒng)，但仍然沒有達(dá)到完美狀態(tài)。在許多生物研究中，各類超分辨系統(tǒng)有著各自的局限性，如對(duì)于特殊熒光標(biāo)記的發(fā)光特性依賴，或是高空間精度測(cè)量制約了探測(cè)時(shí)間進(jìn)一步縮短。因此，研究和發(fā)展合適新的原理和方法，研制出適合專項(xiàng)生物課題研究的顯微鏡將是今后發(fā)展的一大方向。

談起二維到三維的超分辨退卷積計(jì)算開發(fā)的時(shí)候，馬炯說起了一個(gè)有意思的故事：他做出這個(gè)開發(fā)之后，花了整整一個(gè)星期的時(shí)間說服他的老師來相信他的成果，因?yàn)樗睦蠋煾緹o法想象有人可以做出從二維分布中獲取系統(tǒng)的三維分布的開發(fā)。而當(dāng)他的老師認(rèn)可了他的成果，他和他的老師又開始一起說服領(lǐng)域里的其他研究者一起應(yīng)用這項(xiàng)成果的相關(guān)研究人員?！斑@告訴我們，固化思維的可怕?？萍家M(jìn)步，科研人員要?jiǎng)?chuàng)新研究，首先就要從打破自己的固有傳統(tǒng)認(rèn)知開始?！瘪R炯嚴(yán)肅地說。

歸國(guó)后的馬炯將開始著手建立顯微鏡第二平臺(tái)熒光返還探測(cè)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)兼具超高的時(shí)間和空間分辨率的三維分子熒光追蹤系統(tǒng)。他將把研究中所獲得的信息將與跟蹤RNA輸出細(xì)胞核孔的研究互相印證，通過分析RNA在細(xì)胞核孔各位置的高時(shí)空精度動(dòng)態(tài)過程，進(jìn)一步研究細(xì)胞核孔蛋白調(diào)控基因的機(jī)理。此外，研究中所發(fā)展的原理和方法還將能夠被廣泛用于毫秒量級(jí)甚至更快的纖毛內(nèi)分子運(yùn)輸、細(xì)胞間分子交換及跨膜通道開關(guān)等生物問題的研究。

在研究中，馬炯將采用創(chuàng)新技術(shù)，促使實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)同時(shí)具有很高的時(shí)間和三維空間分辨率，在不影響平面二維光學(xué)分辨精度的前提下，不通過擬合點(diǎn)擴(kuò)散函數(shù)，而在亞毫秒級(jí)時(shí)間分辨量級(jí)和10nm三維空間分辨量級(jí)，實(shí)現(xiàn)對(duì)三維單分子熒光信息的實(shí)時(shí)探測(cè)和分析，滿足高速動(dòng)態(tài)生物學(xué)研究的特點(diǎn)和條件。在新型光學(xué)系統(tǒng)中，他還將利用凹面鏡返還光程無色差的光學(xué)原理，創(chuàng)新設(shè)計(jì)凹面鏡熒光返還光路系統(tǒng)，能夠?qū)方向信息轉(zhuǎn)換成x-y水平方向的信息，從而獲取單分子z方向的位置信息。

細(xì)胞核孔復(fù)合物探尋

在細(xì)胞核孔復(fù)合物的研究中，馬炯將利用SPEED顯微鏡技術(shù)，完成各類FG屏障與各類主要的傳輸分子間反應(yīng)區(qū)域的三維分布測(cè)量。細(xì)胞核孔復(fù)合物是真核細(xì)胞中連接細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核之間的選擇性雙向通道，控制著絕大部分細(xì)胞核所需的蛋白輸入，以及核內(nèi)基因物質(zhì)的輸出?？梢哉f，核孔是細(xì)胞內(nèi)基因調(diào)控中非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。核孔的缺陷會(huì)導(dǎo)致核孔相關(guān)的白血病及阿爾茲海默癥等疾病。其本身更是各類病毒侵入細(xì)胞的重要關(guān)口之一，各類病毒會(huì)通過不同的方式通過核孔，最終侵入細(xì)胞的基因表達(dá)系統(tǒng)導(dǎo)致疾病發(fā)生。核孔的結(jié)構(gòu)與功能的研究將為各類基因調(diào)控機(jī)制的研究提供一環(huán)重要的依據(jù)，對(duì)核孔蛋白缺失相關(guān)的白血病、阿爾茲海默癥的致病機(jī)制，以及各種類病毒的侵入機(jī)制等核孔相關(guān)病理機(jī)制或基因治療提供關(guān)鍵信息。

一個(gè)NPC是由30種多不同的核孔蛋白構(gòu)成，長(zhǎng)約200nm、直徑為120nm、中心內(nèi)徑為50nm的大分子復(fù)合物。其中有三分之一的核孔蛋白富含苯丙氨酸-甘氨酸（FG）氨基酸片段，且在自然狀態(tài)下呈現(xiàn)出非固定形態(tài)，我們稱之為FG-Nups。這些FG-Nups組成了具有選擇性機(jī)制的FG屏障。FG屏障選擇性地調(diào)控基因相關(guān)物質(zhì)按照被動(dòng)運(yùn)輸或者主動(dòng)介入運(yùn)輸?shù)姆绞竭M(jìn)出細(xì)胞核：只有小于60kDa的分子才能通過被動(dòng)運(yùn)輸?shù)姆绞?，自由擴(kuò)散通過NPC；另一種方式是主動(dòng)運(yùn)輸，如含有入核信號(hào)或者核孔輸出信號(hào)的蛋白或復(fù)合物分子，在核孔運(yùn)輸?shù)鞍讕椭?，形成?fù)合物，通過TRs與FG片段相互作用，從而通過FG屏障。TRs與需要傳輸?shù)牡鞍仔纬傻膹?fù)合物的結(jié)合與解離，通過細(xì)胞核內(nèi)外的RanGDP和RanGTP的濃度梯度來調(diào)節(jié)。通過電子顯微鏡可以觀察到細(xì)胞核孔結(jié)構(gòu)蛋白，但卻無法獲得這些高度自由的非折疊蛋白的結(jié)構(gòu)，所以至今在生理狀態(tài)下FG屏障及其相關(guān)的核孔物質(zhì)傳輸?shù)臋C(jī)理仍不清楚。

馬炯將利用SPEED顯微鏡技術(shù)，完成各類FG屏障與各類主要的傳輸分子間反應(yīng)區(qū)域的三維分布測(cè)量。他將確認(rèn)活細(xì)胞內(nèi)FG-Nup相互反應(yīng)的存在及相應(yīng)的水凝膠分布。綜合各反應(yīng)分布，完成接近完善的FG屏障的完整分布。他還將利用基因敲除，獲取缺失核孔蛋白的分布，理解其對(duì)白血病的致病機(jī)理及對(duì)腺相關(guān)病毒（AAV）基因療法的調(diào)控機(jī)制。從傳輸?shù)鞍组g的競(jìng)爭(zhēng)情況，了解細(xì)胞核孔在大通量物質(zhì)運(yùn)輸下對(duì)應(yīng)的優(yōu)先選擇機(jī)制。

達(dá)成這項(xiàng)研究的基礎(chǔ)，是SPEED顯微技術(shù)能在超短的時(shí)間內(nèi)獲得高精度的空間位置信息，調(diào)控光學(xué)設(shè)置的穩(wěn)定和準(zhǔn)確，以及對(duì)各不同分子不同擴(kuò)散速率下，在確保單分子熒光定位精度的同時(shí)，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件獲取最多的數(shù)據(jù)量，是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。擁有豐富的超分辨光學(xué)經(jīng)驗(yàn)，這讓馬炯能夠滿足數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及穩(wěn)定地產(chǎn)出量。據(jù)此，他將創(chuàng)新領(lǐng)先技術(shù)，努力實(shí)現(xiàn)分子競(jìng)爭(zhēng)通過核孔的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)創(chuàng)新。

未來故事

回國(guó)后的馬炯選擇了他的母校復(fù)旦大學(xué)作為科研工作的新起點(diǎn)。這里熟悉的環(huán)境讓他很快就進(jìn)入到了工作當(dāng)中并規(guī)劃新的征程。

首先，馬炯將繼續(xù)提升SPEED顯微技術(shù)的性能及推廣其應(yīng)用范圍。所有的對(duì)稱體系研究中，馬炯的SPEED顯微技術(shù)都可以推廣應(yīng)用。而在快速跟蹤領(lǐng)域中，這項(xiàng)技術(shù)也具有明顯優(yōu)勢(shì)。其次，他將繼續(xù)完善超快速的實(shí)時(shí)單分子三維追蹤。再次，馬炯將提高靜態(tài)單分子熒光定位下的超分辨圖像精度?，F(xiàn)在的主流超分辨顯微鏡是用了一種光開關(guān)蛋白來實(shí)現(xiàn)，這將會(huì)造成單位時(shí)間內(nèi)的信號(hào)光的損失。馬炯換了其他方式，利用分子運(yùn)動(dòng)進(jìn)特定區(qū)域時(shí)將這個(gè)分子可能發(fā)出的所有熒光進(jìn)行收集，從而提高靜態(tài)單分子熒光定位下的超分辨圖像精度。